pura和rip3与食管癌发生发展相关性研究

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1、也京械如皆《促,硕±研究生学位论文W北京协和医学院研究生院学校代码:10023学号:拍012003012硕±学位论文和与食管癌发生发展相关性研究TheRolesof'^/化4and1?/户5UnderlinygTumorigenesisinEsophagealSquamousCellCarcinoma所院;肿瘤研究所姓名;郭志敏指导教师:赵晓航导师小组:孙玉琳,许杨,王明荣,詹肩敏学科专业;细胞生物学研究方向:肿瘤分子标志与功能基因组研究完成日期;2015年4月北京协和医学院中国医学科学院硕

2、±研究生学位论文基金资助基金资助SuortedGrantspp本论文的研究工作是在国家自然科学基金(81372巧1和別321091)、国家高技术发展计划(863)(2012AA020206、2012AA02A503和2014BAI09B00)和国家重点基础研究发展计划(973)(2011CB910703巧2014CBA02001)等项目资助下完成的!,在此表示衷也感谢Thedissert;ationwassuortedbrantsof化eNationalNaturalppygScienceFoimdatioii巧137

3、2巧1and81321091),化eNationalHighTechR&DProgram口012AA0202G6,2012AA02A503and2014BAI09B0O),and化eStateKeyProectsfi)rBasicResearch2011CB910703andj(2014CBA02001ofChina.Wewouldesecialllike化exressour)pyprofoundthanks!p1北京协和医学院中国医学科学院硕±研究生学位论文目录Contents

4、@录1醜索引4缩略语索引表5摘要7引胃11一aasase-第部分PUR促进食管癌细胞Cp8L的抗调亡功能13引胃16欄和方&19一、材料191.细胞系192.菌株与质粒193.離194.主要仪器195.±要试剂206.常用溶液的配制21二方法221.细胞職22223.细胞全蛋白提取3.Bradford法蛋白定量234.Westernblotanalysis23524.免疫巧光6.质粒的扩増巧提取257.稳定转染细胞系筛选:26-8

5、.Caspase8蛋白酶活检测27娜30a过1.PUR表达食管癌细施构建29a1.1PUR在不同食管癌细胞中的表达291Ra过表达.2PU载体构建291北京协和医学院中国医学科学院硕±研究生学位论文1.3PURa过表达细胞系筛选巧2.PURa过表达抑制细胞调亡302sse-.1PURa过表达上调食管癌细胞Capa8L表达30-2sse8L.2PURa过表达促进食管癌细胞Capa胞浆转位302sase-.3Cap8L施浆定位抑制外源调亡通路的活化和促进细胞存活31?巧论33小结37第二

6、部分PURa过表达引起食管癌细胞EMT38前胃40材料和方法41一、材料411.抗体412.试剂14二、巧淹411.免疫组织化学412-.WST8法检测细胞生长423ll.细胞Transwe侵袭实验424.细胞划痕实验和划痕创伤愈合修复分析42结果431.PURa在食管癌和癌旁食管上皮中的表达43--MV62.KYSE510PURa和KYSE510PC细胞转录组分析444.过表达PURa的KYSE510细胞形态的检测505.过表达PURa对KYSE510细胞生长影响52

7、--5cadherinVimentin在KY化510PURa.E和细胞中的表达526.EMT相关蛋白在PURa过表泣细胞中的表达5371-.KYSE50PURa细胞迂移能力的分析5581-.KYSE50PURa细胞侵袭能力的分析55讨论57小66S第呈部^財的过表运増强食管癌细財顺拍的敏感性67前S69材料和方法702北京协和医学院中国医学科学院硕±研究生学位论文一>材料

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