杀松材线虫海洋真菌h-21的分离鉴定、培养条件及其活性物质研究

《杀松材线虫海洋真菌h-21的分离鉴定、培养条件及其活性物质研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：Q936密级：不保密UDC：579学校代码：11065硕士学位论文杀松材线虫海洋真菌H-21的分离鉴定、培养条件及其活性物质研究李子指导教师郭道森学科专业名称微生物学论文答辩日期2015年6月6日杀松材线虫海洋真菌H-21的分离鉴定、培养条件及其活性物质研究摘要松萎蔫病（pinewiltdisease，PWD)是松树病害中的一种毁灭性的病害，对全球松林构成了巨大的威胁。针对松萎蔫病的病原生物松材线虫，本文对采自青岛附近海域的样品进行真菌分离，并采用浸渍法对分离得到的22株真菌的培养滤液进行杀线虫活性测定，从这些菌株中筛选

2、得到了1株具有高杀松材线虫活性的真菌H-21，该菌株分离自贻贝。通过形态学观察和18SrDNA序列分析，将菌株H-21鉴定为Leucostomasp.，用其培养液处理松材线虫72h时，线虫的校正死亡率可达90.07%。对H-21的培养条件进行了单因素和正交实验研究，确定菌株H-21在PD培养基中产生杀线活性物质最佳的培养条件是：100%海水浓度，初始pH值6.0，培养温度25℃，培养时间5d。对菌株H-21杀线活性物质的稳定性进行了初步测定，确定其活性物质具有热稳定性以及在弱酸性条件下杀线活性稳定的特点。对菌株发酵液进行杀线活性

3、组分分析，结果表明菌株培养滤液的乙酸乙酯萃取相具有很强的杀线活性，72h的杀线活性可以达到100%。利用硅胶柱层析、凝胶色谱柱层析和HPLC等对乙酸乙酯相进行进一步分离纯化后，得到7种单体化合物，其中一种化合物在其浓度为1.0mg/mL时杀线活性为80.68%。通过质谱及核磁共振波谱等现代波谱技术将该化合物确定为fusarentin6,7-methylether，是一种fusarentin类杀虫药物。本研究可为从海洋真菌活性物质中开发高效、低毒的微生物源杀线虫剂及其在松萎蔫病防治方面的应用提供理论依据。关键词：海洋真菌；培养条件

4、；杀线活性；杀线化合物；松材线虫Isolation,IdentificationandCultureConditionsofMarineFungusH-21withNematicidalActivityagainstPineWoodNematodeandCharacterizationofItsNematicidalSubstancesAbstractPinewiltdisease(PWD),causedbythepinewoodnematode(PWN),Bursaphelenchusxylophilus,isoneofthe

5、mostdevastatingdiseaseofpinetreesandgreatlythreatensglobalforestresources.InordertoscreenthemarinefungalstrainswithhighnematicidalactivityagainstB.xylophilus,twenty-twofungalstrainswereisolatedfromthesamplescollectedfromthesubtidalzonesatQingdaoandtheirculturalfiltra

6、teswereassayedinvitrofornematicidalactivityusingimmersiontest.Itwasfoundthatoneofthesestrains,whichwasdesignatedasstrainH-21andisolatedfromtheintestinesofabluemussel(Mytilusedulis),exhibitedhighestnematicidalactivitywitha90.07%correctedmortalityofB.xylophilustreatedw

7、iththeculturefiltratefor72h.ThestrainH-21wasidentifiedasLeucostomasp.onthebasisofmorphologyand18SrDNAsequenceanalysis.Theresultsfromthesingle-factorexperimentsandorthogonalexperimentshowedthattheoptimalcultureconditionsofthestrainH-21fortheproductionofnematicidalsubs

8、tanceswereusingPDmediumpreparedwith100%seawaterwithinitialpH6.0,andincubatingat25℃for5days.Thedeterminationofphysicalandchemistrypr