长双歧杆菌ncu712高密度培养及菌剂制备技术研究

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1、分类号:密级：UDC：学号：.5615213208南昌大学专业学位研究生学位论文长双歧杆菌NCU712高密度培养及菌剂制备技术研究StudyontheTechnologyofHighCellDensityCultureandAgenfsProducingofBifidobacteriumLongumNCU712杜曼培养单位（院、系）：食品学院生物工程系指导教师姓名、职称：熊涛教授指导教师姓名、职称：彭冬英高级工程师专业学位种类：工程硕士专业领域名称：生物工程论文答辩日期：2015年5月30曰2015年5月30日学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进

2、行的研宄工作及取得的研宂成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：<十1签字日期：xjr年5月/日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库讲行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复

3、制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)签字日期：>^年<月丨日签字日期：年月日摘要摘要双歧杆菌被普遍认为是人类胃肠道中益生菌群的重要组成部分，对人类肠道疾病的防治及微生态平衡的调节尤为重要。双歧杆菌在人体内的数量逐年减少，为保证其益生作用的全面发挥，双歧杆菌微生态制剂及其发酵食品的研究逐渐成为热点。双歧杆菌直投式发酵剂的研究工作主要解决了双歧杆菌在体外培养

4、难以得到浓度高、活性好、可直接用于工业生产的难题，本文主要研究了双歧杆菌高密度培养技术及真空冷冻干燥菌粉的制备工艺。本文主要研究内容如下：1.长双歧杆菌NCU712(BifidobacteriumLongumNCU712，后文均简写为B.longumNCU712)最佳增殖培养基配方研究。根据双歧杆菌NCU712的生长特性，以MRSC培养基为基础，利用单因素实验确定葡萄糖、酵母提取粉、K2PHO4及低聚果糖为最佳成分并确定添加量。利用正交设计和均匀设计优化培养基组分和水平，通过对比两种优化结果，最终确定双歧杆菌NCU712最佳培养基的配方为：葡萄糖0.5%，酵母提取粉6.4

5、%，K2HPO40.3%，MgSO40.02%，MnSO40.005%，吐温-800.1%，L-半胱氨酸0.05%，低聚果糖0.5%。利用增殖培养基培养双歧杆菌NCU712，发酵培养20h，活菌数达到1.39×109CFU/mL。2.B.longumNCU712培养条件及罐上发酵策略的确定。通过单因素实验确定罐上发酵接种量为10%，培养温度为37℃，以氨水调节pH，维持在pH6.0。在最佳培养条件的基础上，根据双歧杆菌NCU712生长曲线的绘制结果，确定最佳收获时间为20h。采用高效液相色谱法研究培养过程中代谢产物变化，产生的有机酸组分主要为乳酸及乙酸。将化学中和法运用于

6、发酵罐上培养，发酵终点菌体浓度为3.8×109CFU/mL。3.高活性B.longumNCU712菌粉研制关键技术研究。基于高密度培养技术的研究，以存活率为比较标准进行优化，确定保护剂最终配方为：谷氨酸钠5%，葡萄糖5%，甘油3%，海藻糖5%。高密度发酵菌液4500rpm离心10min，加入保护剂，物料厚度6mm装入平皿，真空冷冻干燥20h。真空冷冻干燥制备的菌剂中活菌含量可达到3.3×1011CFU/mL，存活率高达89.26%，4℃环境最适合B.longumNCU712冻干菌粉的贮藏，贮藏60d后，菌粉内活菌含量仍可达到1.07×1011CFU/mL。II摘要关键词：

7、长双歧杆菌NCU712；增殖培养基；正交试验；高密度培养；真空冷冻干燥IIIAbstractABSTRACTBifidobacteriumisanimportantprobioticsinhumanintestinaltract,itisimportanttopreventhumandiseaseandadjusttheintestinalmicroecologicalbalance.Withthegrowthoftheage,thenumberofbifidobacteriumdecreasesgraduallyinthei