青蒿琥酯通过神经酰胺合酶—神经酰胺通路抑制肝纤维发生

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1、分类号：R96学校代码：10062密级：学号：2012602074硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：青蒿琥酯通过神经酰胺合酶-神经酰胺通路抑制肝纤维发生TITLEEffectsofArtesunateoninhibitionofhepaticfibrosisthroughceramidesynthase-ceramidepathway一级学科：药学二级学科：药理学论文作者：杜岩指导教师：方步武教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R96学校代码：10062密级：学号：2012

2、602074学位类别：科学学位□√专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：青蒿琥酯通过神经酰胺合酶-神经酰胺通路抑制肝纤维发生TITLEEffectsofArtesunateoninhibitionofhepaticfibrosisthroughceramidesynthase-ceramidepathway一级学科：药学二级学科：药理学论文作者：杜岩指导教师：方步武教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导

3、下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，

4、在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要肝纤维化表现为肝脏细胞外基质（Extracellularmatrix,ECM）异常大量沉积，其生成大于降解，尤其是I型胶原大量沉积，若不采取治疗措施可发展为肝硬化甚至肝癌。在肝纤维化形成的进程中，其中心环节为HSCs的增殖和激活，活化的HSCs增殖显著、胶原分泌增多，细胞外基质的沉积与其降解失去平衡，肝脏功能受到破坏。近年来随着对肝纤维化发病原因及机制研究的

5、深入，提出肝纤维化是可逆转的。治疗肝纤维化的药物有很多种，本文选用青蒿琥酯作为工具药。目的探讨青蒿琥酯影响肝星状细胞产生神经酰胺的作用，初步揭示神经酰胺合酶-神经酰胺通路在青蒿琥酯抑制肝纤维发生中的作用。方法1、选用体外培养的人源肝星状细胞LX-2为实验对象，实验分为细胞对照组、青蒿琥酯组、油酰乙醇胺组及两药合用组，采用MTT法测定LX-2的增殖，比色法检测各组LX-2上清中乳酸脱氢酶活性，应用HPLC-FLD法对LX-2上清中神经酰胺（C2）的含量进行测定，WesternBlot法检测各组中PPAR-γ、p5

6、3、Caspase-3蛋白的表达，酶消化法测定羟脯氨酸的含量。2、LX-2为实验对象，实验分为细胞对照组、FumonisnB1组、青蒿琥酯组及青蒿琥酯与FumonisnB1合用组，MTT法检测各给药组对LX-2增殖的影响，WesternBlot法测定神经酰胺合酶（LASS2）的表达，HPLC-FLD法测定各给药组LX-2上清中神经酰胺（C2）的含量变化，WesternBlot法检测与LX-2增殖及凋亡相关的PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表达，酶消化法测定羟脯氨的含量。结果1、与细胞对照组比较，青

7、蒿琥酯各剂量均可显著抑制LX-2的增殖，差异具有统计学意义（P<0.05），且抑制作用呈剂量依赖性及时间依赖性；不同浓度的青蒿琥酯作用于LX-224h后，LX-2上清中LDH的活性与细胞对照组比较，无显著性差异（P>0.05）；青蒿琥酯可显著增加LX-2上清中神经酰胺的含量，且具有剂量依赖性，差异具有统计学意义（P<0.05）；青蒿琥酯能使PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表达增加，与细胞对照组比较，差异均具有统计学意义（P<0.05）。羟脯氨酸的含量随着青蒿琥酯浓度的增加而降低（P<0.05）。油

8、酰乙I天津医科大学硕士学位论文醇胺可呈剂量依赖性地抑制LX-2的增殖（P<0.05）；油酰乙醇胺各剂量组LX-2中LDH的活性与细胞对照组比较，无显著性差异（P>0.05）；与细胞对照组比较，LX-2上清中神经酰胺水平显著上升（P<0.05）；PPAR-γ、p53、Caspase-3蛋白的表达随着油酰乙醇胺浓度的增大而增加，各剂量组中羟脯氨酸的水平均降低（P<0.05），且两药合用药物