ns调节核糖体蛋白合成促进前列腺癌细胞增殖机制的研究

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1、分类号：R737.25学校代码：10062密级：学号：2012601083博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：NS调节核糖体蛋白合成促进前列腺癌细胞增殖机制的研究TITLETheStudyforMechanismofribosomebiogenesisMediatedbyNSfortheTumorigenesisandTumorProgressionofProstateCancer一级学科：临床医学二级学科：外科学泌尿外论文作者：齐士勇指导教师：徐勇教授天津医科大学研究生院二O

2、一五年五月分类号：R737.25学校代码：10062密级：学号：2012601083学位类别：科学学位专业学位√学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：NS调节核糖体蛋白合成促进前列腺癌细胞增殖机制的研究TITLETheStudyforMechanismofribosomebiogenesisMediatedbyNSfortheTumorigenesisandTumorProgressionofProstateCancer一级学科：临床医学二级学科：外科学泌尿外论文

3、作者：齐士勇指导教师：徐勇教授导师组成员：张志宏乔宝民主任医师张昌文讲师杨阔副主任医师刘冉录副教授天津医科大学研究生院二O一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、

4、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要目的探讨NS调节核糖体蛋白合成对前列腺癌细胞增殖的影响，并明确其分子机制。方法首先，利用Oncomine数据库逐个检索RP(ribosomalprotein,RP)在良性前列

5、腺增生（Benignprostatichyperplasia,BPH）组织与PCa（Prostatecancer,PCa）组织中表达的差异；然后，收集国人的PCa及增生组织标本，提取RNA反转录行RT-qPCR检测以上核糖体蛋白mRNA的表达水平；进而，挑选了核糖体大小亚基蛋白中RP差异表达最为明显的两个，通过westernblot检测二者在PCa组织中的蛋白表达情况，并分析其与PCa患者临床病理特征以及PSA生化复发的关系。构建NS低表达PC3细胞系，通过蔗糖梯度离心检测NS低表达后对核糖体大小亚基生

6、物合成的影响；通过RT-qPCR检测NS低表达后核糖体蛋白mRNA水平表达情况；筛选变化最明显的核糖体蛋白，通过体内、外实验探讨该核糖体蛋白对PCa发生发展中的作用。构建c-Myc高表达PC3细胞系，再使用c-Myc小分子抑制剂10058-F4处理PC3细胞，通过RT-qPCR及Westernblot检测细胞中NS的表达水平，使用DCFH-DA探针检测细胞内ROS的水平；用H2O2上调PC3细胞内的ROS，过氧化氢酶Catalase降低PC3细胞内的ROS，进而行westernblot及qPCR检测细胞

7、内的ROS对NS表达的影响；通过细胞计数法及MTT分别检测c-Myc、ROS及NS对PC3细胞增殖能力的影响。结果通过Oncomine网络数据库分析，我们发现在PCa组织内存在核糖体大、小亚基蛋白的高表达，其中RPS蛋白有15种、RPL蛋白有14种。我们通过RT-PCR检测这些核糖体蛋白在国人PCa及前列腺增生组织内的表达时，发现在国人PCa组织中各有11种RPS和RPL存在差异性表达，其中RPS2和RPL36的表达差异性最为显著。我们分别分析了RPS2和RPL36与PCa患者临床病理学资料的关系，发现

8、此二种蛋白与患者的病理及预后密切相关。降低PC3细胞中NS的表达水平后核糖体大亚基合成受抑制；RT-qPCR结果显示NS低表达后大亚基核糖体蛋白mRNA水平均下调；其中RPL19下调最为明显，其在蛋白水平的变化和NS具有一致性；靶向沉默PC3细胞中的RPL19后，发现PC3细胞增殖减慢、I凋亡增加且侵袭能力减弱；体内实验显示，沉默RPL19后，PC3在裸鼠体内的成瘤能力下降。上调PC3细胞内的c-Myc可同时上调细胞内ROS和NS的mRNA