黄芪甲苷对缺糖缺氧复糖复氧大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞的保护机制研究

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1、单位代码１０４７５申请编音１０＂５３１２１１０８分类号Ｒ９６６續為大聲硕±学位论文黄庚甲巧对缺糖缺氧复糖复氧大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞的保护机制研究？ｒ＿■＊■？４：学科、专业：微生物与生化药学研究方向：微生物与生化药学申请学位类别．；医学硕±－申请人：趋清辉指导教师；鹿晓斌副教授二〇－五年五月关于学位论义独立完成和内容创新的声巧人向河南大学提出硕壬学位申请：巧呈交的学位论无是本。本人部重声明人独立完戍的。据我所知，除本在导师的指导下，对巧研究的课题有新的见解丈中特别加

2、ｄ说明、标注和致谢的化方外，论丈中不包括其化人己经发表或撰写过的研究戍果，也不色括其化人为跋得巧柯教育、科研机构的学位或化书而化巧过的材料一同工巧的同事对本研究巧收的化何贡献均已在论丈申许。与我了巧确的化巧并表示了谢意。乂：学位申请人（学位也文作者）签法鸦碟寺年ｒ月ｒ曰关于学位论交著作权使巧授权书本人结河南大学审掠批准搜子巧去学位。巧油学位论丈的巧者，本人完全留，了解并同意河南大学有共保、使用学位论丈的要求即河南大学有权向国家图书馆本校国书馆等提供学位论丈（組质丈、科研信息机构、觀据收集机相和公众检人授权河出宣杨、展见学校ｋ、。南大学于丈

3、本）乂惧查巧本本和电子索描贝刺、担和拷等手荒展目的可Ｗ東取影印、缩印复进行交流等，学术和学术义本和屯子丈本。位论丈（池）段保冉、汇瑞质学及保容论丈在解息适巧本授权书）（密内的学位密涉左获得者（柱佑丈）签：Ｉ均许者学位学也寺—■＾口曰２日ｆ年月之／位论丈指教师菩邊：減■导学內曰２０年ｔ月ｆｔProtectionmechanismsofendothelialcellsandglialcellsAstragalosidetoOGDcomplexsugarreoxygenationbrainmicrovesselsADissertationSubmitte

4、dtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByZhaoQinghuiSupervisor:Prof.PangXiaobinMay,2015摘要目的：探讨黄芪甲苷对缺糖缺氧复糖复氧SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞的保护作用及其作用机制。方法：对SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞的原代培养及分离，用连二亚硫酸钠建立SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧模型，黄芪甲苷对大鼠脑微血管内皮细胞的毒性实验，黄芪甲苷对

5、内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧损伤复供模型形态学影响，MTT法与LDH漏出率法检测不同浓度黄芪甲苷预处理的SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧后的成活率，用SOD、MDA检测试剂盒检测不同浓度黄芪甲苷预处理的SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧后SOD、MDA的变化，AO/EB法检测黄芪甲苷对缺糖缺氧/复糖复氧胶质细胞凋亡的影响，用RT-PCR法检测不同浓度黄芪甲苷预处理的SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧后细胞HIF-1α、Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA表达的变化，用蛋白免疫印记法检测不同浓度黄芪甲苷预处理的SD大鼠脑微

6、血管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧后细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果：成功培养并分离了SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞，成功筛选了各细胞缺糖缺氧/复糖复氧模型的条件。黄芪甲苷预处理后缺糖缺氧/复糖复氧的SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞成活率均提高。黄芪甲苷预处理后缺糖缺氧/复糖复氧的SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞SOD活力均增高，黄芪甲苷预处理后缺糖缺氧/复糖复氧的SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞MDA含量均下降，AO/EB法检测结果显示黄芪甲苷可以抑制胶质细胞凋亡。不同浓度黄芪甲苷预处理的SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧后细胞HIF-1

7、αmRNA表达均增高，Bcl-2mRNA表达均增高,BaxmRNA表达均下降，Caspase-3mRNA表达均下降，不同浓度黄芪甲苷预处理的SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧后细胞Bcl-2蛋白表达均增多，Bax蛋白表达均降低。结论：黄芪甲苷对缺糖缺氧复糖复氧SD大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞的具有保护作用，其作用机制可能与抑制细胞凋亡的HIF-1α,Bcl-2基因表达增多和促进细胞凋I亡的Bax,Caspase-3基因表达下降有关。关键