茶树冷驯化过程中dna甲基化的变化分析及dna甲基转移酶基因csdrm2的克隆

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1、密级:论文编号:中囯农业利-学院学bi论文茶树冷驯化过程中DNA甲基化的变化分析及DNA甲基转移酶基因C?Z)i^f2的克隆ChangesofDNAMethylationDuringColdAcclimationandCloningofDNAMethyltransferaseGene(CsDRM2)inTeaPlant硕士研宄生.•周艳华指导教师：王_申请学位类别.•农学硕士专业：茶学研究方向：茶网资源与育种培养单位：中国农业科学院茶叶研究所中国农业科学院研宄生院2015年4月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果。尽

2、我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：丨〇时间：年y月>5日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研宄生签

3、名:时间：年y月％曰导师签名:时间：•年（月I日中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表厂紊树冷驯化过程中DNA甲基化的变化分析及DNA甲基转移酶基因论文题目&顶的克隆茶树资源与论文作者周艳华专业茶学研宄方向育种指导教师王新超培养单位（研究所）茶叶研究所硕（博）姓名职称单位专导师评硕导口博导口硕导口人答辩主席博导□硕导□生物化学与高其康研究员浙江大学博导口分子生物学论文答辩时间地点2015年5月]9日在茶叶所3号楼4楼中型会议室密级:论文编号:中国农业科学院学位论文茶树冷驯化过程中DNA甲基化的变化分析及DNA甲基转移酶基因CsDRM2的克隆Chan

4、gesofDNAMethylationDuringColdAcclimationandCloningofDNAMethyltransferaseGene(CsDRM2)inTeaPlant硕士研究生：周艳华指导教师：王新超申请学位类别：农学硕士专业：茶学研究方向：茶树资源与育种培养单位：中国农业科学院茶叶研究所中国农业科学院研究生院2015年4月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationChangesofDNAMethylationDuringColdAcclimationandClo

5、ningofDNAMethyltransferaseGene(CsDRM2)inTeaPlantM.S.Candidate：ZHOUYanhuaSupervisor：WANGXinchaoMajor：TeaScienceSpecialty:TeaGermplasmandBreedingApril2015摘要低温是影响植物生长和分布范围的重要环境因素。茶树（Camelliasinensis(L.)O.Kuntze）作为一种原产于热带及亚热带地区的重要经济作物，容易受到低温的伤害。茶树对低温的抵抗能力是在一段时间的低温驯化基础上获得的，这种抗寒性的获得与茶树本身的

6、遗传性相关，在低温驯化过程中某些与抗寒相关的基因发生变化从而对低温做出响应。DNA甲基化作为表观遗传修饰的主要途径之一，能够通过对基因组DNA的修饰参与到植物对外界环境胁迫的反应中去。本研究利用高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography,HPLC）和甲基化敏感扩增多态性技术（methylationsensitiveamplifiedpolymorphism,MSAP）分析不同冷驯化阶段茶树基因组DNA甲基化水平及模式变化。同时，克隆茶树中调控DNA甲基化的重要基因——甲基转移酶基因CsDRM2，并对其生物信息学特征进

7、行分析，研究它在茶树自然冷驯化过程中的表达模式，为探究DNA甲基化与茶树抗寒性之间的关系提供参考。主要研究结果如下：1.运用HPLC技术分析冷驯化不同阶段茶树基因组整体DNA甲基化水平的变化。结果显示，茶树基因组整体DNA甲基化水平在冷驯化不同阶段之间存在一定差异。不同阶段检测到的5-甲基胞嘧啶的百分含量在49%-51%之间，驯化前样品中的甲基化胞嘧啶含量最低，通过驯化及脱驯化后样品中甲基化水平升高。实验结果表明，低温能够诱导茶树DNA甲基化水平发生改变，且总体甲基化水平呈现出上升趋势。2.运用MSAP技术对不同冷驯化阶段的茶树叶片进行了DNA甲基化水平和甲基

8、化模式分析。结果显示，50对选择性扩增