溃疡性结肠炎及回肠贮袋肠道微生物屏障的实验研究

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1、分类号：R574学校代码：10062密级：学号：2012602818硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：溃疡性结肠炎及回肠贮袋肠道微生物屏障的实验研究TITLEResearchonintestinalmicrobialbarrierofulcerativecolitisandilealpouch一级学科：临床医学二级学科：外科学普通外科论文作者：王建林指导教师：刘刚主任医师天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R574学校代码：10062密级：学号：2012602818学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISS

2、ERTATION论文题目：溃疡性结肠炎及回肠贮袋肠道微生物屏障的实验研究TITLEResearchonintestinalmicrobialbarrierofulcerativecolitisandilealpouch一级学科：临床医学二级学科：外科学普通外科论文作者：王建林指导教师：刘刚主任医师天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中

3、作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：分析溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis,UC）及全结直肠切除、回肠贮袋肛管吻合手术

4、（ilealpouchanalanastomosis,IPAA）术后回肠贮袋的肠道微生物屏障变化，探讨UC及回肠贮袋炎发生的微生物学机制。方法：收集2013年7月~2014年7月在天津医科大学总医院普通外科和消化内科病房及门诊的UC患者和IPAA术后患者粪便标本，同时收集性别年龄相匹配的健康人粪便标本作为健康对照组。按照评估UC活动性的改良Mayo评分系统将UC组分为缓解期、轻度活动、中度活动及重度活动四组，按照回肠贮袋炎活动指数评分（PDAI）将IPAA术后组分为＜7分（无贮袋炎组）和7分及以上（贮袋炎组）两组。采用粪便基因组DNA提取试剂盒提取粪便基因组DNA，设计带有GC

5、片段的针对细菌16SrDNA基因V3区通用引物，采用TouchdownPCR技术对粪便基因组DNA进行扩增，将扩增后的PCR产物进行变性梯度凝胶电泳（DGGE），对DGGE条带进行切胶、回收、测序，确定各条带所代表的细菌种类。对DGGE条带进行多样性分析，采用quantityone软件对健康对照组、UC各组及IPAA术后各组进行Dice相似性分析及UPGMA树状图分析，采用Canoco软件对健康对照组、UC各组及IPAA术后各组进行主成份分析（PCA分析）。结果：健康对照组：健康人肠道菌群的16SrDNA基因V3区的DGGE图谱主要由16.63±2.872条优势条带（优势菌群）

6、组成；健康人肠道主要优势菌属以普氏菌属为代表的各种拟杆菌为主。UC各组：与健康对照组相比，UC患者肠道细菌多样性减少，且随病情加重而明显，差异具有统计学意义（p<0.05）；与健康对照组相比，UC患者肠道优势菌属种类分布发生变化，主要表现为有益菌或中性菌如普氏菌属等的减少和有害菌如致病性大肠杆菌等的增加；Dice相似性分析及UPGMA树状图分析均表明，健康对照组与UC各组组间相似性低于组内相似性（p<0.05）；PCA分析显示，前两个排序轴对物种变量的解释量为40.3%，不同组别之间能够被理想的分开。IPAA术后各组：与健康对照组相比，IPAA术后患者回肠贮袋细菌多样性减少，且

7、随PDAI评分增加而明显，差异具有统计学意义（p<0.05）；与健康对照组相比，IPAA术后患者肠道优势菌属种类分布及数量发生变化；Dice相似性分析及UPGMA树状图分析均表明，健康对照组与I天津医科大学硕士学位论文IPAA术后各组组内相似性大于组间相似性（p<0.05）；PCA分析表明，前两个排序轴对物种变量的解释量为40.0%，正常对照组、无贮袋炎组和贮袋炎组能够被理想的分开。结论：肠道菌群组成复杂，个体差异较为明显，肠道菌群的复杂程度也代表了肠道微生物屏障的复杂性。溃疡性结肠炎患者肠