热损伤与碱性成纤维细胞生长因子联合处理诱导表皮细胞去分化的实验研究

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1、感染、炎症、修复2010年3旦第鲞箜塑·13··论著·热损伤与碱性成纤维细胞生长因子联合处理诱导表皮细胞去分化的实验研究蔡飒，。潘宇付小兵。王军孙同柱。雷永红。(1．深圳大学医学院组织学与胚胎学教研室，广东深圳518060；2．广州医学院病原生物学教研室，广东广州510182；3．解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室，北京100048)【摘要】目的：体外建立表皮细胞去分化模型，为深入阐明表皮细胞去分化过程奠定基础。方法：离体条件下选择热损伤与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为联合诱导因素处理成熟表

2、皮细胞。通过Giemsa染色和电镜观察细胞形态的改变；通过细胞培养和滋养层培养体系观察细胞的增殖能力，包括克隆形成和复层生长情况；采用器官培养体系体外构建三维皮肤，观察细胞再分化形成表皮情况；应用基因芯片技术观察细胞基因表达的改变。结果：经联合诱导后，细胞形态发生改变，表现为体积减小，细胞器数目减少，核浆比增大。增殖和再分化能力的改变体现在诱导后的表皮细胞能形成克隆，在滋养层培养条件下可以形成复层生长，并能够在体外构建出包括基底层和基底上层在内的表皮结构。基因水平的改变表现为与角质化相关基因下调和与有丝分裂相关

3、基因上调。结论：在热损伤与bFGF联合诱导下，已分化的表皮细胞会发生形态、功能和基因表达的改变，表现为干细胞的特性。关键词表皮细胞表皮干细胞去分化Dedifferentiationofhumaneplderm~keratinocytesinducedbycombinedheatandbasicfibroblustgrowthfactortreatmentCaiSa，PanYu，FuXiaobing，eta1．DepartmentofHistologyandEmbryology，FacultyofMedicine

4、，ShenzhenUniversity，Shenzhen，518060，Guangdong，China；BurnsInstitute，TheFirstHospitalAffiliatedtotheChinesePLAGenera1Hospital，Beijing100048，．ChinaAbstract0bjective：Toreproduceadedifferentiationofepidermalcellsmodelinvitroforthepurposeofclariflingtheprocessofde

5、differentiationofepidermalcells．Methods：Matureepidermalcellswereexposedtoheatandbasicfibroblastgrowthfactor(bFGF)treatmentinvitro．Giemsastainingandelectronmicroscopicanalysiswereperformedtoobservethemorphologicalchange；theproliferationcapacitywasassessedbytw

6、o-andfeeder-layerculturesystemsandtheredifferenti—ationpotentialbyorganotypiccultures；genechiptechnologywasutilizedtoanalyzethedifferencesingeneexpressionpro—filebeforeandafterinduction．Results：AfterexposuretoheatandbFGFtreatment，cellsrevertedfromadifferenti

7、atedtoadedifferentiatedstate．Theyshowedmorphologicalchangesincludingreductioninsizeandreductioninnumberofcellularorgandies．Theyalsoregainedastrongproliferationcapacity，andtheskinequivalentconstructedwiththesecellsshowedawell-organizedstructure，withkeratin14(

8、CK14)，CK19and171integrin-positivecellsinthebasallayer．Forthegeneexpressionprofile，genescontrollingcelladhesionandmitoticcellcyclewereupregulatedduringthereversalprocess，butthosecontrollingcelldi