microrna-181a调控缺氧复氧诱导下心肌细胞的凋亡

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1、分类号：民５４１．４单位代码；１０４４０密级：公开学号：２０１２２２００３？矮透掌巧硕±学位论文Ｍ－、ｉｃｒｏＲＮＡ１８１ａ调控缺氧／复氧诱导下也肌细胞的调亡Ｍ－－ｉｃｒｏＲＮ４１８１ａｒｅｕｌａｔｅｓｈｉｔｉｉ＞ｇｙｐｏｘａ／ｒｅｏｘｙｇｅｎａｏｎｎｄｕｃｅｄｃａｒｄｉｏｍｏｃｔｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｙｙ研究生：陈赵路指导教师：马津稍教授、血管病专业名称：肉科学（屯）所在院（系）：临床医学院—二０—二二０五年王月十八曰入学日期年九月Ｓ日论文完成日期：：独创性声明本人声明所呈交的论

2、文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得滨州医学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＾＾＾＾时间！户年ｒ月日研究生签名；＾；方＾＇Ｉ关于论文使用授权的说明本人完全了解滨州医学院有关保留、使用学位论文的规定，艮Ｐ：学校有权保留送交论文的复印件和电子材料，允许论文被查阅和借飼；学校可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论

3、文的全部或部分内容，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）。＇＾研究生签名／导师、：啦＼巧时麻坏月方日目录一摘要１中文摘要１英文摘要３缩略词表５二弓６Ｉ言Ｈ政８１资料与方法８２结果２０３讨论３１４结３４四参考文献３５五文献综述％六致谢５０滨州医学院硕±学位论文Ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ１８１ａ调控缺氧／复氧诱导下瓜肌细胞的渭亡中文摘要目的－ｃｒｏＲＮＡ－探讨ｍｉ１８１ａ（ｍｉＲ１８１ａ）对缺氧／复氧诱导下

4、大鼠也肌细胞株拟ｃ２稠亡的作用及其机制。背景大量的研究结果证实细胞洞亡在也肌缺血再灌注损伤的病理生理上是一个主要事件、、。因此，寻找有效的方式来抑制屯肌细胞调亡对防治屯肌缺血再灌注损伤ｃ－２基具有及其重要的意义。Ｂｌ因的研究是细胞调亡研巧领域中最为热口的课题之一一Ｂｃ－ｌ２，但是目前对氧化应激条件下的转录后调控机制并没有充分阐明。种参与了调控也脏许多生理和病理过程的转录后调控机制便是ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）。作一一为非编码ＲＮＡｎｏｎ－ｃｏｄｉｎ家族新成员之的ｍ类长度约为２２个ＮＡｉＲＮＡ是（ｇＲ）核巧酸的调控性小ＲＮＡ分

5、子，它可通过ｍＲＮＡ的剪切和抑制蛋白质翻译的方式负调控靴基因。方法ｃ－２表达的ｍＲＮＡｓ通过生物信息学软件筛选出可调控Ｂｌｉ。建立Ｈ９ｃ２细胞缺Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｃ氧／复氧模型，通过检测Ｂｌ２蛋白表达变化，巧光定量ＰＣＲ检测一－１８－ｍｉＲ１ａ表达变化。进步，构建Ｂｃｌ２的巧光素酶报告载体，双费光素酶报告－基因系统检测焚光素酶的表达变化。采用体外合成的大鼠ｍｉＲ１８１ａ的模拟物（ｍｉｍｉｃ巧日抑制剂粗化化ｉｔｏｒ，用脂质体转染培养的Ｈ９ｃ２细胞４８小时后，缺氧／复）氧处理细胞，实验分为４组：正常对照组（ＣＴＬ）、缺氧／复氧沮（Ｈ

6、／Ｒ）、缺氧复氧加ｍ－－ｉＲ１８１ａ的模拟物组如ｉｍｉｃ、缺氧复氧加ｍｉＲ１８１ａ的抑制剂組（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ。采用））试剂盒检测乳酸脱氨酶－（ＬＤ出及丙二醒（ＭＤＡ）水平ＤＣＦＨＤＡ法观察细胞内活性氧；ＲＯＳ）的变化水平ＪＣ－ＴＵＮＥＬ（；１试剂盒检测细胞线粒体膜电位的变化；法检测－ｅｓｔ－各组细胞调亡；Ｗｔｅｒｎｂｌｏ分析各组调亡关键蛋白Ｂｃｌ２、Ｂａｘ、ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ３的表达量的变化。１滨州医学院硕±学位论文结果－－－生物学软件预测ｍｉＲ１８１ａ可调控Ｂｃｌ２蛋白的表达，在缺氧／复氧模型中Ｂｃｌ２

7、－蛋白的表达明显下调，而ｍｉＲ１８１ａ的表达上升近４倍。成功构建双巧光酶素报告载体Ｗ及突变体，实验姐的报告巧光比对照组明显下降巧＜化〇１，而突变体的巧（）光强度下降不明显。与Ｈ／Ｒ组相比，ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ姐内细胞的ＬＤＨ、ＭＤＡ、ＲＯＳ、Ｂａｘ、ａｓｅ－－２的表达ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐ３蛋白、调亡率下降，而细胞内线粒体膜电位水平及Ｂｃｌ量升高（Ｐ＜〇．〇５。ｍｉｍｉｃ组却括抗了上述变化。）结论、ｍ化－１ａｃ２１８能够増加氧化应激条件下Ｈ９ｃ２也肌细胞损化促进拟也肌细胞ｍ－－１１渦亡，ｉＲ８ａ遁过调控Ｂｄ２蛋白的表达，在