两歧双歧杆菌培养基成分的改进

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1、1/居述林乎雪奇马向前周德庆（微生物学和徽生物工程系》提要报据収歧杆菌的特殊生长要求及培养基的设计原则，在比较30余种现有取歧杆菌与乳酸菌培养基的基础上，设计了BIB培养基，并通过选择EIB中最适蛋白廉品种及增加适量泡菜汁•改进BIB为BIB-1.结果表明：每毫升BIB・1培养基培养两歧取歧杆菌ATCC29521所碍的最高活菌数约为其他培养基的10〜30倍.此外，还证明了研究中选用的=膜聂白脓•'所含的游离天冬猷胺、谷氨酸•鸟氨酸和瓜氨酸是促进两歧双歧杆菌ATCC29521生长的重要因子.关■词培养

2、逻」理歧双歧杆菌,單白冻;御菜比中图法分类号Q93-335「订"土千母自1899年Tisser从健康母乳喂养的婴儿粪便中分离到双歧杆菌后，由于它具有很强的保健作用⑴•一直吸引着细菌学家、医学家和营养学家们的兴趣.经过近百年的研究，双歧杆菌早已彼制成药品和不同类型的微生态调节剂.由于双歧杆菌生长较慢、严格厌氧和不易保藏等原因•使得它的应用受到一定的限制.长期以来•如何改善双歧杆菌的培养条件一直是双歧杆菌研究的一个重点•而培养基则是培养条件中一个很重要的方面•本文以典型的两歧双歧杆菌为对象•对其培养基成

3、分作了若干较有意义的改进.1材料和方法L1材料菌种：两歧双歧杆菌^Bifidobacterium如倒初?）ATCC29521:培养基：VL培养基⑵.LAB培养基C，SMRS培养基〔".BIB培养基：蛋白腺：普通蛋白K（Peptone,上海东海制药厂），胰蛋白腺（Tryptone•上海东海制药厂）•酪蛋白陈（CaseinPeptoneUSAICN・进口分装儿际蛋白腺（ProteosePeptone,上海东海制药厂）•植豚（Phytone.上海新兴医药保健品科技开发中心化工试剂部），多聚蛋白豚（Poly

4、peptone,浙江玉环红星生化制品厂人厌氧培养装置：825-A型厌氧罐（沈阳第五人民医院生产）•亨盖特试管及丁基橡胶塞；仪器：PHS-3DC精密数显酸度计丄KB4151氨基酸自动分折仪.收稿日期：1997—03—05第一作者居述林•男・1973年生•硕士研究生、联系作者周德庆，教授z复旦大学微生物和微生物工程系•上海200433*上海市高寻学校科学技术发展基金资助课题12方法双歧杆菌培养方法（1）菌种活化：取少量菌种接入装有9mlBIB培养基的亨盖特试管中，然后抽气、充氮•重复3次后•置37'C厌

5、氧培养24h.（2）在亨盖特试管中加入9ml所测培养基■接1ml活化菌液，置37'C厌氧培养•方法同上•双歧杆菌计数方法：用改进的马-周试管计数法讯，根据试样中含菌量的大小•前几支试管以0.9%生理盐水代替半固体培养基.泡菜汁的制作：用清水洗净新鲜胡萝卜表面•再用温开水洗3遍■切成片：把它与温开水配制的2%NaCl溶液1:1放入干净的泡菜坛中•液面距坛口约2〜3cm左右•加盖，用水封口；37"C培养36h后，取泡菜汁.2结果2・1B1B培养基与LAB.VL和MRS培养基的比较报据双歧杆菌特殊生长要求

6、皈及培养基设计原则〔门，我们在比较30余种文献中常用的双歧杆菌和乳酸菌培养基⑵的基础上，设计了以T.BIB培养基，其成分为：葡萄糖10g,乳糖10g，胰蛋白豚10g・酵母膏6g・牛肉膏6g-MgSO.・7HQ0・5g・吐温-801ml•泡菜汁15mhNa2HPO4・2HQ10g,KH2PO46g・加蒸18水至1000ml,pH7.0.以BIB为基础，与常用的LAB,VL和MRS作比较，结果见图1,图2•由图可看出•用BIB培养基培养两歧双歧杆菌ATCC29521在达到稳定期时，其活菌数（1・31X1

7、08）高于其他3种培养基.pH值F降也较慢•所以BIB培养基更适合于该菌株的生长.订8~匕~~衣走_?8"h3081524324048r/h图1A1CC29521菌株在B1B.LAB,图2ATCC29521菌蛛在B1B,LAB.MRS和VL培养基中的生长曲线MRS和VL培养基中pH值的变化2.2不同量白豚对ATCC29521菌株生长的影响在BIB培养基中，分别用6种不同的蛋白豚：普通蛋白BUPE）.#?蛋白M（TR）,酪蛋白牒（CP）•月示蛋白腺（PP）.植脈（PH）,多聚蛋白豚（PO）,培养ATC

8、C29521菌抹28〜30h,计数结果见表1.从表1看岀，其中以胰蛋白豚作用最好，故在以下实验中・BIB中的蛋白陈均采用胰蛋白晾«1不同M白对ATCC29521菌株生长的形哨10?cfu/ml蛋白藤PETRCPPPPHPO活菌数2.5331012156.0■2.34种待有ftXtt对ATCC29521菌株生长的影我们选择魏蛋白豚与普通蛋白腺，分别进行氨基酸自动分析，发现胺蛋白淼中含普通蛋白砾所没有的游离天冬酰胺、鸟氨酸和瓜氮酸•谷氨酸含量也远高于普通蛋白腺•结果见表2