海南岛人群口腔假丝酵母菌分子遗传特征研究

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1、海南岛人群口腔假丝酵母菌分子遗传特征研究StudyonthemolecularandgeneticcharacteristicsoforalCandidaspp.fromHainanIsland作者姓名：王华民专业名称：免疫学研究方向：感染免疫与调节指导教师：李一教授学位类别：医学博士培养单位：吉林大学基础医学院论文答辩日期：2015年6月2日授予学位日期：年月日论文评阅人：答辩委员会组成：姓名职称工作单位姓名职称工作单位盲申专家1教授主席：孙连坤教授吉林大学盲申专家2教授委员：王丽颖教授吉林大学孟繁平教授延边大学医学院台桂香教授吉林大学吕昌龙教授中国医科大学白逢彦教授中国科学

2、院微生物研究所王丽教授吉林大学安华章教授第二军医大学提要由于大多数假丝酵母菌感染源于内源性感染，故了解人群中假丝酵母菌在宿主中的分布十分必要；由于假丝酵母菌和其他酵母菌共生体对抗真菌药物敏感性不同，其重要的临床表型也不同，因此了解共生口腔假丝酵母菌菌群分布及其遗传特征，对于提高我们对假丝酵母菌感染设计靶向预防和治疗策略的能力具有重要意义。目前，关于假丝酵母菌和其他条件致病性酵母菌的全球分布情况及生态与遗传特征知之甚少，尤其是假丝酵母菌在人群中分布影响因素的模式尚未见报道。尽管对假丝酵母菌耐药的临床报道较多，而对无症状携带者的耐药情况却鲜有报道。因此，探明这些问题，对于充分了解口

3、腔假丝酵母菌的分子和遗传特征将提供有力的证据。海南岛是一个相对与大陆隔离的独立岛屿。不但有长期居住生活的人群，也有从大陆来海南的人群。不但有详尽的人类发展历史记录，而且其人口常住进出情况易于把握。这使它成为研究人类迁徙发展对假丝酵母菌物种分布潜在影响的理想场所，互联网上的基因库对我们从分子水平上应用ITS序列测定和MLST序列测定进行比对分析提供了极大的便利。基于上述背景，我们在海南岛人群口腔假丝酵母菌的研究中针对以下问题：1、假丝酵母菌在海南岛健康人群中的分布有何特征？与大陆人群相比有何区别？与发达国家人群比较有何区别？是否存在多样性？2、海南岛口腔假丝酵母菌的种类分布与宿主

4、年龄、居住地、种族和健康状况之间有何相关性？3、海南岛热带假丝酵母菌分子遗传特征如何？4、既然临床感染假丝酵母菌表现出不同程度的耐药性，那么对于无症状携带者的丝酵母菌，是否也同样具有耐药规律？本课题从以下四方面进行了研究：一、海南岛健康人群假丝酵母菌分布特征初步调查：作为前期工作，本课题从同质的海南医学院大学一年级学生口腔中采集、分离假丝酵母菌，对其中的白假丝酵母菌分离株进行DNA提取，测定其内转录间隔区（ITS）序列，用北美及欧洲标准株进行鉴定，与大陆人群的ITS进行比对以初步探讨海南岛假丝酵母菌在健康人群中的分布特征。结果表明，该人群酵母菌携带率较低，其构成比中白假丝酵母菌

5、分离率却较高，与北美洲等发达地区的的情况相似；海南人群宿主口I腔假丝酵母菌菌群ITS类型大部分与欧洲和北美的参考菌株不一致，存在高度差异；与大陆人群相比，海南岛人群中白假丝酵母菌的ITS序列呈现更显著的多样性特征。二、海南岛不同地区假丝酵母菌分布特征：前期研究是否代表整个海南岛假丝酵母菌的地理和群体特征？为此，本课题在前期的基础上，将研究范围扩大到全省（横向扩大），及各类人群（纵向扩大）。将分离到的口腔假丝酵母菌进行ITS测序，进一步探讨海南岛口腔假丝酵母菌的分布与宿主年龄、居住地、种族和健康状况之间的相关关系。结果显示，宿主性别和民族对假丝酵母菌的分布没有影响，而宿主健康状况

6、、出生地、现居住地和年龄对四种常见假丝酵母菌的分布具有显著差异。结果表明，海南岛口腔假丝酵母菌分布具有明显的基因多样性特征。三、海南岛热带假丝酵母菌分子遗传特征：为进一步探讨假丝酵母菌的遗传特性，我们选择海南岛的热带假丝酵母菌作为研究对象，采用MLST序列测定法分析其遗传特征。我们共从海南岛7个县市收集并经ITS鉴定为热带假丝酵母菌共118个菌株。每一个菌株对6个位点（ICL1,MDR1,SAP2,SAP4,XYR1,和ZWF1）进行DNA序列测定。然后对这些序列信息进行相互比对，与热带假丝酵母菌MLST基因库进行比对。本研究发现在6个位点中有新的等位基因序列（从6-52，每一

7、个新位点均值22.8）。根据6个位点的连锁序列比较鉴定118个分离株属于117个双倍体序列型。而这117个双倍体序列型未见报道。发现大部分基因变异存在于单个菌株中，而且有充分的证据表明在这7个地区之间出现基因流。本研究表明，海南岛热带假丝酵母菌菌群含有丰富的新基因变异。四、无症状携带者口腔假丝酵母菌耐药特征：为了解假丝酵母菌携带情况与抗真菌药物的敏感性的关系，我们从海南岛无症状携带者中分离到的口腔假丝酵母菌菌株进行药物敏感性测定，并分析其耐药性特征。结果表明，无症状携带者口腔假丝酵母菌具有广