聚多糖脱乙酰酶基因家族vdpdaas在大丽轮枝菌中的功能分析

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1、分类号:密级：学号:2012107041单位代码：10759召河子大学碩士摩像铪式纖聚多糖脱乙酰酶基因家族以s在大丽轮枝菌中的功能分析学位申请人___________毛建才___________指导教师高峰副教授申请学位门类级别__________农学硕士__________学科、专业名称植物病理学研究方向分子植物病理学所在学院农学院中国•新疆•石河子2015年6月分类号：密级：学号：2012107041单位代码：10759石河子大学硕士学位论文聚多糖脱乙酰酶基因家族VdpdaAs在大丽轮枝菌中的功能分析学位申请人毛建才指导教师高峰副教授申请学位门类

2、级别农学硕士学科、专业名称植物病理学研究方向分子植物病理学所在学院农学院中国·新疆·石河子2015年6月FunctionalidentificationofpolysaccharidedeacetylasefamilyproteingenVdpdaAsinVerticilliumdahliaeADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByMao-Jiancai(PlantP

3、athology)Supervisor:Prof.GaoFengShihezi·Xinjiang·ChinaJune,2015石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论

4、文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要大丽轮枝菌(VerticilliumdahliaeKleb.)能够在多种植物包括棉花上引起萎蔫病害，对农业生产造成巨大的危害。但是由于棉花黄萎病属于土传维管束病害，病原菌传播途径多，存活时间长、生理小种变异多，抗病育种工作也相对滞后，所以棉花黄萎病的防治难度很大，至今还没有有效的防治措施。因此，本课题组利用农杆菌介

5、导的转化和同源重组等一系列分子生物学技术，对大丽轮枝菌中的功能基因进行深入研究。本研究在轮枝菌中发现一个聚多糖脱乙酰酶基因VdpdaA，通过在大丽轮枝菌基因组库中查找发现，该基因家族存在三个基因，依次命名为VdpdaA1、VdpdaA2和VdpdaA3，对该基因家族功能分析得知：该家族基因在大丽轮枝菌的生长、产孢形成、菌丝生长和致病性过程中起着重要的作用。研究结果如下：1、本研究从已构建的落叶型强致病力菌株V592的突变体库中筛选到一株黑色微菌核产生受阻、致病性下降的突变体J105。利用Southern杂交技术对筛选到的突变体进行初步研究发现，T-D

6、NA在该株突变体中属于单拷贝插入，利用TAIL-PCR等技术对该突变体进一步研究发现，一个编码聚多糖脱乙酰酶的（polysaccharidedeacetylasefamilyproteingen）基因VdpdaA1（VDAG-07142）的突变导致了突变体J105致病性显著下降，黑色微菌核产生受阻。2、通过在大丽轮枝菌基因组库中查找发现，该基因还同时存在着另外两个同源基因，分别是VDAG-07727和VDAG-09706，三个基因均属于一个基因家族，在本研究中，这三个基因被依次命名为VdpdaA1、VdpdaA2和VdpdaA3。以pRF-HU2载体

7、为基本骨架，成功构建了VdpdaA1、VdpdaA2和VdpdaA3的同源重组敲除载体。通过农杆菌介导的转化法（ATMT）转化大丽轮枝菌、DNA及RNA的杂交验证，每个基因分别得到2株敲除突变体△VdpdaA1-a、△VdpdaA1-b；△VdpdaA2-a、△VdpdaA2-b；△VdpdaA3-a和△VdpdaA3-b。3、敲除突变体△VdpdaA1、△VdpdaA2、△VdpdaA3在PDA培养基上的表型均为菌核型，在培养基的正面和背面都产生黑色的微菌核。三个基因的敲除突变体在产孢量方面都明显下降，敲除突变体△VdpdaA1的致病性明显下降且分

8、生孢子梗减少严重。qRT-PCR结果显示，这三个基因在野生型菌株V592中均具有组织表达特异性。以上结果显示