在体诱导表皮细胞去分化的初步实验研究

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1、在体诱导表皮细胞去分化的初步实验研究蔡飒付小兵雷永红韩冰郭永峰孙同柱王君李海红（解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室，北京100037）摘要：目的在体诱导表皮细胞去分化，探索与表皮细胞去分化有关的信号通路。方法包皮皮片去除皮下组织，用中性蛋白酶分离表皮，Ⅳ型胶原反复粘贴并牵拉表皮去除基底细胞层。处理后表皮片移植于裸鼠全层皮肤下，分别于3，5，7d取出移植皮片，采用免疫组织化学染色，流式细胞仪检测，Westernblot和RT-PCR等方法检测皮片移植前后表型的改变和ERKMAPK通路各信号分子表达的变化情况。结果去基底细胞层处理的表皮片干细胞标志物CK19和

2、b1整合素染色阴性；移植后5d，存活皮片CK19和b1整合素染色呈多层分布，而不是正常表皮中的单层分布。流式细胞仪检测结果显示，表皮片移植后CK19阳性细胞和β1整合素阳性细胞分别由移植前的0.00%和0.00%增加到7.54%和5.24%，而CK10阳性细胞由99.62%下降为86.56%。Westernbloting和PCR检测也证实CK19和b1整合素蛋白水平和mRNA水平表达在移植后明显增强。ERK及上下游信号分子（p-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2、和c-myc）表达增强。t-MEK1/2和t-ERK1/2移植前后表达无显著差异。结论处于终末分化

3、阶段的表皮细胞可以向干细胞状态逆转，这个过程可能与ERKMAPK信号通路有关。关键词：去分化；异种移植；表皮细胞；表皮干细胞；胞外信号调节激酶（ERK）中图法分类号：R329TheinvivostudyofdedifferentiationofepidermalcellsCAISa，FUXiao-bing，LEIYong-hong,HANBing，GUOYong-feng，SUNTong-zhu，WANGJun，LIHai-hong(WoundHealingandCellBiologyLaboratoryBurnsInstitute,TheFirstAffiliate

4、dHospitalofGeneralHospitalofPLA,TraumaCenterofPostgraduateMedicalCollege,Beijing100037,China)基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划）（2005CB522603）；国家自然科学基金（30500194）SupportedbytheNationalBasicResearchProgram(973Program)(2005CB522603)andtheNationgalNaturalScienceFoundationofChina（30500194）作者简介：蔡飒，女，福建省

5、晋江市人，博士，主要从事皮肤创伤修复与再生的研究。电话：（010）66867391，E-mail：cai_sa@sina.com.cn通信作者：付小兵，电话：010-66867396。E-mail:fuxiaobing@vip.sina.com9Abstract：Objectivetoinducededifferentiationofepidermalcellsinvivoandexplorethesignalingpathwayinvolvedintheprocess.Methodstheepidermisofhumanforeskinwasisolatedfrom

6、dermisbydigestionwithprotease,andthecellsinthestratumbasaleoftheepidermistogetherwithstemcellswereeliminatedbyrepeatedadhesiontocollagentypeⅣ.AfterbeinglabeledwithDAPI,thetreatedultrathinepidermalsheetsweretransplantedunderthefreshfull-thicknessskinwoundsmeasuringabout1cmindiameteronthe

7、backofathymicBALB/cnudemice.Thetransplantedultrathinepidermalsheetswereharvestedfromtherecipientnudemiceatd3,5and7afterxenotransplantation.Immunohistochemical,WesternblotandRT-PCRanalyseswereusedtodeterminethechangesinphenotypeandinERKsignalingpathwayofthexenografts.ResultsCK19