靓精对猪配子及胚胎发育的影响

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1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位（毕业）论文靓精对猪配子及胚胎发育的影响学位申请人：陈丹朔指导教师：李树静教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩曰期：二〇一五年五月三十曰独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：博、丹句签字円期〖

2、月7曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名:商躺导师签名:签字时间：年<月I曰签字时间：丨f年分类号：S814.3单位代码：10086密级：公开学号：2012339靓精对猪配子及胚胎发育的影响TheeffectofLiangjingtopiggameteandembryonicdevelop

3、ment学位申请人：陈丹朔指导教师：李树静教授学科专业：动物遗传育种与繁殖学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月三十日摘要人工授精技术能够降低猪养殖业的生产成本，从而提高经济效益，还可以通过推广优秀种公猪精液，加速品种改良。而精液的保存水平则是关乎人工授精技术效果的重要环节。目前，应用广泛的猪精液保存方法为常温保存法，为了更好的提高种公猪利用效率，推动人工授精技术的发展，猪精液的稀释保存也就成了最关键的技术。本实验主要研究药物靓精添加至精液稀释液中对于精子受精能力等指标的影响，但首先需要观察靓精对卵母细胞的影响，所以在卵母细胞成熟液M199中添加0.5%、0.75%、

4、1%三种不同浓度的靓精，将卵母细胞成熟培养1h后换至正常培养液中，最终与空白对照组进行成熟率比较，结果通过DAPI染色发现，三种浓度的靓精对猪卵母细胞的成熟均无不良影响；接着对经过含三种不同浓度靓精的成熟培养液培养成熟的卵母细胞和空白对照组的卵母细胞进行孤雌，比较卵裂率和囊胚率，结果发现卵母细胞成熟期间添加不同浓度的靓精不会影响卵母细胞孤雌后的胚胎发育能力，随后又通过囊胚TUNEL凋亡染色，发现囊胚总细胞数和凋亡细胞数在四组间也没有显著差异，进一步说明卵母细胞成熟期间添加靓精不会影响卵母细胞的后续胚胎发育能力。之后在孤雌后的胚胎培养液PZM-3中加入相同的三种浓度的靓精，培养4h后全部换至正常

5、胚胎培养液中继续培养，与空白对照组比较卵裂率、囊胚率以及染色后计算出的囊胚总细胞数和凋亡细胞数，结果显示卵裂率、囊胚率、囊胚总细胞数和凋亡细胞数在四组间都没有显著差异，说明胚胎在发育期间接触这三种浓度的靓精不会影响胚胎的发育能力。添加相同的三种浓度靓精至精液稀释液中，使用计算机辅助精液分析系统（CASA）检测经精液稀释液稀释后的精液的活率、A级+B级精子比例、直线运动精子活率、精子平均直线运动速度（VSL）、精子平均侧摆幅度（ALH）、精子运动直线性（LIN）、精子运动摆动性（WOB）、精子运动前向性（STR）等指标。分析后发现在30h时0.75%组的直线运动精子活率显著高于1%组，而与其他两

6、组间无显著差异。42h时0.75%组的精子活率显著高于对照组，而与0.5%及1%两组间没有显著差异；并且0.75%组的A+B级精子比例显著高于对照组和0.5%组；而0.75%组的直线运动精子活率显著高于其他三组。同时通过多因素方差分析和精子各项检测指标随时间变化的折线图发现随着存储时间的延长靓精添加浓度为0.75%的精子指标如精子活率、A级和B级精子的比例、直线运动精子活率、精子平均直线运动速度（VSL）、精子平均侧摆幅度（ALH）、精子运动直线性（LIN）、精子运动前向性（STR）等的变化幅度都比其他三组的相对应指标的变化幅度小，综合这些结果可以发现含0.75%浓度靓精的精液稀释液对于保存一

7、定时间的精液的效果更佳。使用含0.5%、0.75%和1%三种浓度靓精的精液稀释液稀释的精液和正常稀释液稀释的精液进行体外受精，发现无论是卵裂率、囊胚率还是囊胚总细胞数、凋亡细胞数，在四组间均无显著差异，这一结果与精子数据结合说明含0.75%靓精的精液稀释液能够维持保存一定时间的精液的运动能力和活率，但是没有提高体外受精的IV效果，而对于人工授精技术的效果影响仍需进一步研究。关键词：猪精液；靓精；精