《饲料中添加丁酸钠对黄鳝生长、免疫及肠道健康的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
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独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在指导老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育化构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＾＾／ｓ研巧生签名：时间：＾年／月曰关于论文使用授权的说明本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：学校有权保留送交论文的复印件和电子稿，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可Ｗ巧不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。保密的学位论文在解密后应遵守此协议（）研究生签名：时间：年／月日导师签名：专时间：；Ｚ〇Ｋ年／月日 摘要摘要本实验旨在研究饲料中添加Ｔ酸销对黄錯Ｕ４．８７±０．１１ｇ生长、部分血液指标、肠道）粘膜形态结构、葡萄糖转运载体及肠道菌群结构的影响，参照黄錯商品饲料配方，设置两种鱼粉含量不同的基础饲料，高鱼粉基础词料（４２％鱼粉）和低鱼粉基础饲料（３２％鱼粉），在两种基础饲料中分别添加０（对照组）、２５０、５００、ｌＯＯＯｍ／ｋｇｇ的Ｔ酸钢，共一配置８种等氮等能的实验饲料。选健康、体型致的黄儀随机分为８个处理，每个处理３个重复，每个重复１００尾黄錯，实验持续８周。实验结果如下：１、Ｔ酸钢对黄錯生长和免疫的影响与高鱼粉组相比，未添加下酸钢低鱼粉组黄錯増重率Ｗ（３，超氧化物歧化酶（）巧ＯＤ）、溶菌酶（ＬＺＭ）活力、总蛋白含量（ＴＴ）均较低，巧料系数（ＦＣ民）、丙二酸（ＭＤＡ）、尿素氮化ＵＮ）、血糖含量（ＧＬＵ）均较高。低鱼粉饲料中添加ｒ酸钢后黄錯ＷＧ、脾体指数、ＳＯＤ、ＬＺＭ活力、ＴＰ含量显著升高尸＜０．０５，ＦＣＲ、ＭＤＡ、ＢＵＮ、ＧＬＵ含（）＜量显著降低卢０．０５。高鱼粉饲料中添加下酸钢能显著提高黄錯ＬＺＭ活力，思著降ＧＬＵ）＜０。含量（戶．０５），但对其他指标无思著影响综上所述：低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢能提高黄儀生长、饲料利用率，増强机体免疫力，高鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢能提高机体免疫力，但对黄錯生长、饲料利用率没有影响。２、下酸钢对肠道上皮粘膜结构及基因表达的影响低鱼粉饲料中添加下酸钢能显著改善肠道粘膜结构，提高绒毛高度／隐窝深度值（Ｖ／Ｃ），降低隐窝深度，高鱼粉饲料中添加下酸钢对黄錯肠道形态及肠道测量指标没有影响。低鱼粉饲料中添加下酸钢后，与细胞増殖相关基因（鸟氨酸脱幾酶ＯＤＣ、增殖（）＜细胞核抗原ＰＣＮＡ及葡萄糖转运载体ＧＬｉｒｎ、ＳＧＬＴ１的表达作０．０。（））（）叫盈著升高３、Ｔ酸钢对肠道茜群结构的影响采用免培养的１６ＳｒＤＮＡ梯度凝胶电泳技术（ＤＧＧＥ）对摄食添加下酸钢饲料等黄錯肠道内容物细菌分析建立指纹图谱，并对主要优势条带进行了切胶克隆和测序。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ指纹图谱初步分析发现，低鱼粉饲料中添加下酸钢后细菌条带数量和菌群？多样性増加，不添加Ｔ酸钢低鱼粉组和添加了酸钢低鱼粉组相似度为４８．５％５９．２％，？未添加了酸钢高鱼粉组与添加下酸钢高鱼粉组相似度为４３３－．％５８．２％。对ＰＣＲＤＧＧＥ一指纹图谱主要条带进步回收、克隆和测序，结果共得到２６条序列，将所得到的序列在ＮＣＢＩ数据库中同源性分析，发现黄鶴肠道内容物细菌群落主要为芽抱杆菌属、单胞菌属、不动杆菌属和大量的未培养菌。关键词：Ｔ酸钢；黄錯；生长；肠道健康；肠道Ｉ 湖南农业大学硕上学位论文ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅＳｔｕｄｙｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅｉ打ｅｌｕｓｉｏｎｉｎｆｅｅｄｏｆｒｉｃｅｆｉｌｅｄｅｅｌＭｏｎｏｐｔｅｒｕｓａｌｂｕｓｏｎｔｈｅｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｒｔｉａｌｂｌｏｏｄａｒａｍｅｔｅｒｓｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ｛）ｇ，ｐｐ，ｍｕｃｏｓａｌｍｏｒｈｏｌｏｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｏｒｔａｎｄ１；ｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｆｌｏｒ．Ｔｗｏｓｅｒｉｅｓｏｆｄｉｅｔｓｐｇｙ，ｇｐｗｅｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｅｄｔｏｃｏｎｔａｉｎｔｈｅｓｉｍｉｌａｒａｍｏｕｎｔｓｏｆｃｒｕｄｅｒｏｔｅｉｎａｎｄｃｒｕｄｅｌｉｉｄ．Ｆｉｓｈｍｅａｌｐｐａｎｄｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌｗｅｒｅｕｓｅｄａｓｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｐｒｏ化ｉｎｓｏｕｒｃｅ，ａｎｄｆｉｓｈｏｉｌａｓｔｈｅｌｉｐｉｄｓｏｕｒｃｅｉｎｔｈｅｄｉｅｔ．Ｔｈｅｈｉｇｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓｃｏｎｔａｉｎｅｄ４２％ｆｉｓｈｍｅａｌａｎｄ１８％ｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌ．Ｔｈｅ０ｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓｃｏｎｔａｉｎｅｄ３２％ｆｉｓｈｍｅａｌａｎｄ３３／０ｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌｗｈｅｒｅｓｏｂｅａｎ，ｙｍｅａｌｒｅｐｌａｃｅｄ２３．８１％ｏｆｆｉｓｈｍｅａｌ．Ｔｏｅａｃｈｏｆｔｈｅｓｅｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓ，ｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅｗａｓ－ｉ．ｓｕｌｅｍｅｎｔｅｄａｔ０２５０５００１０００ｍｋｄｒｄｉｅｔ．Ｅａｃｈｒｏｕｈａｄ３ｒｅｌｉｃａｔｅｓａｎｄｅａｃｈｐｐ，，，ｇｇｙｇｐｐ．Ｔｈｅｅｘｅｒｉｍｅｎｔｌａｓｔｅｄｆｏｒ８ｗｅｅｋｓｒｅｐｌｉｃａｔｅｈａｄ１００ｆｉｓｈｐ．１．ＧｒｏｗｔｈａｎｄｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅｉ打ｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｉｎｉ打ｃａｎｔｌｉｍｒｏｖｅｄＷＧｓｌｅｅ打ｉｎｄｅｘｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＳＯＤａｎｄＬＺ；ＭＴＰｄｅｃｒｅａｓｅｄｇｙｐｐ，，，ＦＣＲ，ｔ；ｈｅＣＯ打ｔｅ打ｔｏｆＭＤＡ，ＢＵＮａｎｄＧＬＵ．Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅｉｎｈｉｇｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｉｎｉ行ｃａｎｔｌｉｍｒｏｖｅｄＬＺＭａｃｔｉｖｉｔｄｅｃｒｅａｓｅｄＧＬＵｃｏｎｔｅｎｔ．Ｎｏｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｇｙｐｙ，ｇｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ０打ｏｔｈｅｒａｒａｍｅｔｅｒｓ．Ｉ打ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓｏ出ｕｒｎｂｕｔｒａｔｅｃｏｕｌｄｉｍｒｏｖｅｒｏｗｔｈｐ，ｙｐｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ｆｅｅｄｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，ａｎｄｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆＭ．ａｌｂｕｓｗｈｅｎｆｉｓｈｍｅａｌｗａｓｒｅｔ．ｐｌａｃｅｄｗｉｈｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌ２．ＩｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｅｎｅｓｅｘｒｅｓｓｉｏｎｇｐＴｈｅｉｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅｉｎｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｒｅａｉｒｅｄｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａｌｐｓｔｒｕｃｔｕｒｅｉｍｒｏｖｅｄｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｖｉｌｌｕｓｈｅｉｈｔ／ｃｒｔｄｅｔｈｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｃｒｔｄｅｔｈａｎｄ，ｐｇｙｐｐ，ｙｐｐ，ｔｔｔｔｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｏｉｎｅｓｉｎａｌｃｅｌｌｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｃｌｕｄｉｎｏｒｎｉｈｉｎｅｐｇｐ，ｇｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ（ＯＤＣ）ａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ（ＰＣＮＡ），ｇｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｇｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｃｌｕｄｉｎＳＧＬＴｌａｎｄＧＬＵＴ２．Ｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｏｎｔｈｅ，ｇｔｉｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｙｒａｔｅｉｎｈｉｇｈ行ｓｈｍｅａｌｄｉｅｔ．３．Ｂａｃｔｅｒｉａｍｎｉｔｓｔｒｕｃｔｔｅｓｔｎｅｌｃｏｍｉｉｙｕｒｅｉ打ｈｅｉｎｔｉＴｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕ打ｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｉｎ也ｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｃｏｎｔｅ打ｔｏｆＭ幻化化ｙｆｅｄｄｉｅｔｓｗｉｔｈｄｒｅｎｔｅｖｅｓｏｓｏｉｕｍｕｔｒａｔｅｗｅｒｅｎｖｅｓｔａｔｅｄｕｓｎａｃｕｔｕｒｅ－打ｄｅｎｔｍｅｔｈｏｒｄｉｆｅｌｌｆｄｂｙｉｉｇｉｇｌｉ打ｄｅｐｅｏｆ１６ＳＤＮＡＰＣ民－ＤＧＧＥｒｉｎｔｔｒ巧ｎｅｒｉｔｔｈｌｉｎａｎｄｈｅｍａｎａｄｖａｎａｅｓｏｆｅｅｂａｎｄｓｗｅｒｅｇｐｇ，ｇｇ１１ ＡｂｓｔｒａｃｔｕｅｎｃｅｄＢＰＣＲ－ｔｔｔｃｌｏｎｅｄａｎｄｓｅ．ｔｈｅａｎａｌｓｉｓｏｆＤＧＧＥｆｉｎｅｒｒｉｎｗｅｆｏｕｎｄｔｈａｈｅｓｏｄｉｕｍｑｙｙｇｐ，ｂｕｔｙｒａｔｅｉｎｃｌｕｓｉｏ打ｉｎｌｏｗ打ｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｉｍｐｒｏｖｅｄｔｈｅｂａｎｄａｍｏｕｎｔａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙ．ＴｈｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｏｆＤＧＧＥ巧打ｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｔｈｅｌｏｗ打ｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｗｉｔｈａｎｄｗｉｔｈｏｕｔ￣ｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａｔｅｗａｓ４８．