表皮干细胞分化结膜上皮细胞基因检测实验探究

《表皮干细胞分化结膜上皮细胞基因检测实验探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、表皮干细胞分化结膜上皮细胞基因检测实验探究［摘要］目的通过实时RT-PCR方法检测经定向诱导分化的表皮干细胞分子生物学特性，探讨干细胞疗法用于眼表重建的可行性。方法实验组细胞以结膜上皮细胞为饲养细胞进行共培养，并设立空白对照组细胞培养相同时间，分别于第1、3、5、7天取各组细胞提取RNA进行实时RT-PCR定量检测B2-微球蛋白、角蛋白K13基因的表达水平。结果实验组细胞共同培养3d后出现B2-微球蛋白、角蛋白K13基因的表达，第5、7天的表达量显著提高(P<0.01)o结论经本实验方法定向诱导分化后表皮干细胞可表达与正常结膜

2、上皮细胞相类似的分子生物学特征。［关键词］皮肤干细胞；结膜上皮细胞；实时RT-PCR［中图分类号］R329［文献标识码］A［文章编号］1673-9701(2011)27-10-03StudiesonSpecifityDetectionofTransdifferentiationofEpidermalStemCelltoConjunctivalEpitheliumMENGFanjianlCHENJiaqi21.GuangzhouRedCrossHospital,Guangzhou510220,China；2.ZhongshanO

3、phthalmicCenter,SUNYat-senUniversity,Guangzhou510060,China[Abstract]ObjectiveTodetectthetransdifferentiationepidermalstemcellsusingrealtimeRT-PCR,andtoensurethefeasibilityofstemcelltreatmentonocularreconstruction.MethodsTheexperimentalgroupcellswereco-culturedwithth

4、econjunctivolepithelialcellsasthefeedercellswithsettingtheblankcontrolgroup・Thebothgroupswereculturedforthesametime,andafter1,3,5,7day(s)extractedtheRNAanddetectedtheexpressionofgenesbeta-2-microglobulinandkeratin13byreal-timeRT-PCRmethod.ResuItsSincethethirddayther

5、ewereexpressionofgenesbeta-2-microglobulinandkeratin13intheexperimentalgroup,andonthefifthandseventhdaytheexpress!onincreasedsignificantly(PV0.01).ConclusionThetransdifferentiationepidermalstemcellsinthisstudypossessedthesamebiologicalcharacteristicsasthenormalconju

6、nctivalepithelium.[Keywords]Epidermalstemcell；Conjunctivalepithelium；Real-timeRT-PCR表皮干细胞为皮肤组织中的专能干细胞，是一种成年组织干细胞[1],可增殖分化为表皮中各种细胞成分，保持皮肤正常的表皮结构。表皮干细胞的分化方式有两种：对称分裂和不对称分裂。前者分裂成两个和母细胞相同的子代干细胞；而后者则分裂成一个子代干细胞和一个与母细胞不同的短暂扩增细胞（TAC）[2],TAC属定向祖细胞。近年来干细胞疗法已成为治疗多种疾病的新途径，可替代、修复

7、、加强受损的组织或器官的功能[3]。本研究应用组织工程学技术将表皮干细胞体外定向诱导分化为结膜上皮细胞，通过对目的细胞生物特性的检测，探讨其在临床眼表结膜重建治疗中的应用前景。1材料与方法1.1材料1.1.1人皮肤材料包皮标本来自中山大学第一附属医院泌尿外科包皮环切术患者，无泌尿系统疾病感染，患者年龄18〜30岁，所取包皮标本均得到患者知情同意。1.1.2结膜组织取自尸体眼正常结膜组织。1.1.3试剂和仪器PCR用Taq酶采用TaKaRa公司的Ex-Taq；荧光定量试剂盒：SYBR（R）premixExTaqTM（Perfec

8、tRealTime）购自TaKaRa公司（美国）；TRIZOL®；ReagentRNA提取试剂盒购自Invitrogen公司（美国）；RNA提取反转录PCR试剂盒购自Promega公司（美国）；RoboCycler®；GradientTemperatureCycl