白念珠菌sac1蛋白的鉴定及其功能的研究

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1、：１００５５分类号：学校代码：１２密级；学号２１２００８９８達刻乂穿ＮａｎｋａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ论文题目；白念珠菌Ｓａｃｌ蛋白的鉴定及其功能的研究＞＼巧ｙ肺±韋位巧文ＮＭＡＳＴＥＲＴＨＥＳＩＳ＇生物学二级学科；微论文作者：张冰＾者Ｖ指县教肺：李明春教授＾刀旅雜＾南开大学研究生院２０１５年５月中图分类号：学校巧码：１００５５ＵＤＣ：密级：公开省匆乂寒硕±学位论文白念珠菌Ｓａｃｌ蛋白的鉴定及其功能的研究Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏ曰ａｎｄ

2、扣ｎｃｔｉｏｎａｌｓｔｕｄｙｏｆＳａｃｌｉｎＣ幻。成沁。化ｆｃ幻论文作者张化指导教师李明春教授申请学位巧学硕±培养单位生命科学学院学科专业微牛物学研究方向分子真菌学答辩委员会主席评阅人南开大学研究生院二零一五年五月南开大学学位论文原创性声明：所呈交的学位论文本人郑重声明，是本人在导师指导下进行研究工作所。取得的研究成果除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所。涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，

3、均己在文中Ｗ明确方式标明本学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。学位论文作者签名：年月日非公开学位论文标注说明（本页表中填写内容须打印）根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申请和相关部口批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本说明为空白。论文题目申请密级□限制（沒年）□秘密Ｇ１０年）□机密（含０年）保密期限２０年月日至２０年月日￣￣￣审批表编号批准日期２０＾ＢＩＩ南开大学学位评定委员会办公室盖章（有效）注：限制女２年巧少于２巧池密★１０

4、年巧少于１０年机密★ＳＯ年巧少于２０巧）；南开大学研究生学位论文作者信息论文题目Ｉ姓＾学号答辩曰期２０年月曰ＩＩ｜Ｉ论文类别博壬□学历硕±□专业学位硕±□同等学力硕丈□划巨选择］学院（单位）学科／专业（专业学位）名称ＩＩ联系电话电子邮箱ＩＩＩ通信地址（邮编）：非公开论文编号备注ＩＩＩ一、注：本授权书适用我校授予的所有博±硕±的学位论文。宙作者填写份并签字后交校围书馆，如已批准为非公巧学和＂＂位论文，额附批准通过的《南开大学研究生申请非公开学位论文审批表》非公开学位论文标注说明页。

5、摘要一白念珠菌是临床上最为重要的条件性致病真菌么。由于免疫缺陷人群的，白念珠菌引起的感染备受关注，不断增加。在与宿主相互作用的过程中白念珠菌进化出极为精细的形态发生及压力应答系统，能够有效定殖并抵御宿主免醇衍生物是真核细化极为重要的一，疫系统攻击。磯脂駒肌类小分子物质与细胞的信号转导、生长代谢调节紧密相关。在酿酒酵母及许多哺乳动物细胞中，一磯脂醜肌醇稱酸酶Ｓａｃｌ及其同源蛋白介导了礎脂醜肌醇磯酸或麟脂醜肌醇二，在肌动蛋白组装磯酸向磯脂醜肌醇的转化、细胞极性确立、细胞壁功能维持、ａｃｌ胞吞与胞吐等过程中扮演重要角色

6、。然而，白念巧菌的Ｓ蛋白及其功能至今ｌ尚未明确。本研究即对白念珠菌的Ｓａｃ蛋白进行分子鉴定及功能分析。主要结果如下：一（１）通过ＢＬＡＳＴＰ分析，从白念珠菌基因组数据库中鉴定出种与酿酒酵母况Ｓａｃｌ同源的蛋白，命名为Ｓａｃｌ。序列比对分析发现，该蛋白属于ＳＡＣ家族成员，具有保守的ＣＸｓＲＯＶＳ）基序及ＳＡＣ结构恥通过构建白念珠茜基因在酿酒酵母中的回补菌株，发现该基因能够回补酿酒酵母缺失造成茜Ｓｌ的肌醇营养缺陷，提示白念珠ａｃ蛋白参与了磯脂酷肌醇代谢。通过ＧＦＰ定ｌ，位技术，发现Ｓａｃ蛋白主要定位于内质网膜提示该蛋白与内质网功

7、能紧密相关。（２）采用两步ＰＣＲ介导的同源重组法，构建白念珠菌＆４Ｃ？基因的缺失菌。采用固体点板实验，发现基因的缺失造成株，在此基础上构建回补菌株白念珠菌对内质网压力及细胞壁压力药物高度敏感；酸性磯酸酶分析实验表明，基因的缺失导致白念珠菌的糖基化能力发生缺陷；几下质染色及透射电镜，该基因缺失导致细胞壁几了质分布与含量发生改变观察结果显示，Ｗ及细胞壁超显微结构异常；采用ＧＦＰ报皆系统及实时定量ＰＣＲ技术，发现该基因的缺Ｉ）基因表达的上调失导致非折叠蛋白应答（ＵＰＲ）基因及细胞壁完整性（ＣＷ。上述结果表明Ｓａｃｌ蛋白在內质网

8、及细胞壁完整性维持方面发挥重要作用。（３说Ｃ／基因缺失导致白念