５％５９．２％ａｎｄｔｈａｔｏｆｔｈｅｈｉｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｗｉｔｈａｎｄｗｉｔｈｏｕｙ，ｇｔ？－ｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａｔｅｗａｓ４３．３％５８ｔｗｅｒｅｙ．２％．ＴｈｅｍａｊｏｒｂａｎｄｓｏｆＰＣＲＤＧＧＥｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｉｎｇｒｅｃｏｖｅｒｅｄｃｌｏｎｅｄａｎｄｓｅｕｅｎｃｅｄ２６ｓｅｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ．ＢＮＣＢＩｄａｔａｂａｓｅｈｏｍｏｌｏ，ｑ，ｑｙｇｙａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｆｒｏｍＭ．ａｌｂｕｓｃｏｎｔｅｎｔｓｍａｉｎｌｙｗｅｒｅＢａｃｉｌｌｕｓＣｏｈｎＲｈｏｄｏｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒａｎｄｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄｂａｃｔｅｒｉａｌ．，，ｐＫｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅ；Ｍｏ灼邸／ｅｒｗｓＧｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ；Ｉｎｔｅｓｔｉ打ａｌｈｅａｌｔｈ；ＩｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｂｉｏｔｉｃＩＩＩ 目录目录摘要Ｉ一第章综述１１植物蛋白在水产饲料中应用及局限性１２下酸钢３２．１Ｔ酸钢概述３２．２下酸钢生物学效应３２．３了酸钢在动物饲料中的研究６３黄錯营养的研究现状８４存在的问题及本研究的目的和意义９第二章饲料中添加微囊下酸钢对黄錯生长及部分血液指标的影响．．．．１０１材料与方法１１１．１１实验饲料１１．２饲养与管理１２２样品收集和分析１２２．１实验试剂、仪器１２２．２指标测定方法１３２．３数据处理１３３Ｓ果１４３．１饲料中添加Ｔ酸钢对黄罐生长的影响１４３．２饲料中添加Ｔ酸钢对黄錯体成分的影响１５ｉ 湖南农业大学硕上学位论文３．３饲料中添加了酸納对黄錯血液指标的影响巧义４饲料中添加下酸钢对黄韓肝脏功能影响化１７４．１饲料中添加下酸钢对黄儀生长的影响１７４．２饲料中添加下酸钢对黄罐血液指标的影响１７５小结１８第Ｈ章饲料中添加微囊Ｔ酸钢对黄錯肠道组织形态及与细胞增殖和葡萄糖转运相关基因表达的影响１９１材料与方法１９１．１实验器材巧１．２肠道组织形态观察及指标测定方法１９１．３基因部分编码区克隆及基因表达定量１９２结果２５２１巧．肠道测量指标及上皮粘膜形态２．２７肠道消化吸收酶活力２２．３基因克隆序列２８２．４低鱼粉饲料中添加了酸钢对黄錯肠道细胞增殖与葡萄糖转运载体基因表达的影响３０３ｉ＾ｉ＾３１３．１３１下酸钢对肠道细胞增殖及肠道形态的影响３．２下酸钢对黄錯肠道消化吸收酶３１活力的影响ｉｉ 目录３．３下酸钢对黄錯葡萄糖转运基因表达的影响３２４小结３２第四章饲料中添加微囊下酸钢对黄錯肠道菌群多样性的影响．．．．．．．．３３１材料方法３３１．１实验试剂及仪器３３１．２样品采集及处理３４１．３数据分析巧２结果与分析巧２．１样品Ｖ３区ＤＧ化图谱分析巧２．２ＤＧ化图谱中主要条带的序列测定３ｖＨｔ３８４小结３９参考文献４０致谢４９作者简介５０ｉｉｉ 第一章综述第一章综述１植物蛋白在水产饲料中应用及局限性鱼粉Ｆｉｓｈｍｅａｌ，ＦＭ）因可消化蛋白质和可消化能高，必需氨基酸组成平衡，富含必（需脂肪酸、维生素和矿物质等水产动物生长繁殖所必需的营养成分，而且适曰性好，一碳水化合物含量低，直Ｗ来，被看做是水产动物饲稱的主要蛋白来源，持别是肉食一性鱼类些肉食性鱼类饲料中３０－６０％。然、邮类等配合饲料在，鱼粉的添加量高达，而由于厄尔尼诺现象、过度捕撰和环境污染等问题，海洋渔业资源急剧衰减，鱼粉产量下降，水产养殖规模迅速发展也増加了水产行业对鱼粉的需求，造成全球鱼粉资源，。，紧张，供不应求，鱼粉价格不断上升大大増加了水产动物的养殖成本另外鱼粉－４２１％，中磯含量较高６７．，而水产动物对鱼粉中縣利用率较低磯排入水体后造成富）营养化，，，污染环境。因此寻求优质、廉价、来源稳定的鱼粉替代蛋白源成为当今水产动物营养研究中要解决的重大问题。植物蛋白源种类多、来源广、营养价值高、价格低廉，关于植物蛋白替代鱼粉蛋白的研究己有广泛报道。在我国，豆巧巧ｏｙｂｅａｎｍｅ吐ＳＢＭ）产量在１８００万吨Ｗ上，是一目前水产饲料使用的最主要蛋白源之。豆巧中粗蛋白含量高，必需氨基酸含量高，比例平衡，赖氨酸含量和消化能值也较高，水产饲料中关于豆巧蛋白替代鱼粉蛋白的一研究报道较多。般认为，在杂食性鱼类及卧蟹等水产动物饲料中豆巧使用比例较高，而肉食性鱼类饲料中使用量低。在淡水草食性或杂食性鱼类研究中，王桂芹等口００６）４０＊＊．５％鱼粉的饲料投喂翅嘴红卽￡＞化从〇用豆化替代（７从／〇？／传／！如＾７？刮后，不影响翅嘴Ｗ红舶増重率和蛋白效率。Ｌｉｎｅｔａｌ．２０１１研究结果表明ｅｏｃＡ／ｗｗｗ（），在罗非鱼（ＯＰ１ｔ１／７舶化ａｗｅｗ饲料中互稍可替代八％鱼粉，不影响罗非鱼生长。Ｙｕｅａｌ．２０３）（）’’４０％在姻脂鱼（Ａ如ｒｏｃｙｗｎｗｓａｗａ化ＭＳ饲料中用立巧替代的鱼粉后，其生长不受影响／）口１。Ｋｏｋｏｕ幻ａｌ．０１，当饲料中豆巧含量为６０％时会降低海網拘口巧研究结果表明ＷａｕｒａｔｏＬ的生长。Ｌｉｍｅｔａｌ．２０１１研究结果表明，红饋东方鈍７Ｍ抑巧咕Ｗ）饲）（）（Ｗ料中３０％鱼粉被脱脂豆巧替代后，不影响生长。何大庆等２００皮豆巧替代６０％（句用去鱼粉，凡纳滨对奸（以啤ｊｅＭａｅｗｗｍｎａｗｗ）的体长、体重、成活率、巧料系数和脱壳次数Ｗ’’Ｗ均无差异。而在肉食性鱼类中，例如石斑鱼（母伽ｅ如ｄｗｃｏｚｏｚ庇句、虹魄８’９。］］［，［＂Ｏｎｃｏ从ｙｎｃＡｗ巧碱耐、庇ｎｏ／ａ记／妍７成和军曹鱼（ｉ？ａｃｃｅｎ化Ｗｃａｗ化沁耐（黄尾獅（〇砂等，当饲料中大盘蛋白分别超过总蛋白的２５％、２０％、１４％和１０％时生长和饲料利用１ 湖南农业大学硕上－学位论文率下降。然而，，与鱼粉相比植物蛋白中必需氨基酸含量低、比例不平衡及含有大量抗营一养因子，使得水产动物对植物蛋白源的利用较低。、与鱼粉相比，豆巧中必需氨基ｔｗ酸含量较低，氨基酸组成比例不平衡，其中蛋氨酸为主要的限制性氨基酸。氨基酸比例不平衡降低蛋白质沉积，多余氨基酸分解，是影响水生动物生长的主要因素。研巧表明，随着饲料中植物蛋白含量的升高，氨基酸组成不平衡明显，动物的生长受到二、豆ｔｉ－ｎｕｔｒｉｔｆａｃｔｏＡＮＦｓ抑制巧中抗营养因子ａｎｉｏｎａｌｒｓ含量较高，主要包括蛋白（，）酶抑制因子、凝集素、类雌激素、植酸、抗原蛋白、皂武、抗维生素、非淀粉多糖、一种结晶球蛋白低聚糖和致甲状腺肿素等。族蛋白酶抑制因子是，能与肠道内分泌的族蛋白酶及糜蛋白酶结合，降低蛋白质的消化利，形成稳定的复合物，降低酶的活性ｔＷ用。另外，膜蛋白酶抑制因子可促进赎腺过度分泌肤蛋白酶和糜蛋白酶，这些消化，酶中富含硫氨基酸，过度分泌会导致内源性含硫氨基酸的浪费，氨基酸代谢奈乱抑ｔＷ。制动物的生长。凝集素主要影响小肠的正常代谢，导致小肠绒毛组织病变研究发现凝集素结合到大西洋鞋小肠末端刷状缘的表面后，使刷状缘机能素乱，干扰营养物ｔＷ质的消化吸收。另外，凝集素还可降低肠道刷状缘的酶活力，影响肠道内细菌生态，一导致机体发生免疫功能障碍等。植酸是种很强的整合剂，能通过稱酸基团整合许多二价或Ｈ价的金属阳离子及蛋白质，抑制Ｆｅ、Ｚｎ、Ｍｇ、Ｍｎ、Ｃａ和Ｃｕ等矿物质的利ＵＷ７！：用和蛋白质的消化率。皂巧能破坏鱼类肠粘膜结构来影响营养物质的消化吸收，将在大豆稍中提取的皂武添加到大西洋蛙的饲料中，大西洋鞋的生长缓慢，肠道粘膜ｔＷ形态发生改变，肠道末端粘膜酶活力也受到抑制。因此，当饲料中豆觀含量过高时会造成水产动物生长下降。改善水产动物对植物蛋白源的利用主要有下几个方面：１、补充晶体氨基酸。许一多研充表明，在动物饲料中添加种或几种限制性必需氨基酸，可改善饲料中氨基酸ＰＤ＇ｎｉ。平衡状态，提高动物对植物蛋白的利用而有些研巧表明饲料中添加晶体限制性ＳＭＰ’ｌ氨基酸并不能改善动物对植物蛋白的利用，可能原因是晶体氨基酸和内源性氨基酸不能被同时吸收。２、添加诱食剂。诱食剂产生的化学气味刺激动物的嗅觉器官的味蕾，使水产动物的食欲増强，摄食量増大３、，摄食时间缩短。消除抗营养因子。主要包括下几种方法：通过加Ｘ工艺如热处理、机械加工等使热敏性抗营养因子纯化，或添加化合物消除或缓解抗营养因子，如铁、蛋氨酸、胆碱、偏重亚硫酸钢等。添加酶制剂如蛋白酶。、植酸酶和非淀粉多糖酶等。还可Ｗ通过微生物发酵的方法２ 第一章综述２下酸钢２１．了酸巧概述了酸钢ＯＳｏｄｉｕｉｎｂｕｔｙｒａｔｅ，ＮａＢ）是了酸的钢盐形式，分子式为Ｃ４Ｈ７〇２Ｎａ，分子量为‘－１１０．０９点为２５３２５０Ｃ。２００３年《饲料》，烙下酸钢被列入添加剂品种目录，成为新型饲料添加剂。下酸钢呈白色至类白色，似绒毛状，有特殊的奶酪酸败味，对光、热稳一－定，可吸湿性。了酸钢的有效成分是种短链挥发性脂肪酸下酸，是肠道厌氧菌发酵一膳食纤维等不消化的碳水化合物得来的种短链脂肪酸ｓｈｏｒｔｃｈａｉｎｆａｔｔａｃｉｄＳＣＦＡ，（ｙ，）如粗纤维和抗性淀粉。因Ｔ酸具有游离性和挥发性的特点，饲料生产中常将其制成相对稳定的钥盐。下酸有特殊的气味，Ｗ非离子弥散性吸收为主要吸收方式，不同于醋Ｈ－，下酸水脂两亲６时不宜分酸或丙酸等短链挥发性脂肪酸，偏重于亲脂，且在ｐ值４解。，而且极易吸潮，由于粉剂下酸钢有特殊的奶酪酸败味，刺激性较大，流动性差不利于饲料的加工和储存，、，限制了其在饲料中的广泛应用本实验采用缓释控释技，避免下酸钢的特殊气味的不利影响术对Ｔ酸钢进行包膜处理，同时提高了产品的流动性，能实现在动物消化道内的缓慢释放。２．２Ｔ酸巧生物学效应２．２．１动物肠道细胞快速能量来源？短链挥发性脂肪酸是碳原子数为１６的有机脂肪酸，如石酸、丙酸和了酸，是肠，其中下酸是肠上皮细胞的快速能量源细胞偏爱的能量，下酸被上皮细胞吸收后，可直接被上皮细胞作为能源物质而消耗，其最终代谢产物为丽体和二氧化碳，为肠粘膜Ｐ５１二－提供大约八％的能量。在肠上皮细胞内了酸是通过爲甲基戊酌辅酶Ａ循环中的Ｐ氧化作用进行能量代谢，首先是通过Ｔ酸辅酶Ａ合成酶把下酸转化成了酸辅酶Ａ一ｂｕｔｒａｔｅ－ＣｏＡＡ进，然后通过系列反应快速生成乙酷辅酶行能量代谢，结合下酸Ｗ（ｙ）非离子弥散性吸收为主的特点，下酸无需经过肝胆吸收和复杂的Ｈ哲循环系统，可直接为肠上皮细胞提供能量。体外研究表明，用葡萄糖、爾体和谷氨酷胺等作为呼吸能源ｐｑ时，结麻上皮细胞首先利用下酸。２．２．２改善胃脑道形态了酸是肠上皮细胞的直接能量来源，，约占短链脂肪酸耗氧所产生能量的７０％在肠道上皮细胞正常发育与自身粘膜损伤修复中起重要作用。Ｔ酸盐还可＾？刺激结肠内水和钢离子的吸收，产生促进粘膜修复的酶，同时刺激细胞内ｍＲＮＡ和蛋白质的合成，３ 湖南农业大学硕±学位论义加速肠绒毛増殖，増加绒毛高度，増深隐窝深度，降低绒毛宽度，提高机体对营养物质的消化吸收能为。盲肠切除的大鼠饲喂无纤维日粮，同时在结肠内注射４０ｍＭＴ酸溶液或ＳＣＦＡ混合物，结果表明，Ｔ酸溶液可通过増加粘膜重量、蛋白、ＲＮＡ及ＤＮＡ来促进结肠生长短链脂肪酸注入神经完好大鼠的盲肠内増加空肠ＤＮＡ、绒毛高度、ＰＳ１表面积、隐窝深度和促胃泌素水平。关于了酸及下酸盐促进肠道形态发育的功能在——＇１畜禽已有大量报道，ｋ，ｋ，ｋ。在肉鸡日粮中添加５００ｍｇｇ入１０００ｍｇｇ和２０００ｍｇｇ下酸－－ｉｉ，钢５００ｍ’ｋ，结果表明，ｇｋｇ和１０００ｍｇｇ下酸钢饲料组肉鸡十二指肠粘膜中ＤＮＡ和蛋白含量显著提高，且空肠绒毛高度与隐窝深度的比值随下酸钢添加量的增加呈线性＾８ＡＡ肉５００’増加。王继凤等（２００刷究表明，鸡日粮中添加ｍｇｋｇ下酸钢后小肠粘膜结Ｐ９二指１５构更加完整，空肠、回肠、十肠绒毛高度和粘膜厚度均提高。王继凤等口００）ｆｉ在断奶仔猪日粮中添加Ｉｇ了酸钢后，发现仔猪空肠和回肠粘膜结构更加完整，层次ＰＷ清晰，肠绒毛排列整齐且粗壮，回肠杯状细胞数量増加。Ｍａｎｚａｎｉｌｌａ等２００６研究表（）明，在断奶仔猪日粮中添加０．３％Ｔ酸钢可提高空肠隐窝深度４０％，増加结肠杯状细胞数量，其他部分隐窝深度和绒毛高度不受影响。钟翔等（２００９）在断奶仔猪饲粮中添加化１％和化２％下酸钢后二指肠绒毛高度分别増加１５．５％２３．９％，空，十和肠绒毛髙度分—ｉ１Ｐ，ｌ别増加１４％和６％。郑瑞耕（２００８研究表明，在缠鱼饲料中添加１０（Ｋ）ｔ下酸钢后，）ｇＰ２１、。小肠粘膜更加完整，绒毛高度宽度和肠粘膜基层厚度均比对照组高２．２．３调节肠道微生物多样性下酸是一种短链脂肪酸，有水脂两亲的特性，可透过革兰氏阳性茜和阴性菌的细胞膜。下酸进入细茜细胞内后分解为下酸根离子和氨离子，胞内氨离子浓度不断升高，使得对氨离子耐受性差的细菌如沙口氏菌、大肠杆菌和梭状芽抱杆茜等大量死亡，而，对氨离子耐受性强的细菌如乳酸杆菌和粪链球菌存活下来，并且大量繁殖，另外ｒ－酸解离为酸根离子ＲＣＯＯ能破坏ＤＮＡ结构，阻碍蛋白质合成，使机体不能进行正常的复制，，从而抑制不耐酸的大肠杆茜、沙口氏菌和弯曲杆茜等肠道有害菌的生长繁殖，促进耐酸性强的乳酸菌等有益菌的大量繁殖使肠道内有益菌和有害菌数量保持平衡，３３４—ｉＰ，ｌ２００９２００－ｔ整个肠道维持在健康状态。