猪卵巢卵母细胞体外受精的研究

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1、分类号：S821.3密级：公开UDC：编号：2015120906010832012级攻读硕士学位研究生毕业论文猪卵巢卵母细胞体外受精的研究StudiesonFertilizationinvitroofthePoreineooeytes指导教师：许生成教授郑新民研究院学生姓名：贾佩学科专业名称：基础兽医研究方向：高原动物繁殖生理学学院(系、部)：农牧学院论文日期：二零一五年六月QinghaiUniversityMasterDissertationStudiesonFertilizationinvitroofthePoreineooeytesSupervisor

2、:Prof.Sheng-chengXUCo-supervisor:Prof.Xin-minZhengCandidate:Pei-JiaAcademicMajorApplidedfor:HypoxicPhysiologyofPlateauSpecificMajor:BasicVeterinaryCollege(Department):QinghaiAgricultureandAnimalHusbandrycollegeJun,2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论

3、文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：2015年6月8日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权青海大学大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于：保密□不保密□（请在相应方框内打“√”），在_____年解

4、密后适用本授权书。学位论文作者签名：指导教师签名：日期：2015年6月8日日期：2015年6月8日摘要摘要本研究以废弃猪卵巢为实验初始材料，用机械法抽取获得未成熟卵母细胞，体外培养成熟后用于体外受精实验的研究。本文比较了影响猪卵母细胞体外受精的影响因素，以期能够进一步完善猪胚胎的体外生产体系，为胚胎技术的进一步发展提供技术保障。本研究包括以下内容：（1）比较在mTBM中添加不同浓度的咖啡因、不同受精时间及精子上浮时间对猪体外受精的影响。（2）比较猪卵母细胞体外不同成熟时间、受精过程中颗粒细胞的存在情况及低氧环境对猪体外受精的影响。（3）研究精子获能液中添加不

5、同浓度的Ionomycin及Ionomycin作用不同时间对猪体外成熟卵母细胞体外受精效果的影响。主要研究结果如下：1.以改良mTBM为基础液，添加咖啡因对受精胚胎的卵裂率和囊胚率有明显的促进作用，添加3mmol/L咖啡因组的受精胚胎卵裂率显著高于添加5mmol/L咖啡因组和未添加咖啡因组(P＜0.05)，且该组的囊胚率最高；精子上浮处理1h组的卵裂率和囊胚率均显著高于其它实验组(P＜0.05)；精卵孵育时间对受精胚胎卵裂率无显著影响(P＞0.05)，随受精时间延长至9h，受精胚胎的囊胚率显著降低。通过各实验组比较发现，受精液中添加3mmol/L咖啡因，精子

6、上浮1.0h，受精6h能得到较好的体外受精结果。2.体外成熟40～42h组的卵母细胞体外受精胚胎的卵裂率和囊胚率显著高于体外成熟培养36～38h组和46～48h组(P＜0.05)；保留2-3层颗粒细胞组与不脱颗粒细胞组的受精胚胎卵裂率和囊胚率差异均不显著(P＞0.05)，且这两组的实验结果显著高于无颗粒细胞组(P＜0.05)；就卵裂率和囊胚率而言，5%CO2组显著高于10%CO2组和15%CO2组(P＜0.05)。通过对各实验组的比较，卵母细胞体外成熟培养40～42h，保留全部颗粒细胞和气相环境为5%CO2能得到较好的体外受精结果。3.获能液中添加10μmo

7、l/L的Ionomycin能显著提高受精胚胎的卵裂率和囊胚率(P＜0.05)；用Ionomycin处理精子30min能获得较好的体外受精效果。关键词：猪卵母细胞体外受精IAbstractAbstractThisstudyhastakenabandonedporcineovarianfromslaughterhouseastheoriginalmaterials,obtainedimmatureporcineoocytesviamechanicalextractionmethodsandutilizedtheminIVF(InVitroFertilizatio

8、n)experimentsaftertheywere