大丽轮枝菌微菌核发育异常突变体的筛选及其相关基因的鉴定

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1、ABSTRACTofVerticilliumdahliae．WecanBLASTontheNCBlwebsitetofindandanalyzetheT-DNAinsertionflankingsequencesandgeneswhichrelatedtomicrosclerotia．BasedonT-DNAsequenceanalysis，thegenedestroyedbyT-DNAinsertioninmutant2H3wasaconidialyellowpigmentbiosynthesispolyketides

2、ynthasegene，itsgenenumbersiSVDAG00190．1．Inordertocinfirmthegenefunction．theexperimentsofgeneknockoutandgeneticcomplementwerecarriedout．Formutant2H3，weobtained7complementtransformantsand6deletionUansformants．ThedestoiedgeneinmutantlC2whichrelatedaboutmicroscleroti

3、umdevelopmentwasahypotheticalproteingene，itsgenenumberisVDAG一01680．1．Weobtained1complementUansformantofmutantlC2．Inaddition，westudiedthemutants5G4and9G4．Becausethemutants5G4and9G4weretwocopiesT-DNAinsertion，onlyoneoftheT-DNAinsertionsiteswasfoundviathemethodsTAIL

4、．PCRorplasmidrescue．Theresultexplainedthatthedamagedgeneofmutant5G4isthedownstreamG931P828REl7．Thegeneexpressedsequencetags．9G4mutantgeneisalsoassumesthattheproteinmaybebroken，genenumberwasVDAG09865．1．Keywords：Verticilliumdahliae；T-DNAinsertionmutantlibrary；genec

5、omplemant；genedeletion目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一IABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．II：【第一章综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1大丽轮枝菌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1．1大丽轮枝菌的形态特征及致病特性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1．2大丽轮枝菌的定殖过程及其生活史⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1．3大丽轮枝菌的遗传学研究⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．1．4大丽轮枝菌基因组数据库⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．1．5不同培养基对大丽轮枝菌研究的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21．2大丽轮枝菌微菌核的相关研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2．1无机元素对大丽轮枝菌微菌核形成与萌发的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2．2不同pH、温度等对大丽轮枝菌微菌核生长的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2．3RNA-Seq法分析微菌核形成不同阶段的基因表达情况⋯⋯⋯⋯．41．2．4微菌核发育相关基因的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．2．5微菌核发

7、育相关基因敲除与回补研究相关技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．3本论文的研究目的和主要研究内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．3．1研究目的⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．3．2研究内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10第二章棉花黄萎病菌T-DNA插入突变体库的构建及微菌核发育异常突变体的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一122．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122．1．1试验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、．．122．1．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．162．2结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．222．2．1VBp2与V08DFIT-DNA插入突变体库的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．222．2．2微菌核发育异常突变体的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一232．