郭传珍等（）研究发现，在肉鸡饲料中添加ｇＰ５１了酸钢后，１盲肠中乳酸凿数量増加，大肠巧菌数量降低。钮海华等口００在仔猪饲料）＇ＰＷ，中添加１０００ｇｆ下酸纳后促进了肠道乳酸菌的増殖，降低了大肠埃希菌的数量。Ｌｕ＇＇ｉ＇，，００８ｋ和１０００ｍｇ，断奶仔猪小肠和等口研究发现，饲料中添加５００ｍｇｋＴ酸钥后）ｇｇ近侧结肠內产气芙膜杆茜和大肠杆茜的数量降低Ｉｍｍｅｒｓｅｅｌ等口００４使用微胶囊型）ｒ酸盐饲喂试验感染的维鸡后，发现在盲肠中定植的沙口氏菌的数量减少。４ 第一章综述２．２．４増强肠粘膜免疫功能肠道屏障对动物机体免疫防御具有重要意义，其中起主要作用的是肠粘膜上皮屏障和肠站膜免疫屏障。肠粘膜上皮屏障主要由肠粘膜表面的黏液层、肠上皮及其紧密ＳｗＰ’ｉＭＵＣ２连接、粘膜固有层等姐成。黏液层包括黏液细胞分泌的凝胶状糖蛋白、杯状细胞分泌的黏蛋白、Ｈ叶因子ＴＦ巧和分泌性免疫球蛋白Ａ。肠上皮包括杯状细胞和内分泌细胞。粘膜固有层包括巨喧细胞、嗜酸性粒细胞、Ｂ淋己细胞等。研究表明下ｃｏ－２单层细胞紧密连接集聚酸可Ｗ促进Ｃａ。巧ｏｇｅｒ等２０１２研究发现，下酸可抑制（）ＴＮＦ－０－乙酷化－和比１３的释放和组蛋白去，进而影响紧密连接蛋白Ｃｌａｕｄｉｎ２、Ｏｃｃ山ｄｉｎ、ｔＷＣｉｎｕｌｉｎ等表达。５ｇ，恢复炎性肠炎的紧密连接王维凤等口００）研究表明，日粮中添加＇－Ｉｆ下酸纳可促进断奶仔猪肠道上皮杯状细胞的増殖回肠的杯状细胞数量为空肠ｇ，使Ｐ０１－１．２２０１的３．２倍。李丹丹等（１巧发现，断奶斤猪日粮中添加化％下酸纳后，肠道粘膜４１１１０中浆细胞数量増加，分泌免疫球蛋白的活力増强。唐明红等口０发现在日粮中添加）－ｉ４２１１，１ＩＡＩ０００ｍｇｋｇ下酸钢能思著提高肥育猪血清中ｇ和ｇＧ含量。李芙燕等口００６）研究４３ｔｌ发现，日粮中添加了酸钢可显著増加小肠各部分肥大细胞的数量。粘膜免疫屏障主要由肠上皮内淋己细胞ＩＥＬ、固有层淋己细胞ＰＬ、派尔集合淋己小结等免疫细胞群组＾ｉ成２００，。王继凤等（８佩究发现，５００ｍｇｋｇ了酸钢可显著増加４９天ＡＡ肉鸡小肠肥大Ｐ９＾细胞、上皮内淋己细胞和杯状细胞。刘丽华等口００９）研巧发现Ｔ酸钢可思著提高ＡＡｔＷ肉仔鸡十二指肠、空肠和回肠内淋己细胞的数量。２．２．５抗炎症作用大量动物实验研究表明，下酸及其钢盐在治巧炎症方面有重要作用。Ｍｏｒｅａｕ等口００４）利用葡聚糖硫酸钢（ＤＳＳ）诱发小鼠结肠炎，结果发现结肠内了酸吸收量减少，肠粘膜的通透性増加，而利用下酸处理后，肠粘膜的通透性得到有效地改善大鼠试ｔＷ验同样证实了下酸可Ｗ缓解试验性肠炎对粘膜的损伤。抗炎症机制主要与了酸的组蛋白脱己斬基酶活性抑制作用有关－ＫＢ的活性－ａ，进而抑制ＮＦ，减少ＴＮＦ等炎症性一－细胞因子的产生和释放，抑制肠黏膜的炎症反应。ＮＦＫＢ是种重要转录因子，能够与Ｂ淋臣细胞免疫球蛋白Ｋ轻链基因的増强子ＫＢ序列特异结合，主要调控炎症细胞４７＾１因子、炎症诱导酶、黏附分子、生长因子、热休克蛋白和免疫受体等相关基因的表达。了酸通过抑制ＮＦ－ＫＢ的活性来减少ＴＮＦ－ａ和白细胞介素等炎症性细胞因子的产生和释放，诱导结肠癌细胞调亡，从而抑制肠粘膜的炎症反应。另外，细胞及机体炎症过程涉及到氧化应激，，氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时体内高活性分子如活性氧自由基（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）和活性氮自由基（ｒｅａｃｔｉｖｅｎｉｔｒｏｇｅｎ８口６（：心，防倘）产５ 湖南农业大学硕上学位论文生过多，氧化程度超出氧化物的清除，氧化系统和抗氧化系统失衡，破坏细胞内脂质、蛋白质和ＤＮＡ，从而导致组织损伤。研究报道，下酸及其钢盐还可通过抗氧化缓解炎症反应。胡卫等口０００）研究发现，Ｔ酸钢能降低溃瘍性结肠炎大鼠肠粘膜组织中黄囑岭氧化酶活性，増高还原性谷腕甘狀含量，，降低黄曝吟氧化酶活性升高还原性谷腕ｗｓｉｈ甘肤含量，减少氧自由基，从而使细胞中不饱和脂肪酸脂质过氧化减少。Ｚａｎｇ等口ｏｉｌ）在２１日龄ＡＡ肉鸡日粮中添加Ｔ酸钢，发现添加添加饲喂含Ｔ酸钢饲料的肉鸡４９二酸含量降低ｔｌ血清中超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性显著升高。，丙张化琳等（２０１１）研究指出，在饲料中添加０．５％〇下酸钢后，与对照组相比，媛鋪肝脏总抗氧化能ｓｔｗ５力提商２５％过氧化氨酶活力提局１％。，２．２．６下酸钢抗肿瘤作用下酸钢可抑制组蛋白去己醜基酶活性，能用于治疗肿瘤，其主要机制是抑制组蛋白去艺醜基酶的活性，促进肿瘤抑制基因的转录，进而促进肿瘤细胞分化，使肿瘤细一一系列形态和功能的变化２－二甲基耕是，从而抑制肿瘤生长。１种具有晓化胞发生，ｔＷ作用的致癌物，在实验室中被用在实验动物身上诱导结肠癌。通过向盲肠内灌注下－二甲基耕诱导的肿瘤酸钢发现，１２、恶性肿瘤的发生率１＾＾及癌前期肿瘤的恶性转化，率明思降低。研究发现下酸钢可调控与抑制大肠粘膜癌变相关基因的表达，发挥抗肿瘤作用，如ｐ２１ｗａｆｌ、ｂａｘ和ｇａｄｄ４５。Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ等（１９９７）发现，胶质瘤细胞经过２ｍｍｏｌ／Ｌ下酸钢处理７２小时后，肿瘤细胞形态发生很大的变化，胞体回缩，突起増多，在形态上接近正常星形胶质细胞，且具有胶质细胞特异性的胶质原纤维酸性蛋白，有明显的５２Ｐ３’５４ｌｔｌ分化趋势。在其他肿瘤也发现类似情况，例如大肠癌、肝癌等。肿瘤发还可能与细胞调亡异常有关。Ｍａｎｄａ等通过用３ｍｍｏｌ／Ｌ了酸分别处理Ｈ种结肠直肠癌细胞株ＳＷ４８０、ＨＣＴ１化和ＤｉＦｉＷｈ后３种，发现细胞株中的调亡细胞数量均较未经下酸处理ｓｔｙ２００４组明显下降。邵荣江等（）在体外试验中采用形态学检测方法证实了下酸钥可诱导人肝癌细胞发生调ＢｌｏｔｉｅｒｅＨＭ２００３等研究表明Ｔ酸钢在生理浓度下可诱导结（）ｓｔｗ肠癌细胞调亡，这也可解释为什么进食高纤维膳食可Ｗ抑制肠道肿瘤发生这种现象。在正常细胞中，下酸提供肠上皮细胞呼吸燃料，诱导隐窝基底细胞的増殖和成熟，改善正常组织形态结构，；而在癌细胞中下酸却能抑制肿瘤细胞増殖并促进肿瘤细胞调＂＂ｗ亡和良性分化ｔｉ，学者们将下酸这种矛盾的作用方式定义为Ｔ酸悍论。２．３下酸巧在动物饲料中的研究２上的研究．３．１了酸钢在动物生产６ 第一章综述Ｏｗｅｎ等２００化２％了（巧在Ｗ鱼粉和脱脂大豆为主要蛋白源的两种饲料中分别添加酸钥，研究其对热带鈴鱼的影响，结果表明，与未添加了酸納的鱼粉饲料组和添加Ｔ酸钢的脱脂大豆饲料组相比，添加下酸钢的鱼粉饲料组特定生长率和饲料效率分别提Ｐ８４１．７％。ｒｅｏｃｉｒａｍｋｍｏＭａｍＷｃＭＳ高和４．１％郑瑞耕等口００妙企罗非鱼Ｏ／基础饲料中分（）———ＩＩ｜－，，别添加０、５００ｔ、ｌＯＯＯｔ和１５００ｔ了酸钢，ｇｇｇ，结果表明与没有添加Ｔ酸钢的饲３１３Ｄｔ料组相比，添加下酸钢饲料组增重率分别提高２５．８％、１３．３％和２７．６％。ｅＷｅ等２０１２）同样观察到在罗非鱼饲料中添加下酸盐和核昔酸提高了罗非鱼生长和饲料效率（‘［气张游琳等２０１１在美洲媛鋪／＾？《１？舶＾〇：？／伯崎饲料中分别添加０％〇、０．５％。和１．０％〇Ｔ（）（，与对照组相比，０．５％酸钢，结果表明实验组増重率増加，饲料系数下降，添加〇下酸５２１納组媛颤増重率提高了３７％，饲料系数降低了６％＼Ｐｉａｖａ等（２００７）研巧表明，在断ｉ６０ｔ１，ｆ２Ｏ０。２００９奶仔猪的日粮中添加．８ｋｇ了酸钢能显著提高仔猪的増重率达％钟祥等（）．１％２％在断奶仔猪日粮中添加０和０．下酸销，研究其对断奶后日増重率和料肉比的影响，结果表明，与未添加Ｔ酸钢饲料组相比，断奶３、７和１４天后０．１％饲料组的平均如増重率分别提高５％、１３％和２％，料肉比分别下降６％、９％、１８％。断奶３和７天后ＰＵ０．２％饲料组料肉比分别降低１１％和１０％。刘丽华等（２００９）在ＡＡ肉仔鸡日粮中添加不同浓度的下酸钢，与对照组相比，添加下酸钢饲料组采食量、日増重率和体重均显ｔＷ著提高。１４，在２８日龄断奶仔猪日粮中添，料肉比显著下降刘锐刚等口０）研究指出６２＾１０１％８３．５７％。２０１，加．了酸纳饲喂２天后，日増重率提高了１陈国顺等（巧研究表明－ｉ，在断奶仔猪日粮中添加ｌ〇（Ｋ）ｇｔ包膜Ｔ酸钢饲喂１４天后，与未添加饲料组相比，其平心１均田増重提高４．５％。刘嘉丽等口０１１）研巧表明，在稷桃谷肉鸭的，料肉比降低２．７％－——ｉ＇１，，，日粮中添加％０ｍｇｋ：ｇ、７００ｍｇｋｇ和１０５０ｍｇｋｇ了酸钢后，与未添加饲料组，其料ｔＷＬ重比分别下降４．９５％、６．７１％和４．５９％。ｅｅｓｏｎ等口００引研巧表明，与对照组相比，？％的添加０．４％的Ｔ酸盐可极显著提高肉用仔鸡０２０天的采食量，当日粮中添加０．２？了酸盐时，显２７，可増加顺体重４．２％，极显著増加仔鸡胸肉产量著提高仔鸡试验２１Ｍｔｌ天的总増重。２．３．２改善机体代谢Ｃｌａｕｓ等（２００７）研充结果发现，在生长肥育猪饲料中添加了酸钢后，与对照沮相比，ｆＷ回肠庶糖酶活性升高。ＭａｎｚａｎＵＩａ等口００６研究发现，与对照相比，用添加化３％下）酸钢的饲料饲喂断奶仔猪可使其回肠淀粉消化率、结肠挥发性脂肪酸含量、直脑挥发ｗｆｉ性短链脂肪酸含量降低。Ｃｚｅｒｗｉｎｓｋｉ等（２０１２在仔鸡饲料中添加了酸钢后，与对照组）相比，回肠ｐＨ值、异下酸盐、丙酸盐浓度升高Ｚｈａｎｇ等（２０１１）研究发现，用添加７ 湖南农业大学硕上学位论文微囊Ｔ酸钢的饲料饲喂仔鸡后，与对照组相比，饱和脂肪酸含量显著降低，Ｃ２０：４和６９ｔＣ２０：０含量増加ｌＢｉａｇｉ等２００７研究结果发现，饲料中添加下酸钥后，仔猪肠道的（）Ｗｉｌｎ等２０１，异下酸钢浓度和ｐＨ值増加，氨浓度有増加趋势ｓｏ（巧研巧发现在萨福克羊日粮中添加２．５％Ｔ酸盐后，与对照组和１．２５％下酸钢饲料组相比，瘤胃短链脂肪酸浓度升高Ｇｕｉｌｌｏｔｅａｕ等口０１巧研究发现，在棲牛饲料中添加下酸钢后，与对照组一相比，，在摄食后第个小时内，脂肪酶分泌量増加摄食３小时后，口服了酸钢对血浆肠道调节肤浓度有微调的作用，同时减垣了进食后膀腺分泌物减少的生理状况。Ｋａｔｏ等２０１１试验表明，在较牛日粮中添加下酸钢后，血浆生长激素浓度和膀岛素浓度降低（）７２【］ａ等。Ｇｏｒｋ口０１。试验表明，在樓牛日粮中添加下酸钢后，第７天血浆膜高血糖素样ｔｎｉ－２１。肤浓度升高，第４天血清总蛋白浓度升高，整个试验期间的血糖浓度升高３黄錯营养的研究现状黄錯ａ化Ｗ亦称儀鱼，属亚热带鱼类，主耍分布于亚洲东部及南部，）尤其在我国分布较广，主要栖息于湖泊、水库、池塘、沟渠、稻田等淡水水域中。具有较高的营养和药用价值，在国内外市场供不应求，是我国目前大为推广养殖的重要一名特优水产品之。由于人工大量捕捉，加之农田中农药化肥的大量使用，使我国黄錯野生资源大量减少。一黄錯是种偏肉食性鱼类，，对饲料中蛋白质要求高人工配合饲料主要参考媛麵饲料配方，饲料系数高，黄錯喜食性差，，不能完全替代生物活巧料目前主要Ｗ生物。活巧料搭配人工配合饲料投喂黄錯饲料配方严重依赖鱼粉，黄儀饲料中鱼粉的添加量超过了４０％，Ｗ致商品饲料价格高，目前市场上商品饲料价格己超过了８０００元／吨，严重影响了黄錯养殖的健康持续发展。，目前对黄錯营养学研巧报道不多，关于黄錯蛋白质、总能的需求几种氨基酸及香味物质对黄錯诱食性，胆碱对黄錯生长、组织脂肪含量及消化酶活性的影响及维生素Ｅ对黄錯繁殖性能的影响有过报道本实验室通过黄錯饲料中蛋白源替代实验发现，膨化豆巧替代２４％的鱼粉后，对黄錯生长、饲料效率、体成分、消化酶活力及肌肉营养价值无影响，肉骨粉可替代３３．５％的鱼粉对黄錯生长无影响。本实验室还通过添加牛横酸实验发现，在低鱼粉饲料中添加化０６２５％牛横酸盾黄錯的生长可达到鱼粉组。曹志华等（２００８，２００９）报道了肉骨粉、豆巧替代鱼粉的研巧，但其研巧比较简ｔｗ’ｗｉ单，仅研充了饲料中鱼粉的不同替代比例对生长的影响。国外针对黄轄的研究报ｓｕｓｉｔ’ｌ道较少，仅见少量有关黄儀生态学和繁殖学方面的研究。８ 第一章综化４存在的问题及本研究的目的和意义鱼粉因适口性好、摄食率高、必需脂肪酸和氨基酸含量丰富，抗营养因子少，必需氨基酸组成平衡一，未知促生长因子含量丰富，直是水产饲料中不可缺少的优质蛋白源。随着水产养殖业的快速发展，，鱼粉供需不平衡愈来愈明显养殖成本不断上升，严重制约了水产养殖业的发展。此外，鱼粉中的碟只能部分被水产动物利用，造成水体磯污染，在水产饲料中得到大量的应用。然而由于。植物蛋白因来源广，价格低廉植物蛋白中必需氨基酸含量低，导致水产动物对植、比例不平衡和抗营养因子的存在。＾物蛋白利用率降低，破坏了肠道粘膜组织结构完整性，免疫为下降下酸钥有＾＾下生理功能：１、动物肠道细胞能量的快速来源。２、促进为肠道细胞的増殖和成熟，改善小肠形态。３、调节胃肠微生物菌群平衡。４、增强机体免疫力。在畜禽饲料中Ｔ酸钢有广泛的研究和应用，在水产饲料中的研究和巧用化乎没有。黄錯具有较高的营养和药用价值，其，饲料，在国内外市场供不应求，是重要的出口创汇产品严重依赖鱼粉中鱼粉的添加量超过了４０％，商品饲料价格高。本实验在高低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢，一研究了酸钢对黄錯生长，目的在于种低鱼粉的黄錯饲、免疫和肠道健康的影响开发。料，为Ｔ酸钢在水产饲料中应用提供理论依据９ 湖南农业大学硕上学位论文第二章饲料中添加微囊下酸钢对黄錯生长及部分血液指标的影响鱼粉ＦＭ蛋白含量高、氨基酸姐成平衡、适口性好，被看作是水产养殖动物的优（）一些肉食性鱼类饲料中－质蛋白源，在，鱼粉的添加量高达３０６０％。