红鳍笛鲷和金焰笛鲷视蛋白的体外表达

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1、密学分类号：Q786级：公幵UDC：577号：2111201123广瘃海洋太考硕士学位论文红鳍笛鲷和金焰笛鲷视蛋白的体外表达朱惠敏指导教师：郭昱嵩副教授______________申请学位类别：理学硕士___________________专业名称：海洋生物学研究方向；海洋经济动物发育生物学学院名称：水产学院中国•湛江2015年6月红鳍笛鲷和金焰笛鲷视蛋白的体外表达I摘II要摘要红鳍笛鲷(Lutjanuserythropterus)和金焰笛鲷(Lutjanusfulviflamma)隶属于笛鲷科(Lutjanidae)、笛鲷属(LutjanusBloch)，属于近海暖水性鱼类，红鳍笛鲷生活于为

2、近底层而金焰笛鲷生活于浅水层，这两种鱼类都是经济价值比较的高捕捞品种。目前，国内外对笛鲷属鱼类的研究集中在在养殖技术、病理研究、环境胁迫、系统发育等方面，在视蛋白基因方面的研究甚少。本论文以红鳍笛鲷和金焰笛鲷为研究对象，对长波长敏感性视蛋白（LWS）和视杆蛋白（RH）进行原核载体构建和真核表达，主要结果如下：1、用特异性引物LWSF/R扩增出红鳍笛鲷目的基因LWS全长，并克隆到pMD-18T中，测序正确后，定向连接到原核表达载体pET-32a中，成功构建红鳍笛鲷LWS基因的原核表达载体并命名为pET-32a-LWS。2、用特异性引物ZLWSF/R扩增出两种笛鲷的LWS基因的开放阅读框，克隆到p

3、MD-18T中，测序验证后，定向连接到真核表达载体pPICZαA中，成功构建红鳍笛鲷LWS基因和金焰笛鲷LWS基因的真核表达载体并分别命名为pPICZα-LWS-Ler和pPICZα-LWS-Lfu。3、用特异性引物ZRHF/R扩增出两种笛鲷的RH基因开放阅读框，并克隆到pMD-18T中，测序正确后，连接到真核的表达载体pPICZαA中，经验证，成功构建红鳍笛鲷RH基因和金焰笛鲷RH基因的真核表达载体并分别命名为pPICZα-RH-Ler和pPICZα-RH-Lfu。4、将真核表达载体pPICZα-LWS-Ler、pPICZα-LWS-Lfu、pPICZα-RH-Ler以及pPICZα-RH-

4、Lfu经SacⅠ线性化后，电击转化进巴斯德毕赤酵母中，用甲醇30℃诱导，其中成功表达出目的蛋白红鳍笛鲷LWS，金焰笛鲷LWS和金焰笛鲷RH，并发现其最优的诱导时间为12h。而红鳍笛鲷RH诱导失败。关键词：红鳍笛鲷，金焰笛鲷，视蛋白，原核表达载体构建，真核表达IHeterogenousexpressionofLutjanuserythropterusandLutjanusfulviflammaopsinsAbstractRedsnapper(Lutjanuserythropterus)andDorysnapper(Lutjanusfulviflamma),belonginggenusLutjan

5、us,whichwerewarmwaternearthebottomofthecaseofoffshorefishspeciesofeconomicvalueforfishinghigherspecies.Opsinsplayacrucialpartinvisualimagingandenvironmentaladaptation.Atpresent,forsnapperfishathomeandabroadresearchfocusedonthebreedingtechnologyandpathologicalresearch,theenvironmentstressandsystemdev

6、elopment.Thereislittleresearchatthevisualproteingenelevel.Inthisstudy,redsnapperandDorysnapperastheresearchobject,usinggeneticengineeringtotwosnapperopsinslongwavelengthsensitiveandRhosopsintobuildProkaryoticexpressionvectorandeukaryoticexpression.Themainresultsareasfollows:1.UsingspecificprimersLWS

7、F/RamplificatoutthetargetgeneLWSofredsnapper,andthansendtotheShanghaiSagonCompany,insurethesequencingwascorrect,doubleenzyme,plasticrecyclingafterthatdirectedintothevectorPET-32a.Aftervalidation,makes