玉米抗冷基因克隆及冷胁迫下dna甲基化变异的研究

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1、玉米抗冷基因克隆及冷胁迫下DNA甲基化变异的研究报告人：原亚萍单位：吉林大学植物科学学院日期：2013.8.25研究背景中国的主要玉米种植区研究背景吉林省冷害发生频率研究背景ChillingSvqeuu玉米在冷胁迫下会发生脱水、萎蔫，甚至死亡。2006年低温冷害保绿变紫紫----枯黄----死亡----产量室内模拟对照冷处理叶片变紫研究目的1.抗冷基因及功能？2.表观遗传变化？研究内容筛选抗冷自交系及抗冷标记转录组分析及抗冷基因克隆胞嘧啶甲基化分析PaqvI玉米抗冷自交系的筛选与鉴定抗冷自交系的筛选叶绿素含量相

2、对电导率6℃低温发芽4℃低温发芽抗冷自交系脯氨酸含量丙二醛含量幼苗低温处理可溶性糖含量田间验证6℃低温发芽材料：296份玉米自交系方法：6低温发芽，三次重复，统计其相对发芽率。结果：611天筛选自交系17份。4℃低温发芽6幼苗低温处理进一步筛选出抗冷自交系10份冷胁迫相关生理生化指标测定InbqeChloqoInjtqMDASoltblePqolindphyyutgaqelinellqavue4928.36685.70.743.7862.4993CK4920.200.473.0682.353925629.

3、5650.00.885.9172.71868CK5618.260.5464.4212.353425725.6775.00.554.3916.664低温处理后胁迫生理生化指标都有明显变化91CK25718.530.493.3253.705526620.35185.0.953.1552.358277地温测定35455cm30405cm253510cm3010cm20251515cm2015cm101520cm51020cm50Ground0GroundTemperature4.84.9Temperature4.10

4、4.114.124.134.144.154.164.174.84.94.104.114.124.134.144.154.164.178:00AM2:00PM16.014.05cm12.010cm10.08.015cm6.04.020cm2.00.0GroundTemperature4.84.94.104.114.124.134.144.154.164.179:00PM田间验证InbqeRepliReplicReplicAveqageGeqminaviondcavaveaventmbequqave(%)linee

5、IIIIIIu4931343533.383.35634323834.786.725730353433.082.51220262624.060.01919192922.355.82912151915.338.3319131512.330.83327323431.077.53912141513.734.26632333031.779.29223292826.766.77220085，220096重复验证抗冷性（出苗4.310.8率）开发抗冷分子标记EST(Expressedseqencetag)EST-PCR分子标

6、记Zm1-Zm3Zm4-Zm6Zm7-Zm9Zm10设计10对、筛选出3对EST-PCR分子标记.玉米抗冷种质资源的筛选与鉴定.杨光,刘宏魁,李世鹏,吴颖,苏胜忠,单晓辉,原亚萍(通讯作者）玉米科学，2012,20（1）:57-60PaqvII玉米抗冷基因的克隆与分析（冷胁迫下转录组分析）冷胁迫下基因表达分析cDNA-AFLPEcoRI/MueI112对PuvI/MueI224对cDNA-AFLP分析0h2h0h2h6h12hM6h12h0h2hM6h12h总RNA提取cDNA合成M0h0h2h2h6hM6h1

7、2h12h酶切预扩增cDNA-AFLP分析基因表达模式分类(441条TDF)诱导型，晚期诱导型，上调型，早期瞬时诱导型，快速抑制型，逐渐抑制型，下调型其他表达类型回收与测序差异片段再次PCR测序114条差异片段功能分类58条TDF与其它植物已知功能基因高度同源候选基因选择7个功能未知的候选基因E-LengvhomolPqimeqvTDFhogcombPqoveinau(bpy.lt)eRNaueLinhibivoq-likeAY093582e-M1/E1T1189pqovein344(Oqyzauaviva)S

8、EC14cyvouolicfacvoqNM_108e-familyM3/E1T152776171pqovein/phouphavaue34(Aqabidopuiuvhaliana)AY33247Recepvoq-likekinaue5e-M9/E6T442452(Aqabidopuiuvhaliana)28NM_12HEATSHOCKPROTEIN/ATP9e-M10/E4T49249