然而业，近年来渔资源日益紧缺，鱼粉价格不断上涨，在不影响鱼类正常的生长效果前提下，降低饲料８２１１中鱼粉用量成为水产动物营养与饲料学的研究热点。与鱼粉相比，豆巧价格低廉、蛋白质含量丰富、来源广泛，在水产饲料中可部分替代鱼粉蛋白。然而由于豆巧中存在膜蛋白酶抑制因子和大豆凝集素等抗营养因子及某些必需氨基酸缺乏或不足，如赖ｓｓ氨酸ｔｉ、蛋氨酸等，影响了水产动物对豆稍的利用，饲料中豆巧含量过高时会导致鱼Ｗ８６１ｔ［。类生长下降，降低饲料利用率，破坏肠道形态降低消化酶活为及机体免疫为近几年一，Ｔ酸钢作为种饲料添加在畜禽得到广泛应用，下酸钢有效成分为下酸。一，提高饲料效率了酸是种挥发性短链脂肪酸，能够改善动物生长，増强机体免疫为。工业生产的Ｔ酸钢易吸潮，具有脂臭味，包膜后的了酸钢能在胃肠道中得到缓释，有利于饲料加工和动物采食。了酸钢促动物生长和机体免疫力功能在畜禽方面己有大量报道。钟祥等２００９日粮中添加０．２庙断奶仔猪．１％和０％下酸納，研究其对断奶后日增（重率和料肉比的影响，，结果表明，与未添加下酸钢饲料组相比断奶３、７和１４天后化１％饲料组的平均如増重率分别提高５％、１３％和２％，料肉比分别下降６％、９％、１８％，ＰＵ断奶３和７天后０．２％饲料姐料肉比分别降低１１％和１０％。刘丽华等（２００９在ＡＡ肉）仔鸡日粮中添加不同浓度的下酸钢，与对照组相比，添加下酸钢饲料组采食量、日增ｆＷ重率和体重均显著提高，料肉比显著下降。而下酸钢在水产饲料中研巧及报道较少。Ｏｗｅｎ等口００巧在鱼粉和脱脂大豆为主要蛋白源的两种饲料中分别添加化２％下酸钢，研充其对热带鈴鱼的影响，结果表明，与未添加Ｔ酸钢的鱼粉饲料组和添加了酸钢的脱脂大豆饲稱组相比，添加下酸钢的鱼粉饲料组特定生长率和饲料效率分别提高４．７％５８１１和４．１％。郑瑞耕等（２００８）在罗非鱼（ＯｅｏｃＡｒａｗｋ／ｎｏｓｓａｍＷｃｗ）基础饲斜中分别添加０、－－ｉ－ｉｉ’５００－－ｇｔ、ｌＯＯＯｇｔ和１５００ｇｔ下酸钢，结果表明，与没有添加下酸钥的饲料组相比，Ｐ２２１５．８％Ｄｔ添加Ｔ酸钢饲料组増重率分别提高、１３．３％和２７．６％。ｅＷｅ等口０１巧同样观察到在罗非鱼饲料中添加Ｔ酸盐和核昔酸提高了罗非鱼生长和饲料效率张泌琳等２０＊１１在美洲媛細如巧《７沁／〇加Ｙ加饲料中分别添加０％。、０．５％。和１．０％。了酸化结果表（）（）明，与对照组相比，实验组増重率増加，饲料系数下降，添加化５％〇下酸納组媛綱増重ＰＷ率提高了３７％，饲料系数降低了２６％。本试验通过在两种不同鱼粉含量的黄錯幼鱼饲料中添加不同浓度的Ｔ酸钢，研究１０ 第二章饲料中添加微囊下酸钢对黄錯生长及部分血液指标的影响レ其对黄錯幼鱼生长性能、体成分及部分血液生理生化指标等方面的影响，ッ期为下酸钢在黄錯幼鱼饲料中的应用提供科学依据一，开发种低鱼粉黄錯饲料。１材料与方法１１．实验饲料参照黄錯商品饲料配方，设置两种鱼粉含量不同的基础饲料，高鱼粉基础饲料（４２％鱼粉）和低鱼粉基础饲料（３２％鱼粉），在两种基础饲料中分别添加０（对照组）、２５０、５００、１０００ｍｇ／ｋｇ了酸钢（３０％饲料级微囊Ｔ酸钢，杭州康德权饲料有限公司（提供），共配置８种等氮等能的实验饲料见表２．１）。饲料原料粉碎过８０目筛，准确－－称取各原料后混合均匀１０％，置于２０Ｃ冰柜中，在室温条件下风干至水分含量少于保存备用，投喂前加２０％水调成面团状使用。—１表２．１饲料组成及营养水平（ｋ，干物质基础）ｇｇＴ－，ａｂｌｅ２．１Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｎｕｔｒｉｅｎｔｌｅｖｅｌｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ出ｅｔｓ（ＤＭ，ｇｋｇ）高鱼粉饲料低鱼粉饲料朦料ＨｉｇｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔＬｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔＩｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｓｅｒｉｅｓｓｅｒｉｅｓ秘鲁蒸汽鱼粉Ｆｉｓｈｍｅａｌ４２０３２０豆巧Ｓｏｂｅａｎｍｅａｌ１８０３３０ｙ玉米蛋白粉Ｃｏｍｌ山ｅｎｍｅａｌ６０６０ｇ大豆浓缩蛋白Ｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ５０５０面粉Ｗｈｅａｔｍｅａｌ８０２０－－ａ淀粉ａｏｔａｔｏｓｔａｒｃｈ１８０１８０ｐ鱼油巧ｓｈｏｉｌ０１０憐酸二氮钩Ｃａ（Ｈ２Ｐ〇４）２１５１５氯化胆碱Ｃｈｏｌｉｎｅｃｈｌｏｒｉｄｅ５５＊＊ａｍｎａｎｄＭｒｒｅｍｘ１１０预海料Ｖｉｔｉｉｎｅａｌｐｉ０防霉剂ＭｏＷｉｎｈ化ｉｔｏｒ０．３０．３抗氧化剂Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ０．１０．１营养组成Ｐｒｏｘｍａｎａｓｓ％ＤＷｉｔｅａｌｙｉ（，）粗脂肪Ｃｒｕｄｅｆａｔ６３．２６１．７粗蛋白Ｃｒｕｄｅｒｏｔｅｉｎ４２５４２１ｐ粗灰分Ｃｒｕｄｅａｓｈ１０３．２注：预混料由￥岛玛斯特生物技术有限公司提供，成分（ｍｇ／ｋｇ）为：氯化钟，２００ｍｇ；鹏化钟（１％），六水氯化钻铜——６０ｍ，５０ｍ，３０ｍ，４００ｍ，ｇ；＾％）ｇ；五水硫酸ｇ；水硫酸亚铁ｇ；水硫酸轉—４００ｍ—ｍ１５０ｍ１，ｍ，２００，３６４５５ｇ；水硫酸儘，ｇ；五水亚砸酸纳％６５ｇ；水硫酸镇０ｇ；沸石粉．８（）生素Ｂ１１２ＩＳ生素Ｂ６８ｍＢ。０．０Ｓｍｍ，ｍ，ｍ盐酸Ｐ比唆醇），，ｇ；维ｇ；核黄素ｇ；錐（ｇ；维生素ｇ；ＩＩ 湖南农业大学硕上学位论文维生素Ｋ３，８ｍｇ；肌醇，１００ｍｇ；泛酸巧（维生素Ｂ３），４０ｍｇ；烟酸，５０ｍｇ；叶酸，５ｍｇ；生物素，（Ｘ８ｍｇ；维生素Ａ，２５ｍｇ；维生素Ｄ３，５ｍｇ；维生素Ｅ，５０ｍｇ；维生素ＣｌＯＯｍｇ；己氧基哇晰，１５０ｍｇ；小麦粉，２４３４．１５ｍｇＰｒｏｖｅｄｂＭＧＯＴＢ－ＴｅｃＣｏｍ．ＬｎｈｉｎａＰｒｅｍｘｃｏｍｏｓｏｎｉｄｙｅｒｉｏｈｔｄｉｄａｏＳｈａｎｄｏｎＣｉｉｔｉ／ｋｄｉｅｔ；（Ｑｇ，ｇ，），ｐ（ｇｇ）．．ＫＣ２００ｍ２Ｈ２０５０４５Ｈ２３０ｍＦｅＳ０４．Ｈ２０４００ｍｌＫＩ１％６０ｍＣｏＣ１６％ｍＣｕＳ００，ｇ；（），ｇ；ｙ），ｇ；，ｇ；，ｇ；Ｚ０４－Ｈ２０４００ｍ４－Ｈ２０Ｎ０３－Ｍ－ｎＳＭ０１５０ｍａ２Ｓｅ５Ｈ２０１％６５Ｓ０４Ｈ２０２０００ｍ，ｎＳ，（），ｍ，ｇ；ｇ；ｇ；ｇｇ；ｚｅｏｒ．８５ｍＶＢｌ１２ｍｏｆｌａｖｎ１２２．ＶＫｌｉ化ｏｗｅ３６４５ｒｉｂｉｍＶＢ６，ｍＶＢ１００５ｍ３８ｍｐ，ｇ；，ｇ；，ｇ；８ｇ；，ｇ；，ｇ；ｉｎｏｓｉｔｏｌ１００ｍａｎｔｏｔｈｅｎｉｃａｃｉｄ４０ｍｎｉａｃｉｎａｃｉｄ５０ｍｌｉｃａｃ５ｍｔｎ０８ｍＶＡ２５ｍｉｄｂｉｏｉ．，ｇ；ｐ，ｇ；，ｇ；ｆｏ，ｇ；，ｇ；，ｇ；ＶＤ３，５ｍｇ；ＶＥ，５０ｍｇ；ＶＣ，１００ｍｇ；ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ，１５０ｍｇ；ｗｈｅａｔｍｅａｌ，２４３４．１５ｍｇ１．２饲养与管理选择规格整齐的野生黄錯为试验用鱼，在常德市西湖区某黄錯养殖场进行网箱驯：化养殖，黄轄入箱后２ｄ内不投巧料，驯化时首先少量投喂比例为１１的蛇蝴和鲜鱼浆混合物，依照摄食情况逐渐地増加投喂量和鲜鱼浆的投喂比例，直到黄錯能完全摄５％：食鲜鱼浆且稳定摄食其体重的后，开始添加粉状试验基础饲料（鲜鱼浆试验饲料＝４；１），依照摄食情况逐渐増加试验饲料的投喂比例，直到黄錯能完全摄食粉状试验饲料，饥饿２４ｈ后挑选规格均匀、健康的黄錯进行分组。共８个处理组，每个处理组ｘ３个平，２４５ｍｘ２ｌ．〇ｍ），每网箱放养１００尾黄儀。黄轄初设行共个网箱（１．．０ｍ５－始体重的％投喂，日投喂１次（１７：００１８：００）并记录黄錯摄食量，试验持续８周。实°——１ｉ验期间，水温保持在２８±３．５Ｃ，溶氧６．０±０．５ｍｇＬ，氨氮低于０．５ｍｇＬ。２样品收集和分析２．１实验试剂、仪器试剂：浓硫酸、氨氧化钢、石酷、无水硫酸铜。主要仪器：、５４７低温高速离屯机（１Ｒ）德国Ｅｐｐｅｎｄｏｆ公司；马福炉（ＳＸ２－４－１０）长沙市远东电炉厂；高速冷冻离也机（ＧＬ２１Ｍ）长沙英泰仪器有限公司；－２紫外可见分光光度计（ＵＶ１００）北京莱伯泰科仪器有限公司；ＦＯＳＳ全自动凯氏定氮系统（ＫＴ２３００）福斯中国有限责任公司；紫外可见分光光度计－２（ＵＶ１００）北京莱伯泰科仪器有限公司；Ｔｈｅｒｍｏ－１５１０酶标仪南京贝登生物科技有限公司１２ 第二章饲料中添加微囊Ｔ酸巧对黄錯生长及部分血液指巧的影响２．２指标測定方法２．２．１生长指掠试验起始和结束时分别对各网箱黄錯进行计数和称重计算成活率、増重率和巧料系数。ｅ＝ｘＮ成活率（ｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔＳＲ％）１０〇／Ｎ〇，，ｔ〇＝ｘＷＷＷ増重率（ｗｅｉｈｔｇａｉｎＷＱ／〇）１０〇ｇ，（ｒ〇）／ｔ＝ｅｅｄＷ－Ｗ饲料系数（ｆｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｒａｔｅＦＣＥ）Ｆ／，（ｔ〇）式中，Ｗｏ为试验开始时黄錯总重（ｇ）；Ｗｔ为试验结束时黄錯总重（ｇ）；Ｎ。为试验鱼初始条数，Ｎｔ为试验鱼结束条数；Ｆ为饲料摄入量（ｇ）。实验结束后每网箱随机取３尾黄錯，记录体长和体重，解剖取内脏并分离肝脏和脾脏分别称重，计算肝体比、脏体比、肥满度和脾体比。（ｈｅａｏｓｏｍａｃｎｄｅｘＨＩＳ＝ｘ肝体比ｐｔｔｉｉ，％）１０〇肤肝脏重／体重，ａ＝ｘ脏体比（ｖｉｓｃｅｒｏｓｏｍｔｉｃｉｎｄｅｘＶＳＩ，％）１０〇内脏重／体重，３＝肥满度（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ，ＣＦ，％）体重Ｘ１００／体长（ｍｍ）＝ｘ脾体比１０〇脾脏重／体重２．２．２体成分－试验结束后，每网箱随机取５尾黄錯置于２（ＴＣ冰箱冰冻作全鱼样品，鱼体常规成‘８７１ＡＯＡＣ［分测定参照文献，１９８４的方法。其中水分的测定采用１０５Ｃ烘箱干燥恒重法，（）粗蛋白的测定采用凯氏定氮法，粗脂肪的测定采取索氏抽提法，粗灰分的测定采用°５５０Ｃ灼烧法。２．２．３血液指标实验结束后饥饿２４ｈ，每网箱随机取５尾黄儀，用１ｍｌ注射器尾静脉取血，将血’液混合并置于无菌离必管中、ｌ，４Ｃ静置过夜，３０００ｒ／ｍｉｎ离屯Ｏｍｉｎ上层血清置于，取°－Ｃ冰箱保存备８０用。超氧化物歧化酶（Ｓｕｅｒｏｘｉｄｅ出ｓｍｕｔａｓｅＳＯＤ）、（ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｄｅＭＤＡ）、ｐ，丙二薛ｙ，溶菌酶（ｌｙｓｏｚｙｍｅ，ＬＺＭ）、尿素氮（ｂｌｏｏｄｕｒｅａｎｉｔｒｏｇｅｎ，ＢＵＮ）、总蛋白（ｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ，ＴＰ）、血糖（ｇｌｕｃｏｓｅ，ＧＬＵ）、谷草转氨酶（ｇｌｕｔａｍｉｃｏｘａｌｏａｃｅｔｉｃｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ，ＧＯＴ）、谷丙转氨酶（ｇｌｕｔａｍｉｃｐｙｒｕｖｉｃｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ，ＧＰＴ）等指标采用南京建成生物工程研究所试剂盒汲促。２．３数据处理＂＂数据用平均值±标准差表示，采用ＳＰＳＳ７９．０版统计软件进行单因素方差分析，１３ 湖南农业大学硕丄？学位论文若组间差异显著（尸＜〇．〇５），则作Ｄｕｎｃａｎ多重比较分析。３结果３．１巧料中添加Ｔ酸钢对黄錯生长的影响．３可由表２．２和２知：饲料中添加下酸钢对黄錯成活率无显著影响，但会显著影响黄錯生长及饲料利用率（户＜〇．〇５）。与高鱼粉组黄錯相比，未添加Ｔ酸钢低鱼粉组黄錯増重率较低，巧料系数较高，在低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢后黄儀増重率显著提高，巧料系数显著降低，与未添加下酸钢低鱼粉姐相比，当Ｔ酸钢添加量为２５０ｍｇ／ｋｇ时増重＊率思著提高（／＜０／ｋｌＯＯＯｍ／ｋ料系数显著降．０５），当下酸钢添加量为５００ｍｇｇ和ｇｇ时巧＜０低（户．０５）。在高鱼粉饲料中添加了酸纳对黄錯増重率和巧料系数无显著影响（／．０５）。低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢对黄錢肝体比和肥满度无显著影响Ｍ），但会显著影响黄錯脏体比和脾体比（尸＜〇．〇５），未添加下酸钢低鱼粉组黄錯脾体比低于高鱼粉组黄錯，在低鱼粉饲料中添加下酸钢后黄錯脾体比湿著升高。但高鱼粉饲料中添加下酸纳对黄錯肝体比。、脏体比、肥满度及脾体比无显著影响表２．２低鱼粉饲料中添加下酸钢对黄儀生长的影巧Ｔａｂｌｅ２．２Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅ虹ｒｙｉｎｃ山ｓｉｏｎｏｆｓｏｄ山ｍｂｕｔｙｒａ化ｉｎｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｏｎ化ｅｇｒｏｗｔｈｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｆｒｉｃｅｆｉｌｅｄｅｅｌＭｔｐｏ（ｏｎｏｐｅｒｕｓａｌｂｕｓ）项目低鱼粉饲料Ｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌ出ｅｔｓｅｒｉｅｓ化ｍｓ０２５０ｍｇ／ｋｇ５００ｍｇ／ｋｇ１０００ｍｇ／ｋｇｉ．