赭曲霉毒素模拟抗原表位及phage elisa的建立

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1、分类号：（R155.5)密级：（无）学柃代码：（10414)__________^学号：（2012010725)•:3茶师忽犬学硕士研究生学位论文赭曲霉毒素模拟抗原表位及phageELISA的建立MimicEpitopeofOchratoxinAanditsApplicationinPhageELISA学生姓名：王吕院所：生命科学学院导师姓名：陈雪岚学科专业：生物化工研究方向：食品检测二〇一五年月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加

2、以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日缩略语(Abbreviations)OTA:OchratoxinA赫曲霉毒素AAFB1：AflatoxinB1黄曲霉毒素B1DON：Deoxynivalenol脱氧雪腐镰刀菌烯醇ZEN：Zearalenone玉米赤霉烯酮FB1：fumonisinsB1伏马毒素B1BSA：

3、bovineserumalbumen牛血清白蛋白CR：crossreactivity交叉反应率ELISA：Enzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附法HPLC：High-performanceliquidchromatography高效液相色谱HRP：horseradishperoxidase辣根过氧化物酶IC50：50%inhibitionbinding50%抑制率LD50：50%lethaldose半数致死量McAb：monoclonalantibody单克隆抗体OD

4、：Opticaldensity吸光度OVA:Ovumalbumin卵清白蛋白PBS:phosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PBST：0.05%Tween-20inPBS磷酸缓冲液+0.05%吐温-20PEG:polyethyleneglycol聚乙二醇RSD：relativestandarddeviation相对标准偏差TLC：Thin-layerchromatography薄层层析法TMB：Tetramethylbenzidine四甲基联苯胺UV：UltravioletDetect

5、or紫外检测器WHO：WorldHealthOrganization世界卫生组织ScFv：singlechainFvfragments单链抗体Fab：antigenbindingfragments双链抗体VHH：heavychainsingledomainantibody重链抗体PEG8000：Polyethyleneglycol8000聚乙二醇8000IPTG：Isopropylβ-D-Thiogalactoside异丙基硫代半乳糖苷X-Gal：5-Bromo-4-chloro-3-indolylβ-

6、D-galactopyranoside5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷Tet：Tetracycline四环素I摘要本研究以驴抗鼠二抗包被微孔板，然后进一步包被抗赭曲霉毒素A（OTA）单克隆抗体，利用噬菌体随机七肽库筛选赭曲霉毒素A模拟抗原表位，并以其替代检测抗原建立了phageELISA检测OTA方法。实验结果显示筛选获得的OTA7肽模拟氨基酸序列为GMSWMMA；基于模拟表位噬菌体建立的phageELISA方法检测OTA的IC50值为0.145±0.018ng/mL，线性范围为0.03～0.

7、50ng/mL，检测下限为0.020ng/mL，且与其它四种常见真菌毒素无交叉反应；大米样品OTA加标实验结果显示批內加标回收率为96.95%～115.2%，批间加标回收率为107.23%～123.13%；将phageELISA与商业化的ELISA试剂盒检测结果进行统计学分析，显示无显著性差异。以上结果显示本研究建立的phageELISA可用于赭曲霉毒素A的快速筛查。关键词：赭曲霉毒素A；噬菌体展示肽库；模拟表位IIAbstractThedonkeyanti-mouseIgGwasfirstlycoat

8、edontothewellofplates,andthenanti-ochratoxinAmonoclonalantibodies(anti-OTAmAbs)addedtobindwiththedonkeyanti-mouseIgGwereusedtoselectthemimicepitopeofOTAantigen.Theenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)forOTAwasdevelopedbas