大丽轮枝菌dna甲基化酶基因vddim-2的克隆及功能分析

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3、＇‘．．＂；．．、＾：．；满：．：．被、吗霉麵誦；节；鲜：诞辭知＾；曲阜师范大学研究生学位论文独创性说明＂＂＂＂（根据学位论文类型相应地在□划Ｖ）本人郑重声明：此处所提交的博±〇／硕±囚论文《大丽轮枝菌ＤＮＡ甲基化酶基因Ｆ姐）／Ｍ－２的》克隆及功能分析，是本人在导师指导下，在曲阜师范大学攻读博壬□／硕王□学位期间独立进行研巧工作所取得的成果。论文中除注明部分外不包含他人己经发表或撰写的研究成果。对本文的研究王作做出重要贡献的个人和集体，均已在文中レッ明确的方式注明。本声明的法律结果将完全由本人承担。作者签

4、名：曰期：別可够１＾７三曲阜师范大学研究生学位论文使用授权声明《大丽轮枝菌ＤＮＡ甲基化酶基因Ｆ泡）／Ｍ－２的克隆及功能分析》系本人在曲阜师范大学攻读博硕±囚学位期间，在导师指导下完成的博±Ｄ／硕±囚学位论文。本论文的研究成果归曲阜师范大学所有，本论文的研究内容不得Ｗ其他单位的名义发表。本人完全了解曲阜师范大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部口送交论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅。本人授权曲阜师范大学，可ＬＪＸ采用影印或其他复制手段保存论文，可公开发表论文的全部或部分内容。

5、立作者签名：琴巧膨曰期：导师签名：曰期：＞（５．＾夜（３［摘要摘要大丽轮枝菌（Verticilliumdahliae）是引起棉花黄萎病（Verticilliumwilt）的主要致病菌之一，严重影响棉花质量和产量，对世界各大产棉国造成不可预计的经济损失。该菌通过土壤进行传播，寄主范围多达660种植物，因其对环境适应性强，变异性大而快，且致病机理复杂等特点，加大了对棉花黄萎病的防治难度。大丽轮枝菌在寄主侵染的过程中，需要分化产生分生孢子，然后由分生孢子通过维管束对寄主植物进行系统的侵染。研究发现，强致病力大丽轮枝菌比弱致病力大丽轮枝

6、菌产生更多的分生孢子，分生孢子的分化能力在大丽轮枝菌致病性中起了重要的作用。DNA甲基化酶DIM-2对模式菌株稻瘟病菌（Magnaporthegrisea）的产孢量起重要调控作用，并且参与病原菌侵染所必需的附着胞的分化过程；其基因缺失突变体菌株的致病力有所下降。模式菌株稻瘟病菌的研究思路和结果，可用来指导大丽轮枝菌的相关研究。以稻瘟病菌中编码DIM-2的序列MGG_00889为源序列，利用BLASTP程序对大丽轮枝菌基因组数据库进行序列相似性搜索，发现存在同源基因VDAG_00829。借助高效的基因敲除体系，构建大丽轮枝菌VdDIM-2基因缺

7、失突变体，然后观察突变体的表型、生长速率以及产孢量，并与野生型菌株相比较，以期探索DNA甲基化酶的缺失对大丽轮枝菌的形态及产孢量影响，试图在表观遗传水平为防治棉花黄萎病提供潜在的理论依据。结果显示该菌株在PDA培养基、CPK培养基和果胶培养基上的生长速率与野生型菌株Vd991相近，且菌落形态无明显变化。通过分析查比克培养基中两种菌液的产孢量，发现Vd991与∆VdDIM-2的产孢量高峰均在摇瓶培养后第6天，且产孢量没有明显的区别。对突变体菌株∆VdDIM-2的致萎能力进行测试，通过计算棉花病情指数发现：在发病15天后野生型菌株Vd991和突变

8、体菌株∆VdDIM-2的病情指数分别为34.6和28.2；在发病25天后野生型菌株和突变体菌株的病情指数分别为56.5和50.8。以上实验结果表明突变体菌株∆VdD