盐酸戊乙奎醚对大鼠缺氧缺糖-复氧复糖海马脑片凋亡相关因子表达的影响

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1、盐酸戊乙奎醚对大鼠缺氧缺糖/复氧复糖海马脑片凋亡相关因子表达的影响作者：王允，马腾飞，孙晓晶，王毅刚，秦伟，谷淑玲【摘要】目的研究盐酸戊乙奎醚(penehyclidinehydrochloride，PHC)对大鼠缺氧缺糖/复氧复糖海马脑片的保护作用及机制。方法采用大鼠海马脑片缺氧缺糖/复氧复糖模型;分为正常组、缺氧缺糖/复氧复糖(H/R)组、PHC2μmol/L(PHC2组)、PHC10μmol/L(PHC10组)、PHC50μmol/L(PHC50组)、Sco50μmol/L(Sco50组)，测量各组LDH释放率

2、，免疫组织化学法测定各组海马CA1区Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。结果PHC各组LDH释放率均较H/R组下降，以PHC50组效果最好(P<0.01)。PHC50组Bcl-2阳性细胞的表达和Bcl-2/Bax比值均较H/R组升高,Bax和Caspase-3阳性细胞表达均较H/R组降低(P﹤0.01)。Sco50组Bcl-2阳性细胞的表达和Bcl-2/Bax比值也较H/R组升高,Bax和Caspase-3阳性细胞表达均较H/R组降低(P﹤0.01)。结论PHC可能通过减少LDH释放和Caspase

3、-3、Bax的表达，增加Bcl-2的表达减轻大鼠缺氧缺糖/复氧复糖海马脑片的损伤。【关键词】海马脑片;缺氧缺糖/复氧复糖;盐酸戊乙奎醚;乳酸脱氢酶;大鼠　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofpenehyclidinehydrochloride(PHC)ontheapoptosisofrathippocampalslicesinducedbyhypoxia/hypoglycemiaandreoxygenation(H/R)andtheunderly

4、ingmechanism.MethodsExperimentalmodelofhypoxia/hypoglycemiaandreoxygenation/glucoserEintroductionpalslices,ol·L-1(PHC2)group,PHC10μmol/L(PHC10)group,PHC50μmol/L(PHC50)groupandSco50μmol/L(Sco50)group.TheLDHreleaseratepalslicesinducedbyH/R.TheexpressionofBax,Bcl

5、-2andCaspase-3inhippocampalCA1fieldofeachgroupmunohistochemicalmethod.ResultsparedightattenuatetheH/R-inducedinjuriestohippocampalslicesbyreducingthereleaserateofLDH,theexpressionofCaspase-3aspalslices;hypoxia/hypoglycemiaandreoxygenation;penehyclidinehydrochl

6、oride;lactatedehydrogenase;rat　　缺血性脑损伤发病机制非常复杂，近年认为脑缺血早期伴随着乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)大量释放，通过激动毒蕈碱M型胆碱受体加重脑损伤[1]。M型胆碱受体通常可将其分为M1～M55个亚型。M1受体主要存在于突触后膜，过度激活后可出现慢兴奋性突触后电位，产生兴奋性毒性作用。M2受体主要存在于突触前膜，对Ach释放产生负反馈调节作用，阻断M2受体会导致Ach的释放增多。因此，寻找选择性拮抗M1受体亚型而对M2受体亚型没有明显作用的抗胆碱药物可以

7、成为治疗缺血性脑损伤的策略之一。　　盐酸戊乙奎醚(penehyclidinehydrochloride，PHC)主要选择性拮抗M1、M3受体，对M2受体无明显作用，具有较强的中枢抗胆碱作用[2]。我们前期研究表明其对缺血性脑损伤具有保护作用[3]。但具体机制尚不明确，尤其是在海马脑片水平研究PHC对缺氧缺糖/复氧复糖后细胞凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2、Bax等表达的影响鲜有报道。因此，本实验以非选择性M受体阻断药盐酸东莨菪碱(scopolaminehydrochloride，Sco)为对照，通过研究P

8、HC对大鼠海马脑片脑缺血/再灌注损伤后凋亡相关因子的表达，探讨PHC对脑缺血的保护机制，为拓宽该药临床应用提供理论依据。　　1材料和方法　　1.1动物与试剂成年雄性SD大鼠，体重250～300g，由徐州医学院实验动物中心提供。Caspase-3抗体、SP试剂盒购自武汉博士德公司，Bcl-2和Bax抗体购自美国SantaCruz公司。盐酸东莨菪碱购自美国Sig