２１４．８化．０８１４．初始均重ＩＷ１４．８７功．０９１４．８１０６０８３功．０６（ｇ）ａｂ＊＾＊＇末均重ＦＷ（ｇ）３１Ｊ５±１．５７３５．３化２．７４３４．１±〇．巧３４．３±１．２９〇〇９７．６７±３．２１９３．３３±２．８９９４．３３±２．０８９６±．成活率／．６７２３１（）ｂ＊。６±±４ＷＧ１１３．４ｒ１３８．５０１６．４８１３０．３４±３．２１３１．３５±．増重率％．４３９６６３（）ｂ＂＇ａ＾巧料系数ＦＣＲ１．９７功．ｌ１．８０±０．０４１．７３±０胞１．６６±０．１１±〇１±１．０．４ＨＩＳ５．９０．７８６．５１功．５１６．７６６２±０１７巧体比％．（）ｂａｂａｂ＾脏体比ＶＳＩ（％）２０．８虹１．５９Ｉ９．８３±０．７６１９．４４±１．６４１７．８０±０．３８肥满度ＣＦ１０．１５功．４８１０．５６±０．５９１０．０４±０．０２１０．２０±０．７２。３ａ脾脏指数１．８７±０．１３１．９７功．０１２．４５功．１非Ｌ９５±０．０３（％）．注：同列肩标不标任何字母或标相同字母的表示差异不显著（Ｐ＞〇〇５），标不同小写字母的表示差异显著（尸＜化０５）。下同。Ｎｏｔｅ：Ｎｏｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｏｒｓａｍｅｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｉｎ化ｅｓａｍｅｓｅｒｉｅｓｍｅａｎｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅ（户＞０．０５），ａｎｄｄｉｉｄｉｅｒｅｎｃｅ尸＜０．０５．Ｔｈｉｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｓｕｅｒｓｃｒｉｔｓｉｎ化ｅｓａｍｅｓｅｒｉｅｓｍｅａｎｓｎ巧ｃａｎｔｆｅｔａｂｌｅｐｐｇ（）ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ化ｅｓａｍｅａｓｉｔ．１４ 第二章饲料中添加微巧下酸纳对黄轄生长及部分血液指巧的影响表２．３高鱼粉饲料中添加Ｔ巧巧对黄境生长的影巧ｉｆｉｉＴａｂｌｅ．３Ｅｆｆｔｓｏｆｄｅｔａｒ山ｅｌｕｉｏｏｄ山ｍｂｕｔｒａ化山ｈｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｔｓｎｔｈｅｗｔｈ２ｅｃｙｓｎｏｓｅｏｇｒｏｙｇｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｃｅｌｅｒｕｓａｂｕｓｐｏｆｒｉｆｉｅｄｅｅｌ（Ｍｏｎｏｐｔｌ）项目高鱼粉饲料ＨｉｇｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓＫｅｍｓ０２５０ｍｍ／ｋ５００／ｋ１ｍｇｇｇｇ０００ｇ／ｋｇ１４．９０±０．０５１４．．０９１４±〇．０５１４９１±０６初始均重ＩＷ（ｇ）％±０．８６．．０末均重ＦＷ（ｇ３６．０３口．５８３７．０３±２．１１３６．６９±１．７２巧．３２±１．３７）９４．６７±５±．±１±成活率％．７７９３．６７３７９９７．００．７３９５．６７４．５１（）増重率ＷＧ％１４１．７４±１８．００１４７．７９±１５．４０１４６．９紅１０乂９１５０．３４±９．７０（）巧料系数ＦＣＲ１．５２±０．１９１．４９功．０９１．４５±０．１１１．４３±０．０３ＨＫ６．５８±〇．６２６．６０±０．０１７±．．４±〇．２巧体比％．０５０００６１３（）ＶＳＩ１９紅１．４５１．０虹１４１９．９７．６５１．１５４脏体比％．６８．９功８６功．（）±±±Ｆ９．６１０．８３１０．０３０．３７．５化１．４．肥满度Ｃ１０９９．６７０７４％２１７±０．１６２３２±．５ｉ２０±０．３６脾脏指数（．．０．３４２０〇．３６．０）３．２饲料中添加下酸巧对黄错体成分的影响由表２．４可知：在高鱼粉和低鱼粉饲料中下酸钢对黄錯粗蛋白、粗脂肪、水分和灰分均无显著影响Ｐ＞０．０５。（）２表．４饲料中添加Ｔ酸钢对黄酱体成分的影巧Ｔａｂｌｅ２．４ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｉｅｔａｒｙｉｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅｏｎｐｒｏｘｉｍａｔｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅＭｏｎｏｐｔｅｍｓａｌｂｕｓ低鱼粉饲料Ｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓ高鱼粉祠料Ｈｉｇｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓ项目ｍ０２５０ｍ／ｋ５００／ｋ１００００２５０ｍ／ｋ５００ｍ／ｋ１０００Ｉｔｅｓｇｇｍｇｇｇｇｇｇｍｇ／ｋｇｍｇ／ｋｇ粗蛋白ｕｄｅ６４．４０±０．３０６４．７７±．．±．±．．．ｔ０．±．±０．Ｃｒ１５０６１８３６０６３．８７０９３６４．８７±０６７６５１０．６２６３７００．１７６４３０７２ｒｏｔｅｉｎｐ±±２０．巧１９．．２．．．．±１．１Ｃ．０８功９化１．１０２０１．１２１９．７０９３１８．虹１７０１９０化１．１７１９．６１１５２２０．０３８ｒｕｄｅｈｐｉｄ．．４４±０．１±０．１４．２±０．４１７４．７４±０．４８７４．２４±０７３．６２±０．９５７３．２９±０．４１７３７４±０７３．７６９７４．９８８７．７５Ｍｏ巧ｔｕｒｅ±±引±１±２．８０±１４３１１±１．灰分Ａｓｈ９．７００．７７１０肚１．４４９．６１１．８．８８０．７２０．４１．０８１０．．２２０３１０．２４±０．７５．１３．３饲料中添加下酸钢对黄錯血液指标的影响由表２：．５和２．６可知与高鱼粉组黄錯相比，未添加了酸纳低鱼粉组黄轄血液中ＳＯＤＬＵ和ＬＺＭ活力和ＴＰ含量较低，ＭＤＡ、ＢＵＮ和Ｇ含量较高。低鱼粉饲料添加下酸钢后黄錢血液中ＳＯＤ、ＬＺＭ活为和ＴＰ含量显著提高（户＜０．０５），ＭＤＡ、ＢＵＮ和ＧＬＵ＜含量思著降低（Ｐ０．０５）Ｄ活为、ＭＤＡ、ＢＵＮ，在高鱼粉饲料中添加下酸钢对黄錯ＳＯ１５ 湖南农业大学硕丄？学位论文＜及ＴＰ含量无显著影响，但显著降低ＧＬＵ含量（尸０．０５），，当Ｔ酸钢添加量为２５０ｍｇ／ｋｇ和５００ｍｇ／ｋｇ时ＬＺＭ活力显著高于对照姐（／Ｍ）．０５）。表２．５低鱼粉饲料中添加了酸钢对黄變血巧指标的影巧Ｔａｂｌｅ２．５Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙｉｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｓ〇（Ｈｕｍｂｕｔｒａ化ｉｎｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｏｎｓｏｍｅｂｌｏｏｄｙｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｋｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｅｘｅｓｏｆＭｏ／ｆｏｆｋｒｉ／ｙｏ／Ａｕｆ鱼粉饲料Ｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓ项目低ｈｅｍｓ０２５０ｍｇ／ｋｇ５００ｍｇ／ｋｇ１０００ｍｇ／ｋｇ＾＇＊＇±１±１２１ＳＯＤ１６４１．５５２００．２６．５２０６．５７巧．７少２１７．９５±１５．２超氧化物歧化酶．９７９ｂ＊＇＊＊＂＊＇丙二酸ＭＤＡ１０．９８±２．〇８．５７±１．２０７．６３±１．５６９．４０±１．１７ａ＂＾＇＊溶菌酶ＬＺＭ１１７．９０±４乂５１８５．７３±５．３３２４９．０９±２２．０９１６１．４１±４．２２ｂ＂。ＢＵＮ３．３３±０．４４２１．１２２．３２８２．５４功．尿素氮．９±０似）．Ｗ＂ｂ。＾２４±３２．６５±５．３３４４．８４±４．３９３８．８．１９总蛋白ＴＰ．８６０．６１６±２ｂａ。４３６功１３＾２．８３功．３８２．９６功．５９血糖ＧＬＵ．．±０２．３８．０７２６表．高鱼粉饲料中添加下酸钢对黄篤血液指标的影巧Ｔａｂｌｅ２．６Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙｍｃｌｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａ化ｉｎｈｉｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｏｎｓｏｍｅｂｌｏｏｄｙｇｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａ＾ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｅｘｅｓｏｆ做０Ｈ０／７化ｉＴｉｓｏ／Ａｕｘ项高鱼粉饲料Ｈｉｇｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓ目ｈｅｍｓ２５０ｍ／ｋ５００ｍ１／ｋ０ｇｇｇ／ｋｇ０００ｍｇｇＳＯＤ２３４２２３．３．２１６．２４±１２．９．２２±７．超氧化物歧化酶．４肚７．８４６巧８５９２２３５１９±１１．５０±２．２２９．．９４丙二酵ＭＤＡ．１９１．３６７５±０±１１〇．１〇．８１＂＇＊ｂ＂溶菌酶ＬＺＭ１４６．６６±３８２０１．５３±５．０８２０８．巧±０．１３１１４．１８±９．９９３ｂ＇。＂＇＇尿素氮ＢＵＮ２．６２±０．４６３．２１±〇．４７２．３４±０．１０２．５２±〇．２５。＾＇＇＊＇ａｂ４０±总蛋白ＴＰ．３８±４４８．７８±５８２５３．６４５４４．０８．．３３．１虹８．６〇ｂ＂ａ血糖ＧＬＵ３．７２±０．拍２．５４±０．１１２．３５功．２＾２．２３±０．１６３．４饲料中添加Ｔ酸钢对黄韓肝脏功能影响肝脏中ＧＯＴ和ＧＰＴ活力影响着蛋白质代谢，２．７可知由表，未添加了酸钢低鱼粉ＴＰＴ组黄錯肝脏中ＧＯ和Ｇ活性均高于高鱼粉组黄錯，在低鱼粉饲料中随着Ｔ酸钢添加量的升高ＧＰＴ活力显著下降，但ＧＯＴ活力不受影响。高鱼粉饲料中添加Ｔ酸纳显著降低黄錯肝脏ＧＰＴ活力，但对錯鱼肝脏Ｇ肌活力无显著影响。１６ 第二章饲料中添加微巧Ｔ酸钢对黄饒生长及部分血液指标的影响表２．７饲料中添加Ｔ酸钢对變鱼巧脏中谷草转氨巧（ＧＯＴ）巧谷巧转氨巧（ＧＰＴ）的影巧Ｔａｂｌｅ２．７Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙｉｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａ化ｏｎ化ｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＧＯＴａｎｄＧＰＴｉｎｌｉｖｅｒｏｆＭｏｎｏｐｔｅｒｕｓａｌｂｕｓ项目低鱼粉饲料Ｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓ高鱼粉饲料ＨｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓＩｔｅｍｓＧＯＴ谷丙转氨酶ＧＰＴ谷草转氨酶Ｔ谷丙转氨酶谷草转氨酶（）（）（ＧＯ）（ＧＰＴ）ｂ＂０３．１３７±０１７７．２±１．１７４．１２±０．１１３．４４±．９３．８３＾＇±＾１±２５０ｍ／ｋ１２．８３．３８６．５１±１４１７０２．７１±ｇｇ．９．．３２２０．７６＊＾５００ｍＷ７０±０．２２．±０．８４７±１．３７１２±０ｇ／ｋｇ．４３４８６．．７．２７＂。ｌＯ５１７±３．３１１．１０．４４±０．２７１．±０ＯＯｍｇ／ｋｇ１．３．８６±８５９．０６４讨论４．１词料中添加Ｔ酸纳对黄韓生长的影响本实验研究结果表明，在低鱼粉饲料中添加下酸钢提高了黄錯增重率，降低了巧口８口２】喃Ｄ料系数，与Ｏｗｅｎ等口００６巧热带餘鱼、郑瑞耕等口００８）ｅＷｅｔ等（２０１巧在罗ｔｗｉｔｗｉＰＵ非鱼、张娘琳等（２０１１）在美洲輯麵、钟样等口００９）在断奶仔猪、刘丽华等口００９）在ＡＡ肉仔鸡上［＾的研究结果一致。说明低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢可促进黄錯生长和饲料效率。可能原因是低鱼粉饲料中含有大量的抗营养因子，损坏了肠粘膜形态结构，降低肠道消化吸收功能，降低免疫功能及抗氧化功能，添加Ｔ酸钢后可修复肠道粘膜，提高营养物质的消化吸收功能形态，提高免疫功能，进而改善动物生长。而高鱼粉饲料中添加了酸钢并未发现此现象，可能原因是高鱼粉饲料对黄錯消化吸收、免疫功能并未造成损伤，因而，添加下酸钢没有效果。４．２词料中添加下酸巧对黄韓血液指标的影响一血清ＴＰ是血淋己的主要化学物质之，其含量变化与机体健康、营养和疾病等状况密切相关，；动物机体内多余的氨基酸会在肝脏中分解成氨和碳骨架而氨在肝脏中合成尿素氮，，ＢＵＮ作为衡量机体蛋白释放到血液中因此，可将代谢的重要指标。转＂＂氨酶是体内氨基酸代谢过程中必不可少的催化剂，参与蛋白质代谢，在正常状态下，ＧＰＴ活性升高表明氨基酸代谢旺盛，，合成代谢加强蛋白质分解下降，有利于氮在体，，，减少氨基酸代谢产物对机体的毒害内的蓄积而ＧＯＴ活性升高说明尿素生成加快，ｓｓｆｉ因此，ＧＰＴ、ＧＯＴ活性高低反映蛋白质合成和分解代谢的状况。