ddx19a识别prrsv基因组rna并激活nlrp3炎症小体

《ddx19a识别prrsv基因组rna并激活nlrp3炎症小体》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、密级：论文编号:中国农变科学院学位论文DDX19A识另ljPRRSV基因组RNA并激活NLRP3炎症小体DDX19ASensesPRRSVGenomicRNAandActivatesNLRP3fnflammasome硕士研究生.•胡亮指导教师：翁长江研宄员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研宄方向：兽培养单位：哈尔滨兽医研究所中国农业科学院研宄生院2015年S月密级:论文编号:中国农业科学院学位论文DDX19A识别PRRSV基因组RNA并激活NLRP3炎症小体DDX19ASensesPRRSVGenomicRNAandActivatesNLRP3Inflamm

2、asome硕士研究生：胡亮指导教师：翁长江研究员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物及其分子生物学培养单位：哈尔滨兽医研究所中国农业科学院研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationDDX19ASensesPRRSVGenomicRNAandActivatesNLRP3InflammasomeM.S.Candidate：HuLiangSupervisor：Prof.WengChang-jiangMajor：PreventiveVeterinaryM

3、edicineSpecialty:VeterinaryMicrobiologyandMolecularBiologyMay2015摘要猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSvirus,PRRSV)引起的一类严重接触性传染病，主要引起怀孕母猪流产、早产、死胎、木乃伊胎及仔猪呼吸道疾病等症状。2006年爆发的由高致病PRRSV(highlypathogenicPRRSV,HP-PRRSV)引起的以高热、高发病率和高死亡率为特征的高致病PRRS给我国的生猪产业

4、造成了难以估量的经济损失。HP-PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(pulmonaryalveolarmacrophages,PAMs)，诱导促炎性细胞因子的大量分泌，引起严重的肺部炎症症状。我们实验室前期研究结果证明弱毒株CH1a、CH1R和疫苗毒株HuN4-F112均不能诱导IL-1β和TNF-α的分泌，而HP-PRRSV毒株HuN4和SDA2却均能诱导这些细胞因子的高水平表达和分泌，表明强弱毒株诱导炎症反应的能力不同。IL-1β作为最重要的炎症介质之一，在启动和放大炎症反应，清除感染，加速组织修复，活化保护性免疫反应等过程中发挥重要作用。大量研究表明，HP-PRR

5、SV感染可以诱导IL-1β的分泌，但是，具体的分子机制还不清楚。本研究从分子水平探究HP-PRRSV感染诱导IL-1β分泌的机理。IL-1β的成熟需要两个信号：第一信号由细胞编码的模式识别受体（Patternrecognitionreceptor,PRRs）启动NF-κB信号通路活化，促进pro-IL-1β的产生；第二信号由病原相关分子模式(Pathogen-associatedmolecularpatterns,PAMPs)或危险相关分子模式(DamageAssociatedMolecularPatterns,DAMPs)介导炎症小体激活，引起pro-caspa

6、se-1活化及pro-IL-1β成熟分泌。本研究证明，HP-PRRSV感染可以诱导pro-caspase-1的活化以及pro-IL-1β的切割成熟。深入研究发现HP-PRRSV感染可以诱导NLRP3炎症小体复合物的形成。敲低NLRP3的表达显著抑制PRRSV感染诱导的pro-caspase-1活化和IL-1β分泌。随后的研究发现HP-PRRSV基因组RNA可以诱导较高水平的IL-1β分泌，证明HP-PRRSV基因组RNA及其5ʹUTR转录物均可以诱导NLRP3炎症小体的激活。敲低NLRP3的表达显著抑制HP-PRRSV基因组RNA及其5ʹUTR转录物诱导的IL-1

7、β分泌。本研究用大量数据证明了HP-PRRSV感染可以激活NLRP3炎症小体，且发现HP-PRRSV基因组RNA就足以激活NLRP3炎症小体，其诱导IL-1β分泌与病毒的复制过程无关。病毒RNA可以诱导NLRP3炎症小体的活化，但是目前还没有任何证据证明NLRP3炎症小体的组分可以直接识别病毒的RNA。因此，我们推测细胞内可能存在未知的病毒RNA受体分子。利用HP-PRRSV感染猪PAMs为模型，通过抗ASC抗体免疫共沉淀试验和串联质谱分析鉴定出了DDX19A。我们发现DDX19A与NLRP3炎症小体复合物中的NLRP3相互作用，而不与ASC和caspase-1相

8、互作用。进