crisprcas系统与志贺菌耐药的关系

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1、学校代码10459学号或申请号201212272847密级公开硕士学位论文CRISPR/Cas系统与志贺菌耐药的关系作者姓名：王琳琳导师姓名：段广才教授学科门类：医学专业名称：流行病与卫生统计学培养院系：公共卫生学院完成时间：2015年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheRelationshipBetweenCRISPR/CasSystemandDrugResistanceinShigellaByLinlinWangSupervisor:Prof.GuangcaiDuanEpide

2、miologyandBiostatisticsCollegeofPublicHealthMay2015学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研宄所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研宄作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：if极？#<曰期：年月y曰学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门

3、或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：曰期：二年《月1摘要摘要志贺菌属是感染性腹泻的主要病原体之一，引起菌痢。目前，菌痢的治疗主要依赖于抗生素，随着抗生素的滥用，志贺菌频繁变异，不断产生耐药株，基因的水平转移（horizontalgenetransfer,HGT）是细菌获得耐药性的主要方

4、式。研究发现成簇的规律间隔的短回文重复序列（Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats,CRISPR）广泛存在于细菌和古细菌的基因组中，其由重复序列（repeat）和间隔序列（spacer）构成，与cas（CRIPSPRassociated）组成CRISPR/Cas系统，靶向裂解侵入的外源基因，限制HGT。目的本研究通过检测志贺菌的CRISPR/Cas系统、耐药表型及耐药基因，分析CRISPR/Cas系统与耐药的关系；并分析接合转移及诱导耐药前后CRISPR/Cas系统的变化，为深入阐明志贺菌中CRISPR

5、/Cas系统对耐药的调控提供依据。方法复苏并鉴定实验室保存的59株志贺菌，改良Kirby-Bauer法检测耐药表型、PCR扩增耐药基因、cas，PCR扩增CRISPR并测序，CRISPRtarget、BLAST分析spacer与质粒的同源性；ClustalX2.1、BioEdit分析接合转移及诱导耐药前后志贺菌中CRISPR/Cas系统的变化。结果1.59株志贺菌对AM、CF、TE、C、SXT及NOR的耐药率分别为59.32%、27.12%、72.88%、50.85%、67.80%、16.95%，多耐药率为57.63%。8种耐药基因tem、oxa、tetA、tetB、

6、sul1、sul2、cat及qnrA的阳性率分别为100%、59.32%、86.44%、84.75%、89.83%、76.27%、83.05%、77.97%。2.CRISPR1、CRISPR2和CRISPR3的阳性率分别为79.66%、84.75%、83.05%；每株志贺菌至少含1个CRISPR，组成4种CRISPR谱型（A-D），其中A和B型含cas基因簇cas2-cas1-cas6e-cas5-cas7-cse2-cse1-cas3。3.CRISPR1、CRISPR2的spacer数目及IS与多耐药的分布差异均有统计学意义，且多耐药株CRISPR1、CRISPR2

7、的spacer数目多为较少的2条、1条，其CRISPR/Cas系统中多存在IS。4.CRISPR1、CRISPR2与oxa、tetA之间的差异均有统计学意义，且CRISPR1、I摘要CRISPR2阴性志贺菌均携带oxa，而tetA的携带率较低；IS与oxa、sul2及cat之间的差异有统计学意义，且相应耐药基因阳性菌株的CRISPR/Cas系统中多存在IS；CRISPR1、CRISPR2的spacer数目与oxa、tetA、sul2、cat之间的差异均有统计学意义，且相应耐药基因阳性的菌株中，CRISPR1、CRISPR2的spacer多为较少的2条