本研究结果表明，在低鱼粉饲料中添加下酸钢降低了血清ＢＵＮ和ＴＰ含量，降低肝脏ＧＰＴ活力，在高鱼粉饲料中添加下酸钢提高血清ＴＰ含量，降低肝脏ＧＰＴ活力，说明饲料中添加下酸钢会影响黄錯机体蛋白质代谢。下酸钢对蛋白质代谢影响的研巧在畜禽及鱼类上未曾研１７ 湖南农业大学硕丄－学位论文一。巧与报道，需进步研究机体健康状况与其抗氧化能力存在着密切关系一。般来说，正常状况下，动物体内的抗氧化系统处于动态平衡状态，当氧化胁迫超出了机体抗氧化防御系统的保护能为时，会产生过多的氧自由基，引起脂质过氧化产物的増加。ＳＯＤ是体内自由基的清。除剂，是衡量机体脂质氧化程本研究结，ＭＤＡ是脂质氧化的最终分解产物度的标准，果表明当低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢提高超氧化物歧化酶活力，降低了血清ＭＤＡ含量。胡卫等２０００研究发现，，说明低鱼粉饲料中添加下酸钢可提高黄錯机体抗氧化功能（）下酸钢能降低溃瘍性结肠炎大鼠肠粘膜组织中黄嚷吟氧化酶活性，増高还原性谷脫甘狀含量，黄嚷岭氧化酶活性降低，使氧自由基减少，还原性谷脫甘肤含量升高，清除ｗｔｉＺｈ２０１氧自由基，从而使细胞中不饱和脂肪酸脂质过氧化减少。ａｎｇ等（１）在２１日龄－－ｉｉ，，ＡＡ肉鸡日粮中添加Ｔ酸钥，发现添加〇．５ｇｋｇ和１．００ｇｋｇ了酸钢组肉鸡血清中ＳＯＤｔｗ。和过氧化物酶活性显著升高，ＭＤＡ含量降低张游琳等口ｏｉｌ）研究指出，在饲料中添加化５％〇下酸納后，与对照组相比，媛麵肝脏总抗氧化能力提高２５％，过氧化氨酶活Ｐｑ为提高１５％。在高鱼粉饲料中添加下酸钥对ＳＯＤ和ＭＤＡ无影响，可能原因是高鱼粉饲料未破坏机体抗氧化防御系统，产生过多的氧自由基，因此在高鱼粉中添加下酸钥对黄錯抗氧化能力无影响。脾脏属于外周免疫器官，脾脏的发育不良会对体液免疫和细胞免疫造成巨大的伤－乙醜葡萄糖胺和Ｎ－乙醜胞壁酸之间的Ｂ－４害。ＬＺＭ能催化细菌细胞壁中狀聚糖Ｎｌ，、糖昔键的水解，内含物逸出而使细菌溶解死，破坏肤聚糖支架导致细菌细胞壁破裂亡一，是种广谱抗菌效应分子，鱼类溶菌酶活性是反映鱼类免疫能力的重要指掠。ＳＯＤ在生物体内起到清除活性氧自由基的作用，可Ｗ増强吞隨细胞的吞嗟能力和促进免疫ＰＩ１蛋白的产生。本实验研巧结果表明，低鱼粉饲料中添加下酸钢能提离溶菌酶活力和脾体指数，高鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢提高了溶茜酶活力，说明饲料中添加下酸钢可提高机体免疫力。５小结，提高免疫功能低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢能提髙黄錯生长，増强抗氧化能力，高鱼粉饲料中添加下酸钢对黄錯生长和抗氧化能力没有影响，但可増强机体免疫功能。１８ 第Ｈ章饲料中添加微裹Ｔ废钢对黄緯肠道组织形态及与细胞増殖和葡错糖转运相关基因表达的影响第兰章饲料中添加微囊下酸钢对黄韓肠道组织形态及与细胞增殖和葡萄糖转运相关基因表达的影响１材料与方法１．１实验器材生物用全自动组织包埋机浙江金华科迪仪器设备有限公司切片机德国Ｌｅｉｋａ公司摊片机浙江金华科迪仪器设备有限公司烤片机德国Ｌｅｉｋａ公司光学蟲微镜日本Ｎｉｋｏｎ公司显微操作系统日本Ｎｉｋｏｎ公司制冰机郑州南北仪器设备有限公司移液器德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司ＣＦＸ９６实时巧光定量ＰＣＲ仪美国ＢＩＯＲＡＤ公司一ＤＹＣＰ－３１ＤＮ型电泳仪北京六仪器厂了０以、１６型台式高速冷冻离屯机湖南湘仪有限公司１．２肠道组织形态观察及指标测定方法试验结束后每网箱随机取３尾黄錯，解剖并取约２ｃｍ长的前肠中段组织，用生理盐水冲洗肠道内粘液及食糜，４％甲２４ｈ，石蜡切片包浸入酸溶液中固定，常规酒精脱水埋，切片厚度６ｕｒｎ，然后ＨＥ染色观察，采用ＳｃｉｏｎＩｍａｇｅ图像分析系统分析，每个样品观察３张不连续切片，每张切片测１０个绒毛的高度和隐窝的深度，测量后计算出平均值作为测定数据。１．３基因部分编码区克隆及基因表达定量°－用灭菌后解剖工具取部分肠道，清除内容物后置于８０Ｃ液氮中保存用于基因克隆及表达定量。１．３．１肠道总ＲＮＡ提取方法（１）在ＤＧ細处理的１．５ｍｌ离也管中加入１ｍｌＴｒｉｚｏｌ试剂，将１００肠道组织置于加１９ 湖南农业大学硕止学位论文有液氮的研体中研磨至粉状１０ｍｉｎ，取部分粉状肠道组织加入到离也管中静止，充分裂解。°（２）将裂解好的样品１２０００ｒｐｍ４Ｃ离也１０ｍｉｎ。（３）取上清液于１．５ｍｌ离也管中，加入２００ｕｌ氯仿，充分振荡，冰上静止ｌＯｍｉｎ。°（４）样品１２０００ｒｍ４Ｃ离也１０ｍｉｎ。ｐ°（５）、－２０Ｃ放置上层水相到１．５ｍｌ离屯管中，加入等体积的异丙醇，混匀，Ｉｈ。样品°１２０００ｒｐｍ４Ｃ离也１０ｍｉｎ。’（６）弃上清，加入１１１１１八％的古醇反复颠倒，洗徐沉淀，８０００ｒｐｍ４Ｃ离也ｌＯｍｉｎ。（７）弃７５％乙醇，重复步骤６。（８）弃７５％石醇，干燥，使管内酒精完全挥发。°（９）－８０Ｃ保存用３０ｕｌ无酶水溶解沉淀，。１．３．２ＲＮＡ检測方法（１）Ｗ无酶水为空白对照，分光光度计检测ＲＮＡ的浓度，ＲＮＡ样本的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０－１．ＲＮＡ样１．８．２值在．８２１之间说明品良好，若小于说明含蛋白杂质较多，大于２说明ＲＮＡ有降解。（２）用１．０％的琼脂糖凝胶电泳检测ＲＮＡ完整性，总ＲＮＡ电泳图谱呈现较清晰的２８Ｓ、１８Ｓ和巧，且２８Ｓ带亮度为１８Ｓ的两倍，表明ＲＮＡ完整，可用于后续实验。１．３．３部分编码区克隆一１．３．３．１ｃＤＮＡ第条链的合成：一ＭＴｃＤＮＡ第链的合成采用ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔｎ１ｓｔｓｔｒａｎｄｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ试剂盒，按Ｗ下操作步骤进行：°－入灭菌的ＰＣＲ管中在２０Ｃ冰箱取出试剂冰上解冻后，按Ｗ下试剂及体系加。３一１表．反转录第步反应体系Ｔａｂ３１ｈｅｆｉｒｉｉｏｎｓｓｅｍｌｅ．ｔｓｔｓｔｅｐｏｆｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｔａｓｅｒｅａｃｔｔｐｙ试剂体积ＶｏｌｕｍｅＲｅａｇｅｎｔｄＮＴＰｌｕｌＯｌｉｇｏｄＴＰｒｉｍｅｒｌｕｌＴｏｔａｌＲＮＡ２ｕｌ民ＮａｓｅｆｒｅｅｄＨ２〇６ｕｌＴｏｔａｌＶｏｌｕｍｅｌＯｕｌＲ°将ＰＣＲ管置于ＰＣ仪或水浴锅中，６５Ｃ变性５ｍｉｎ迅速置于冰上冷却２ｍｉｎ。，表３．２反转录第二步反应体系２０ 第兰章饲料中添加微巧Ｔ酸钥对黄錯肠道组织形态义与细胞增殖和葡靖穗转垣相关基因表达的影响Ｔａｂｌｅ３．２ｔｈｅｓｅｃｏｎｄｓｔｅｏｆｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｐ试剂民ｅａｇｅｎｔ体系Ｖｏｌｕｍｅ一Ｏｕ第步反应液ｌｌ５ｘｒｉ讯巧ｃｒｉｐｔＩＩＢｕｆｅｒ４ｕｌｐＲＮａｓｅｉｎｈ化ｉｔｏｒ０．５ｕｌＰｒｉｍ巧ｃｒｉｔＩｌＲＴａｓｅｌｕｌｐＲＮａｓｅｆｒｅｅ她２〇５．５ｕｌＴｏｔａｌＶｏｌｕｍｅ２０ｕｌ’ＰＣＲ、混匀ＰＣ民仪或水，Ｃ，将管在离也机上短暂离屯，置于于锅中反应程序为：４２°°°Ｃ－－６０ｍｉｎ，７０，１５ｍｉｎ，然后保存于２０Ｃ或８０Ｃ，用于基因部分编码区克隆。１２克隆引物设计：．３．３．在ＧｅｎＢａｎｋ中下载与黄錯亲缘关系较近的妒形目ＧＬｉｍ、ＳＧＬＴ１、ＰＣＮＡ、ＯＤＣ基因的编码序列，通过用ＭｅｇＡｌｉｇｎ软件比较，找出基因保守序列。在保守序列内，用ＰｒｉｍｅｒＰｒｉｍｉｅｒ５．０设计引物，由博尚生物科技有限公司合成。１．３．３ＰＣ民扩增．３编码区：一ＵＴ２ＷｃＤＮＡ第链为ＰＣＲ扩増模板，用已设计的引物对黄錯ＧＬ、ＳＧＬＴ１、ＰＣＮＡ、°３．３。ＯＤＣ基因的部分ＯＲＦ区进行ＰＣＲ扩増：９４Ｃ预变性，反应体系如表反应条件为°°°°ｉｎ９４Ｃ变性３０ＳＣ退火３０Ｓ，７２Ｃ延伸１５ｍ４０７２３ｍ％．ｉｎ，次Ｃ延伸１０ｍｉｎ。；，循环；°ＰＣＲ产物放置冰箱４Ｃ保存。表３．３反应体系Ｔａｂｌｅ３．３Ｒｅａｃ村ｏｎｓｓ化ｍｙ试剂民ｅａｇｅｎｔ剂量ＤｏｓａｇｅｃＤＮＡｌｕｌＰｒｉｍｅｒＨ／Ｐｒｉｍｅｒ－ｌｕｌＹ＠ＳＢＲＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑＴＭＩＩ１２．５ｕｌｄｄＨ〇９．５ｕｌ２ＴｏａｌＶｏｌｕｍｅ２５ｕｌｔ１．３ＰＣＲ扩増片段．３．４回收与纯化：用１．５％的琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣ民产物片段的大小，在蛋白凝胶成像系统中生５ｍ、成图像。根据ＰＣ民产物片段的大小切下所需的目的条带，置于灭菌的１．ｌ的离屯管？中，用Ｅ．Ｎ．Ａ．ｌＥｘ杜ａｔｉＫｉｔ纯化试剂盒纯化回收目的片段：．ＺＧｅｃｏｎ、（１）在紫外灯下小屯的将所需的ＤＮＡ片段切下来，尽量除去多余的凝胶。、（２）将目的片段转移到１．５ｍｌ离屯管中称取凝胶重量。°（３）、７００ｍ５５－Ｃ。向离屯管中加入ｌＢｉｎｄｉｎｇＢｕｆｆｅｒ。６５水浴至无胶状物２１ 湖南农业大学硕丄－学位论文（４）将上述融化溶液转移至ｍＢｉｎｄＴＭＤＮＡ纯化柱中，然后装入２ｍｌ的收集管中，室温下置２ｍｉｎＯｒｍ离也Ｉｍｉｎ，弃虑出液。如果溶液量太多。室温下，ｌＯＯＯ，重，静ｐ复步骤４。（５）加入５００ｕｒ溶液ｗａｓｈＢｕｆｆｅｒ至Ｈ近ｉｎｄＴＭＤＮＡ纯化柱中，室温下，１００００ｒｐｍ离瓜１ｍｉｎ，然后弃滤液。一（６）重复次步骤５。（７）ＤＮＡ纯化柱装．５ｍｌ３０ｕｌＤＥＰＣ水将入新１卧管中。向纯化柱膜中间上滴加，室温静置２－３ｍｉｎ。°ｎ、－（８）室温下，１２０００ｒｐｍ离也１ｍｉ，所得离屯产物即为目的ＤＮＡ片段，存于２０Ｃ备用。１．．５．３３连接转化：ＭＤ－ＤＮＡ１９Ｔ将纯化后的片段连接到ｐ载体上，连接体系如下表表３．４连接体系ｍｏｆ－Ｔａｂｌｅ３４ＳｓｔｅＴＡｌｉａｔｉｏｎ．ｙｇ试剂Ｒｅａｇｅｎｔ剂量ＤｏｓａｇｅＳｏｌｕｔｉｏｎＩ５ｕｌ－ＴｐＭＤ１９Ｖｅｃｔｏｒ０．５ｕｌＤＮＡ片段ＳｕｌＴｏｔａｌＶｏｌｕｍｅ１０．５ｕｌ°’加完试剂后短暂离也，４Ｃ冰箱连接过夜或１６Ｃ快速连接Ｉｈ。１．３．３．５转化‘取出保存在－８０Ｃ冰箱中的ＤＨ５化感受态细胞，置于冰上溶解；然后在超净工作台中，取５山的连接产物加入到５０山的ＤＨ５ａ感受态细胞中，用移液枪反复轻轻吹打混°匀。放置冰上３０ｍｉｎ，４２Ｃ水浴热激９０ｓ，立即冰上冷却几分钟，再向感受态细胞中’－加入５００ｕｌＬＢ液体培养基中，在巧Ｃ的条件下２００ｒｐｍ摇床振荡培养２３ｈ。１．３．３．６挑单克隆及测序、培养液体出现混浊后，，，４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ离屯１ｍｉｎ弃掉上层澄清液留下ｌＯＯｕｌ的溶液并用移液枪轻轻吹打混匀。吸取５０山左右溶液加到含有ＡＭＰ１００ｍｇ／Ｌ的固体（）’一ＬＢ。－２ｈ。待出平板上，用涂物棒将其涂布均匀３７Ｃ培养箱中倒置培养８１现单菌落一２００山ＬＢ培养基的离屯、后，，随机挑选多个单菌落，分别加入含有管中用移液枪轻°－化混浊后Ｍ１３进行ＰＣ民来筛选阳性克，３７Ｃ培养４轻吹打混匀，出现，用通用引物隆，反应体系如下表：２２ 第Ｓ章饲料中添加微窠Ｔ酸纳对黄儀肠道姐织形态及与细胞增殖和荀萄糖转运相关基因表达的影响表３．５反应体系Ｔａｂｌｅ３．５Ｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ试剂Ｒｅａｇｅｎｔ剂量ＤｏｓａｇｅＰｒｅｍｉｘ１２．５ｕｌ无菌水８．５ｕｌＭ１３ＦｌｕｌＭ１３民ｌｕｌ菌液２山ＴｏｔａｌＶｏｌｕｍｅ２５ｕｌ‘°°°反应程序；９５Ｃ预变性３ｍｉｎ；％Ｃ变性３０Ｓ，％Ｃ退火３０Ｓ，７２Ｃ延伸９０Ｓ，共‘°３５个循环；７２Ｃ延伸ｌＯｍｉｎ，４Ｃ保存。用琼脂糖凝胶电泳进行ＰＣ民产物大小的检测，如果扩増产物与目的条带差不多大，就将其菌液送至博尚生物技术有限公司测序。１．３．４巧光定量步骤４Ａ一１．３．．１ｃＤＮ第条连的合成：一ｃＤＮＡ第链的合成米用ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭＩＩＲＴｒｅａｇｅｎｔＫｉｔｗｉｔｈｇＤＮＡＥｒａｓｅｒ试剂盒（宝生物工程有限公司），按Ｗ下操作步骤进行：按下试剂及体系加入无ＲＮＡ酶的ＰＣＲ管中，消除样品中ＤＮＡ。表一３．６反转录第步反应体系Ｔａｂｌｅ３．６ｔｈｅｆｉｒｓｔｓｔｅｐｏｆｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ试剂民閒ｇｅｎｔ体积５ｘＤＮＡＥｒａｓｅｒ良ｕｆｅｒ２ｕｌｇＴｏｔａｌＲＮＡ２山ＤＮＡＥｒａｓｅｌｕｌｇＲＮＡａｓｅｆｒｅｅｄＨ２０ＳｕｌＴｏａＶｏｕｍｅｌＯｕｔｌｌＩ°将ＰＣＲ管置于ＰＣ民仪或水浴锅中，４２Ｃ，２ｍｉｎ变性，迅速取出置于冰上。按下表中试剂及体系加入ＰＣ民管中进行反转录第二步反应表３．７反转录第二步反应体系Ｔａｂｌｅ３．７化ｅｓｅｃｏ田ｄｓｔｅｐｏｆｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｔａｓｅｒｅａｃｔｉｏｎｓｓｔｅｍｐｙ试剂民ｅ嫂ｅｎｔ体系消隙ＤＮＡ后反应液Ｏｕｌ１ＳｘｐｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＢｕｆｆｅｒ２４ｕｌＲＴｐｒｉｍｅＭｉｘｌｕｌＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴＥｎｚｙｍｅＭｉｘ１ｌｕｌＲＮａｓｅｆｒｅｅｄＨ２０４ｕｌＴｏｔａｌＶｏｌｕｍｅ２０ｕｌ２３ 湖南农业大学硕ｉ学位论文’、、ＰＣ民３７将上述反应液在离屯管短暂离屯混匀，Ｃ２０ｍｉｎ后，，置于仪或水浴锅经°°°８５Ｃ５ｓｅｃ终止反应－２０Ｃ或－Ｃ冰箱内。