氧化应激反应在牙周炎发病中的意义

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1、擊叛義火曼研究生毕业论文（申请博壬学位）论文题目：氣化应激反应在牙周炎发病中的意义作者姓名：吴文蕾口鄉专业名称：腔临床區学研究方向：牙周病学：孙卫斌教授巧导教师２０１５年５月１学号：ＤＧ１２３５０５４论文答辩日期：２０１５年５月１６日指导教师：（签字）南京大学博±学位论文氧化应激反应在牙周炎发病中的意义姓名：吴文蕾导师；孙卫斌教授南京大学医学院ＯｘｉｄａｔｉｏｎＳ化ｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓｂＷｕＷｅｎｌｅｉｙ

2、ＳｕｐｅｒｖｉｓｅｄｂｙＰｒｏｆ．ＳｕｎＷｅｉｂｉｎＮａｎｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌｊｇｙ南京大学博±学位论文学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文《氧化应激反应在牙周炎发病中的意义》是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加Ｗ标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构己经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均在论文中作了明确的声明并表示了谢意。丘圧ｎ乍者签名夺日期如口．专业：节诉；学位论文使用授权声明本人完全了解南京大学有关保留

3、、使用学位论文的规定，目Ｐ；学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可ｙＡ公、布论文的全部或部分内容，可［＾采用影印缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。‘：日期作者签名导师签名：南京大学博±学位论文＊＊刖吕牙周炎是一种慢性炎症相关性的疾病可引起牙周组织的大规模破坏，多项，研巧表明，氧化应激和牙周炎进展之间具有密切联系。牙周膜细胞（ＰＤＬＣｓ）是牙周组织中成分最

4、多的细胞，牙周炎症的氧化应激环境可能引起ＰＤＬＣ发生反应，导致病理变化。然而，目前缺少ＰＤＬＣｓ暴露于氧化应激环境的模型，活性氧分子通过何种分子机制来影响牙周炎这一问题仍然不清楚。本研究通过添加活性氧分子过氧化氮引起细胞氧化应激，探讨过氧化氨引起ＰＤＬＣｓ细胞氧化应激的机制，并研究维生素Ｃ（ＶＣ）对过氧化氨的阻断作用。同时，对慢性牙周炎患者血液中蛋白径基化水平进行测定分析，研究牙周组织炎症破坏与蛋白质誤基化水平的相关性。研究发现，过氧化氨具有潜在的细胞毒性，过氧化氨处理可降低ＰＤＬＣｓ的－－新性，ＰＤＬＣｓ活性下降主要是由诱导

5、了调亡蛋白ｃａｓｐａｓｅｓ３和ｃａｓｐａｓｅ９的裂解（含半脫氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶）。维生素Ｃ在ＰＤＬＣｓ中有抗氧化功能，加入适当的维生素Ｃ可部分措抗过氧化氨的促调亡作用。综上所述，过氧化氨主要是诱导ＰＤＬＣｓ的调亡，其毒副作用可Ｗ在淮生素Ｃ处理后被部分阻断。我们的研究结果表明过氧化氨促进牙周炎的进展，并且洞察到抗氧化处理的关键反转效应。采用改良的酶消化法和组织块法都可レッ得到原代培养人牙周膜细胞。原代组织块法培养中组织贴壁是培养的关键，用胶原酶使牙周膜组织松散，然后再用膀酶消化使之成为单细胞悬液，可在短时间内获得大量牙周

6、膜细胞。同时优化相应。的技术条件，可提高牙周膜细胞原代培养的成功率通过对过氧化氨和具有抗氧化作用的维生素Ｃ对于牙周膜细胞生存率的可能影响，。我们发现过氧化氨可Ｗ降低牙周膜细胞的生存率并且存在剂量和时间３ＰＡＲＰ依赖性。牙周膜细胞死亡率增加主要由于脫口蛋白酶、腕口蛋白酶９和的裂解引起的细胞调亡。在维生素Ｃ存在的条件下，过氧化氨对牙周膜细胞的细胞毒性作用部分被抑制。结合上述，我们证明过氧化氨可Ｗ促进牙周膜细胞的，并且给予适当浓度的维生素Ｃ可Ｗ产生相反的作用生长抑制及调亡。考虑到牙周病中活性氧的过度产生，我们的实验结果可能阐明活性

7、氧促进牙周病进程的分子机制，及抗氧化治疗的相反作用。通过临床采集健康人群牙周膜组织，原代培养牙周膜细胞，用不同浓度（６００３南京大学博±学位论文ＨＭ、８０（ＨｉＭ、１０００ｎＭ）的Ｈ２Ｏ２处理ＰＤＬＣｓ３到６个小时，观察不同浓度ＬＣ一Ｈ０处理后ＰＤｓ形态的改变，在定巧育期２２。使用特定的方法诱导细胞调亡后用膜酶消化１１２〇２处理过的细胞，并用〇ｍＭ、ｌＯ＾ｉＭ、５０＾ｉＭ、１００＾ｌＭ、２０〇ｎＭｓＰＤＬＣｓ在氧化应激下等不同剂量ＶＣ处理ＰＤＬＣ，观察添加适量ＶＣ可Ｗ提高的活力并提高细胞保护作用。为研巧ＲＯＳ在牙周炎

8、发病中的作用及其临床治疗提供实验依据。蛋白嚴基化水平增高不