，产物保存于８０１．３．４．２巧光定量基因特异性引物设计与合成通过检测，根据ＮＣＢＩ上ＧｅｎｅＢａｎｋ上已经提交的黄錯ＧＬＵＴ２、ＳＧＬＴ１、ＰＣＮＡ、ＯＤＣ基因的ＯＲＦ区设计英光定量引物，引物序列见表。引物送博尚公司合成。表３．８克隆及定量引物Ｔａｂｌｅ３．８ＰｒｉｍｅｒｓｆｏｒｄｏｎｅａｎｄＰＣＲ＇＇基因引物３－５）（用途ＦＣＴＧＧＣＴＡＴＴＧＴＣＡＴＴＧＧＣＡＴＣＣＧＬＵＴ２克隆ＲＧＣＡＡＣＣＧＡＣＡＣＣＡＴＡＧＴＧＡＡＧＡＦＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＴＡＴＣＣＴＡＴＧＴＧＧＳＧＬＴｌ克隆民ＴＴＧＡＡＧＡＴＧＧＡＧＧＴＡＡＧＴＧＡＧＣＦＡＴＣＡＣＴＧＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＧＧＡ心…ＰＣＮＡ克隆民ＣＴＣＴＴＴＧＴＣＣＡＣＧＴＴＧＣＴＧＧＴＦＴＧＣＣＴＣＧＣＡＴＴＡＣＴＣＣＴＴＴＣＴＡＯＤＣ克隆民ＣＴＧＣＴＣＴＴＴＧＧＡＡＣＧＧＡＴＴＧＡＡＦＧＣＣＡＧＧＴＡＡＴＡＧＧＣＴＴＧＧＡＣＴＴ…占ｅＧＬＵＴ２？巧光定量ＲＧＧＧＣＡＴＡＧＡＧＧＣＡＡＣＡＧＡＡＡＧＦＴＧＴＴＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＧＴＡＡＣＴＧＡＧＧ…ＡＳＳＧＬＴｌ。Ｒ巧光定量ＣＡＧＣＡＧＧＡＴＡＣＴＴＴＡＣＣＣＡＧＡＴＧＡＦＡＴＧＧＡＣＣＴＡＧＡＴＧＴＧＧＡＧＣＡＧＣ＾ＰＣＮＡ巧光定量Ｒ＾ＡＣＧＧＣＡＧＡＴＡＣＧＧＧＣＡＡＡＣＴＦＡＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＡＴＧＴＧＡＴＴＧ＊ＯＤＣ巧光，定山量ｇ民ＧＴＣＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＴＴＧＡＴＴＡＣＦＣＣＡＣＡＧＧＴＣＡＧＡＴＧＴＣＣＣＡＣＴＡ…山＾ＲＰＬ１３茨光定量Ｒ＾ＣＴＣＡＧＴＧＣＴＧＴＣＴＣＣＣＴＴＣＴＴＡＧ１．４．３．３实时巧光定量ＰＣ艮＠采用ＳＹＢ氏ＧｒｅｅｎＩＩ染料法，反应体系如下，ＳＹＢＲＰｒｅｍｉｘＢｅＴａｑＴＭＩＩ１２．５ｕｌ，上下游引物各ｌｕｌ，模板ｃＤＮＡｌｕｌ，无菌水９．５山。八连管中加好样品后在离也机上短’’°、５ＣＣ变性５Ｃ退火２５７２Ｃ延１５ｓ４０暂离屯。反应程序：９预变性３０ｓ；％ｓ，５５ｓ，长，个’循环７０－９５Ｃ信号收集６０ｓ。程序完成之后，将数据导出。；１４４．３．．数据处理：－＾ｎ萊光定量ＰＣＲ反应结束后，收集目的基因与内参基因的Ｃｔ值，运用２方法进行计＝０－‘—算；０；Ｃｔ。ＳｉｍａＰｌｏｔ软件进付作图。，公式为ＡＡＣｔ日的＾＾巧内＃巧巧）头於沿内女馴）对醒ｇ（２４ 第Ｈ章饲料中添加微囊了酸钢对黄錯麻道组织形志及与细胞增殖和葡萄糖转运相关基因表达的影响２结果２．１肠道测量指标及上皮粘膜形态３１由表．９和３．０可知：高鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢对黄錯肠道绒毛形态无显著性影，响，但低鱼粉饲料中添加下酸钢能显著影响肠道绒毛形态与对照组相比，当低鱼粉饲料中添加５００ｍｇ／ｋｇ和１０００ｍｇ／ｋｇ下酸钢时黄錯肠道绒毛隐窝深度显著降低（户０．０５），当添加１０００ｍｇ／ｋｇ下酸钢时黄錯绒毛髙度／隐窝深度值显著提高（ｆ＜０．０５）。由图３．１、３．２可知：在低鱼粉饲料组中，未添加下酸钢组黄儀前肠绒毛相对较细，肠，，绒毛顶端偶见肠上皮脱落粘膜结构不完整，添加Ｔ酸钥组绒毛粗壮，排列整齐粘，，排列紧密，膜表面纹状缘结构清晰肠粘膜上皮细胞形状规则，染色鲜明其中了酸钢添加量为１０００ｍｇ／ｋｇ时效果最明显，但在高鱼粉饲料中添加了酸钢对黄錯前肠绒毛形态没有显著改善。３表．９低鱼粉饲料中添加了酸钢对黄錯肠道形态的影响Ｔａｂｌｅ３．９Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙｉｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅｉｎｌｏｗｆｌｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｏｎｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａ项目低鱼粉组ＬｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓＩｔｅｍｓ０２５０ｍｇ／ｋｇ５００ｍｇ／ｋｇ１０００ｍｇ／ｋｇ绒毛高度（ｕｍ）７４．１７±２０．９６２５主１３．５５７０４±１６８．＝ｈ１７６．．３０．６３３３．２Ｖｉｌｌｕｓｈｅｉｇｈｔ隐窝深度（ｕｍ）ｈｈｂ。。＂＂２７．８３±７少．２±１．１．５７±１．８３２００．２〇８８３±４．６６３．３６Ｃｒｙｐｔｄｅｐｔｈ绒毛高度／隐窝深度（Ｖ／Ｃ值）。°ａ＂ａｂ＇＊ｈｂ２±５．０７〇．７５０．９０２．４９±０．４８３．８７±０．８ｆ化０．Ｖｉｌｌｕｓｈｅｉｇｈｔ／Ｃｒｙｐｔｄｅｐｔｈ表３Ｊ０巧鱼粉饲料中添加了酸钢对黄绪肠道形态的巧响Ｔａｂｌｅ３．１０ＥｆＴｅｃ权ｏｆｄｉｅ化ｒｙｉｎｄｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａ化ｉｎｈｉｈｆｉｓｈｍｅａｌｏｎｍｏｒｐｈｏｌｏｏｆｙｇｇｙｉｎ化ｓ村ｎａｌｍｕｃｏｓａ项目髙鱼粉组ＨｉｇｈｔｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓＩ化ｍｓ０２５０ｍ／ｋ５００ｍ／ｋ１０００ｍ／ｋｇｇｇｇｇｇ绒毛高度（ｕｒｎ）６８．４７±１９．７ｌ６５．５０±７．５０７６，２０±１３．３８７６．８０±６．６９Ｖｉｌｌｕｓｈｅｉｈｔｇ隐窝深度（ｕｍ）３０．３化１．２５３６．９５±１２．３７３０．８７±１２．５９３１．３０±８．９３Ｃｒｙｐｔｄｅｐｔｈ绒毛高度／隐窝深度（Ｖ／Ｃ值）２．２化０．７３１１±１２４．．９０．８４２．８０±．２．６２±０９３Ｖｉｌｌｕｓｈｅｉｇｈｔ／Ｃｒｙｐｔｄｅｐｔｈ２５ 湖南农业大学硕±学位论文臟图３．１黄錯前肠上皮粘膜形态，Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４分别代表添加０、２５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ了酸销的低鱼粉饲料组ｌｉｗＦｉｇｕｒｅ３．１ＩｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａｍｏｒｈｏｏｇｙＬＩＬ２Ｌ３Ｌ４ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｅｔｓｅｒｉｅｓｉｔｈ０ｐ，，，，，２５０ｍ／ｋｇ５００ｍ／ｋ１０００ｍ／ｋｓｏｄ山ｍｂｕｔｒａｋｇ，ｇｇ，ｇｇｙ图３．２黄錯前肠上皮粘膜形态，ＨＩ、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４分别代表添加０、２５０ｍ／ｋｇ、ＳＯＯｍｇ／ｋｇ、ｇ１０００ｍｇ／ｋｇ下酸钢的髙鱼粉饲料沮ｒｅ＊．ｔｔｎａｒｅｓｅｎｔｔ化ｒｉｅｓＦｉｕ３１ＩｎｅｓｉｌｍｕｃｏｓａｍｏｉｈｏｌｏＨ１Ｈ２Ｈ３Ｈ４ｉｘｈｉｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｗＷｈ０ｇｐｇｙ，，，，ｐｇ，２５０ｍｇ／ｋｇ５００ｍ／１０００ｍ／ｋｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａ化，ｇ咕，ｇｇｙ２６ 第Ｈ章饲料中添加微巧下酸钥对黄轄肠道組织形志及与细胞増殖和葡衙糖转运相关基因表达的影响２．２肠道消化吸收巧活力＋＋２可知Ｋ－由表３．１１和３．１，低鱼粉饲料中添加下酸納对黄錯肠道内ＮａＡＴＰ酶、淀＞粉酶、脂肪酶、膜蛋白酶活力无显著影响（Ｐ０．０５，显著影响肌酸激酶、碱性憐酸酶的）活为。与低鱼粉对照组相比，低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢后黄錯肪道内肌酸激酶活为思著升高ＣＰ＜〇．〇５），低鱼粉饲料中添加５００ｍｇ／ｋｇ和ｌＯＯＯｍｇ／ｋｇＴ酸钢时肠道内碱性憐酸＜０酶活力显著升高戶．０５。高鱼粉饲料中添加下酸钢对黄錯肠道内肌酸激酶、脂肪酶和（）＋＋膜蛋白酶活力无影响－ＡＴＰ、，但盘著影响了ＮａＫ酶、碱性碟酸酶淀粉酶、活力。与高鱼粉对照组相比，高鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢碱性磯酸酶活力显著下降（户＜０．０５），添加＋＋２５０５００Ｋ－ＡＴＰ户＜０ｍｇ／ｋｇ和ｍｇ／ｋｇ下酸纳黄韓肠道内Ｎａ酶活力显著升高（．０５）。表３．１１低鱼巧饲料中添加下酸納对黄辖肠道消化吸收庚活力的影巧Ｔａｂｌｅ３．１１Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙ山ｅｌｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａ化ｉｎｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓ〇凸ｔｈｅａｃ村ｖｉｔｉｅｓｏｆｙｄｉｅｓｔｉｖｅａｎｄａｂｓｏｒｔｉｖｅｅｎｚｍｅｓｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎｅｇｐｙ项因低鱼粉组ｌｏｗｆｉ油ｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓＩｔｅｍｓ０２５０ｍｇ／ｋｇ５００ｍｇ／ｋｇ１０００ｍｇ／ｋｇ＇＊－±０ＮａＫＡＴＰ酶１．４７２．５±０１９２７４±０．７２２．３８±０．３５．９５．．＞。＊＝肌酸激酶ＣＫ０．９４±０．快３．６６功．２８１．４９功．５１６．３８±０．９４３＾＇＊＊＇２４乂２±４２２３±．４４４５±６６．３９±．０碱性槐酸酶ＡＰＫ１．．８２．５．３０５１９８００３７±００５２０３７±００１淀粉酶ａｍｌａｓｅ０．３化．０３．０．３功．０３．．ｙ．±２２４９３±４７０２４２０±４２０別±４８６脂肪酶ｌｉｐａｓｅ２３．６５．６０．．．．．７９．膜蛋白酶ｓｉｎ２８２１．５化１２６．７５％９２．８４±２３乂２１２７９０．Ｚ３±２７４．０３巧０８．６化１８５．７１ｔｒｙｐ表３．１２商鱼巧饲料中添加了酸钥对黄辖肠道消化吸收酶活力的影巧Ｔａｂｌｅ３．１２Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙｉｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｓｏｄｈｉｍｂｕｔｙｒａｔｅ山ｈｉｇｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｏｎ化ｅａｃｔｉｖ地ｅｓｏｆｄｉｇｅｓｔｉｖｅａｎｄａｂｓｏｒｐｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅｓｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎｅ项目高鱼粉组ｈｉｇｈｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓ【ｔｅｒｎｓ０２５５０００ｍ／ｋｍ／ｋ１０００ｍ／ｋｇｇｇｇｇｇ＋＋３ｂ＇＊＂－ＮａＫＡＴＰ酶１胞功．１１１．４８±０胞１．４３±０．０８０．９９±０．１８肌酸激酶ＣＫ０．１８±０．０４０．１４±０．０３０．１８±０．０５０．１５±０．０６。ａｂ。ｂ碱性磯酸酶ＡＰＫ９０．０化１３．９１４６．７７±９．９２３１．３化７．０５５７．７化１３．９４ｂ。６＇＇ａ±±０淀粉酶ａｍｌａｓｅ．４８Ｏ．０．４．．．００．２．０ｙ０Ｉ〇功０４０４５８８功３±．±１．．．脂肪酶ｉａｓｅ３０．０４３．０２２８．４６±４３３２９．７８４４２９６７±４ｌｐ９２膜蛋白酶ｔｒｙｓｎ５６１７±１４７．４３．７化６．５０８８９．０３巧４２．７５２．９０±２１６．９４ｐｉ．９９１６１９８０２７ 湖南农业大学硕±学位论文２．３基因克隆序列ＯＤＣ：１０２０３０４０５０６０１ＴＴＣＴＡＴＧＣＣＧＴＣ７ＶＡＡＴＧＣＡＡＣＧＡＣＡＧＣＣＧＡＧＣＴＧＴＡＧＴＴＡＴＧＡＣＡＣＴＧＧＣＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡ１ＦＹＡＶＫＣＮＤＳ民ＡＶＶＭＴＬＡＳＬＧ７０８０９０１００１１０１２０６１ＡＴＴＧＧＣＴＴＴＧＡＣＴＧＴＧＣＡＡＧＣＡＡＧＡＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＣＣＡＧＴＣＴＡＴＧＧＧＧＧＴＧＧＣＴ２１ＩＧＦＤＣＡＳＫＴ丘ＩＱＬＶＱＳＭＧＶＡ１３０１４０１５０１６０１７０１８０１２１ＣＡＡＡＧＣＡＧＡＡＴＡＡＴＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣＣＣＣＴＧＴＡＡＧＣＡＡＧＴＴＴＣＴＣＡＧＡＴＣＡＡＧＴＡＴＧＣＡＴＣＣ４１ＱＳ民ＩＩＹＡＮＰＣＫＱＶＳＱＩＫＹＡＳ１９０２００２１０２２０２３０２４０１８１ＡＣＣＣＡＴＧＧＧＧＴＣＣＡＡＡＴＧＡＴＧＡＣＣＴＴＴＧＡＴＡＧＣＧＡＧＧＴＧＧＡＧＣＴＣＡＴＧＡＡＡＧＴＧＧＣＣＣＧＣ６１ＴＨＧＶＱＭＭＴＦＤＳＥＶ巨ＬＭＫＶＡＲ２５０２６０２７０２８０２９０３００２４１ＴＡＴＣＡＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＡＣＴＣＧＴＧＣＴＧＣＧＴＡＴＴＧＣＣＡＣＡＧＡＴＧＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＴＧＴ８１ＹＨＤＳＡＫＬＶＬ民ＩＡＴＤＤＳＫＡＶＣ３１０３２０３３０３４０３５０３６０３日１ＣＣＴＣＴＣＡＧＴＧＴＡＡＡＧＴＴＴＧＧＧＧＣＣ冉ＣＡＣＴＣＡＡＡＧＣＴＴＧＣＣＧＡＧＧＴＣＴＴＣＴＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴ１日１ＰＬＳＶＫＦＧＡＴＬＫＡＣ民ＧＬＬＥＱＡ３７０３８０３９０４００４１０４２０３６１ＡＡＡＧＡＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＡＴＧＴＧＡＴＴＧＧＡＧＴＣＡＧＣＴＴＣＣＡＴＧＴＴＧＧＣＡＧＴＧＧＴＴＧＣＡＣＴＧＡＴ１２１ＫＥＬＧＬＤＶＩＧＶＳＦＨＶＧＳＧＣＴＤ４３０４４０４５０４６０４７０４８０４２１ＣＣＣＡＡＧＡＣＣＴＴＣＡＣＣＣＡＧＧＣＴＡＴＴＧＣＴＧＡＴＧＣＣＣＧＣＴＧＴＧＴＣＴＴＴＧＡＴＡＴＧＧＧＧＧＡＴＧＡＡ１４１ＰＫＴＦＴＱＡＩＡＤＡ民ＣＶＦＤＭＧＤＥ４９０５００己１０己２０５３０５４０４８１ＣＴＧＧＧＴＴＴＣＡＡＣＡＴＧＡＡＡＣＴＧＣＴＧＧＡＣＡＴＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＴＣＣＣＣＧＧＧＴＣＣＧＡＴＧＡＣＴＣＴ１６１ＬＧＦＮＭＫＬＬＤＩＧＧＧＦＰＧＳＤＤＳ５己０５６０５７０５８０５９０６００５４１ＧＣＡＣＴＴＡＡＡＴＴＴＧＡＡＧＡＧＡＴＣＡＣＡＧＣＴＧＴＡＡＴＣＡＡＣＣＣＡＧＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＴＡＴＴＴＣＣＣＴ１８１ＡＬＫＦ巨ＥＩＴＡＶＩＮＰＡＬＤＫＹＦＰ６１０６２０６３０６４０６５０６６０６０１ＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＧＴＧＴＴＡＡＧＡＴＣＡＴＴＧＣＴＧＡＡＣＣＡＧＧＡＣＧＣＴＴＴＴＡＴＧＴＧＧＣＣＴＣＴＧＣＴＴＡＣ２０１ＡＤＴＧＶＫＩＩＡＥＰＧ民ＦＹＶＡＳＡＹ６７０６８０６９０７００７１０７２０６６１ＡＣＡＴＴＧＧＴＴＧＴＣＡＡＣＡＴＣＡＴＴＧＣＣＡＡＧＡＡＡＧＴＣＡＴＣＡＴＧＧＡＴＧＡＡＧＡＣＴＴＧＧＡＴＴＣＴＧＡＴ２２１ＴＬＶＶＮＩＩＡＫＫＶＩＭＤＥＤＬＤＳＤ７３０７４０７己０７６０７７０７８０７２１ＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＡＡＧＧＡＡＣＣＡＧＴＡＡＣＡＧＧＡＣＧＣＴＧＡＴＧＴＡＴＴＡＴＧＴＴＡＡＴＧＡＴＧＧＡＧＴＧＴＡＣ２４１ＥＥＤ巨ＧＴＳＮ民ＴＬＭＹＹＶＮＤＧＶＹ７９０８００８１０７８１ＧＧＡＴＣＴＴＴＣＡＡＣＴＧＴＡＴＡＣＴＣＴＴＴＧＡＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＴＧＴ２６１ＧＳＦＮＣＩＬＦＤＨＡＨＣ图３．３ＯＤＣ基因编码区部分片段克隆序列Ｆｉｇｕｒｅ３．３ｃｌｏｎｉｎｓｅｕｅｎｃｅｏｆａｒｔｉａｌＯＲＦｏｆＯＤＣｇｑｐＰＣＮＡ：１０２０３０４０５０６０１ＡＴＣＡＣＴＧＡＡＧＣＣＴＧＣＴＧＧＧＡＣＧＴＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＧＧＣＡＴＣＴＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＡＴＧＧＡＣＴＣＣ１ＩＴ臣ＡＣＷＤＶＳＳＳＧＩＳＬＱＳＭＤＳ７０８０９０１００１１０１２０６１ＴＣＴＣＡＣＧＴＣＴＣＣＣＴＧＧＴＣＣＡＧＣＴＣＡＣＣＣＴＣＣＧＧＣＡＴＧＡＣＧＧＣＴＴＣＧＡＣＴＣＧＴＡＣＣＧＣＴＧＣ２１ＳＨＶＳＬＶＱＬＴＬ民ＨＤＧＦＤＳＹ民Ｃ２８ 第Ｈ章饲料中添加微裹了酸钢对黄轄肠道组织形态及与细胞増殖和葡萄糖转运相关基因表达的影响１３０１４０１５０１６０１７０１８０１２１ＧＡＣＡＧＧＡＡ．ＣＣＴＣＧＣＣＡＴＧＧＧＡＧＴＣＡＡＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＧＴＣＴＡＡＡＡＴＣＣＴＧＡＡＧＴＧＴＧＣＡ４１Ｄ民ＮＬＡＭＧＶＮＬＳＳＭＳＫＩＬＫＣＡ１９０２００２１０２２０２３０２４０１８１ＧＧＡＡＡＣＧＡＧＧＡＣＡＴＣＡＴＣＡＣＣＣＴＣＡＧＧＧＣＡＧＡＡＧＡＣＡＧＴＧＣＡＧＡＣＡＣＡＣＴＴＧＣＣＣＴＴＧＴＧ６１ＧＮＥＤＩＩＴＬ民ＡＥＤＳＡＤＴＬＡＬＶ２５０２６０２７０２８０２９０３００２４１ＴＴＴＧＡＧＡＣＣＡＴＣＡＡＴＣＡＧＧＡＧＡＡＡＧＴＧＴＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＡＴＧＡＡＡＣＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＡＧＡＴ８１ＦＥＴＩＮＱＥＫＶＳＤＹＥＭＫＬＭＤＬＤ３１０３２０３３０３４０３５０３６０３０１ＧＴＧＧＡＧＣＡＧＣＴＧＧＧＴＡＴＴＣＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＧＴＡＣＡＧＣＴＧＴＧＴＧＧＴＧＡＡＧＡＴＧＣＣＡＴＣＴＧＧＧ１０１ＶＥＱＬＧＩＰＥＱ巨ＹＳＣＶＶＫＭＰＳＧ３７０３８０３９０４００４１０４２０３６１ＧＡＧＴＴＴＧＣＣＣＧＴＡＴＣＴＧＣＣＧＴＧＡＣＣＴＣＴＣＣＣＡＧＡＴＴＧＧＣＧＡＣＧＣＣＧＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＴＴＧＣ１２１巨ＦＡ民１Ｃ民ＤＬＳＱＩＧＤＡＶＭＩＳＣ４３０４４０４５０４６０４７０４８０４２１ＧＣＣＡＡＧＧＡＴＧＧＡＧＴＣＡＡＧＴＴＣＴＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＣＡＧＧＡＡＡＣＧＴＣＡＡＧＣＴＧ１４１ＡＫＤＧＶＫＦＳＡＳＧＥＬＧＴＧＮＶＫＬ４９０５００４８１ＴＣＣＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＧＡＧ１６１ＳＱＴＳＮＶＤＫＥ图３．４ＰＣＮＡ基因编码区部分片段克隆序列Ｆｉｇｕｒｅ３．４ｃｌｏｎｉｎｇｓｅｑｕｅｎ说ｏｆｐａｒｔｉａｌＯＲＦｏｆＰＣＮＡＧＬＵＴ２：１０２０３０４０５０６０１ＣＴＧＧＣＴＡＴＴＧＴＣＡＴＴＧＧＣＡＴＣＣＴＡＡＴＣＡＧＣＣＡＧＧＴＡＡＴＡＧＧＣＴＴＧＧＡＣＴＴＴＧＴＡＣＴＴＧＧＴ１ＬＡＩＶＩＧＩＬＩＳＱＶＩＧＬＤＦＶＬＧ７０８０９０１００１１０１２０６１ＡＡＴＧＡＴＧＡＴＡＴＧＴＧＧＣＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＴＧＧＴＣＴＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＧＣＡＡＴＡＴＴＧＣＡＡＡＣＣ２１ＮＤＤＭＷＰＬＬＬＧＬＳＧＡＰＡＩＬＱＴ１３０１４０１５０１６０１７０１８日１２１ＴＴＴＣＴＧＴＴＧＣＣＴＣＴＡＴＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＣＣＣＧＡＧＧＴＡＣＣＴＴＴＡＣＡＴＴＣＴＡＣＴＧＧＧＣＡＡＧＧＡＧ４１ＦＬＬＰＬＣＰＥＳＰ民ＹＬＹＩＬＬＧＫＥ１９０２００２１０２２０２３０２４０１８１ＣＡＡＧＡＧＧＣＴＣＧＡＡＡＡＡＧＴＣＴＡＴＣＴＣＧＴＣＴＡＡＡＧＧＧＧＧＣＡＴＡＴＧＡＴＧＣＡＡＣＴＴＣＴＧＡＴＣＴＧ６１Ｑ己Ａ民ＫＳＬＳ民ＬＫＧＡＹＤＡＴＳＤＬ２５０２６０２７０２８０２９０３００２４１ＧＧＡＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＡＴＡＡＧＧＡＡＣＣＣＡＧＧＡＴＣＴＣＴＡＴＣＣＴＴＡＧＴ８１ＧＥＭＫ民ＥＫＥＤＡＤＫＥＰＲＩＳＩＬＳ３１０３２０３３０３４０３５０３６０３０１ＣＴＧＡＴＣＣＴＣＴＣＣＴＣＴＧＴＧＴＡＣＡＧＧＡＧＧＣＡＧＣＴＧＴＴＧＧＴＴＧＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＧＣＡＣＣＴＣＴＣＣ１日１ＬＩＬＳＳＶＹ民民ＱＬＬＶＡＬＭＭＨＬＳ３７０３８０３９０４００４１０４２日３６１ＣＡＧＣＡＧＴＴＧＴＣＴＧＧＣＧＴＣＡＡＴＧＣＡＡＴＣＴＴＴＴＡＴＴＡＣＴＣＣＡＣＧＧＡＴＡＴＣＴＴＣＡＣＴＣＧＡＧＣＴ１２１ＱＱＬＳＧＶＮＡＩＦＹＹＳＴＤＩＦＴ民Ａ４３０４４０４５０４６０４７０４８０４２１ＧＧＴＧＴＣＡＧＴＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＡＴＧＣＣＡＣＴＡＴＡＧＧＡＧＴＴＧＧＧＧＴＣＧＴＴＡＡＣＡＣＡＧＴＣＴＴＣＡＣＴ１４１ＧＶＳＱＰＡＹＡＴＩＧＶＧＶＶＮＴＶＦＴ４９０４８１ＡＴＧＧＴＧＴＣＧＧＴＴＧＣ１６１ＭＶＳＶ图３．５ＧＬＵＴ２基因编码区部分片段克隆序列Ｆｉｕｒｅ３．５ｃｌｏｎｉｎｓｅｕｅｎｃｅｏｆａｒｔｉａｌＲＦｏｆＬＵＴ２ｇｇｑｐＯＧ２９ 湖南农业大学硕±学位论文ＳＧＬＴ１：１０２０３０４０５０６０１ＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＴＡＡＣＣＣＡＴＧＣＧＡＡＡＧＧＴＧＧＣＴＣＡＣＴＴＣＴＧＧＣＴＧＣＴＴＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＣＴＧ１ＡＫＮＬＴＨＡＫＧＧＳＬＬＡＡＹＬＫＩＬ７０８０９０１００１１０１２０６１ＣＣＴＴＴＣＴＴＴＧＣＴＧＴＴＡＴＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＧＡＴＡＣＴＴＴＡＣＣＣＡＧＡＴＧＡＴＧＴＧ２１ＰＦＦＡＶＭＬＰＧＭＩＳ民ＩＬＹＰＤＤＶ１３０１４０１５０１６０１７０１８０１２１ＧＣＧＴＧＴＧＴＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＴＴＧＴＧＣＡＧＡＣＴＧＡＴＴＴＧＴＧＧＣＡＡＣＣＣＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＧＧＡＣ４１ＡＣＶＥＰＥＬＣ民ＬＩＣＧＮＰＶＧＣＳＤ１９０２００２１０２２０２３０２４０１８１ＡＣＣＴＣＣＴＡＴＧＣＣＡＡＧＣＴＧＧＴＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＧＣＧＡＧＧＴＣＴＧＡＴＧＣＴＧ６１ＴＳＹＡＫＬＶＭＥＬＬＰＡＧＬ民ＧＬＭＬ２４１ＴＣＡ８１Ｓ闻义６ＳＧＬＴ１基因编码区部分片段克降序列Ｆｉｇｕｒｅ３，６ｃｌｏｎｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｐａｒｔｉａｌＯＲＦｏｆＳＧＬＴｌ２．４低鱼粉饲料中添加下酸钢对黄錯肠道细胞增殖与葡萄糖转运载体基因表达的影响由下图可知，低鱼粉饲料中添加下酸纳能显著増加肠道葡萄糖转运载体巧化、ＧＬＵ）和与细胞増殖相关基因（ＰＣＮＡ、ＯＤＣ）的表达。当了酸纳添加量为５００ｍｇ／ｋｇ时，ＳＧＬＴ１、ＧＬＵＴ２、ＰＣＮＡ、ＯＤＣ表达量最高。Ａ？１２ＰＣＮ＿ｍＲＮＡｅｘｒｅｓｓｉｏｎＯＤＣｍＲＮＡｐｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ４０ｅｆ辛１－１０下３。－ｍ］２。－Ｉ１０，２－Ｋ費Ｐｉ…兔，里＇，下‘、去ｆ的ａａ，ａ｜｜＾＇‘世．於＇１．訓Ｌ．—．１１已可於３瞬Ｖ盤窜司子０ＴＪＩＩＩ０早０ｍｇ／ｋｇ２５０ｍｇ／ｋｇ５００ｍｇ／ｋｇ１０００ｍｇ／ｋｇ０ｍｇ／ｋｇ２５０ｍｇ／ｋｇＳＯＯｍｇ／ｋ＾ＯＯＯｍｇ／ｋｇ４０ＲＮＡ，〇ＧＬＵＴ２ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ１ＳＧＬＴｌｍｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ］…玉－厚￣４０呵＊‘－３０共２０．号ｂ１０：ｒｉ■＇Ｉ義甲邱■■．ｖ／＾早ｙ，ｕ＾＾Ｑ＾０ｍｇ／ｋｇ２５０ｍｇ／ｋｇＳＯＯｍｇ／ｋｇ１０００ｍｇ／ｋｇ０ｍｇ／ｋｇ２５０ｍｇ／ｋｇ５００ｍｇ／ｋｇ１０００ｍｇ／ｋｇ图３．７低鱼粉组黄鲜肠道４种基因表达丰度Ｆｉｕｒｅ３．７ＦｏｕｒｅｎｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎｅｏｆＭ．ａｌｂｕｓｆｅｄｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｅｒｉｅｓｇｇｐ３０ 第Ｈ章饲料中添加微巧Ｔ酸钥对黄饒肠道組织形态及与细胞増殖和葡掛糖转运相关基因表达的影响３讨论３．１Ｔ酸纳对肠道细胞増殖及肠道形态的影响鸟氨酸脱幾酶（ｏｒｎｉｔｈｉｎｅｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ＯＤＣ）是多胺代谢中的关键酶，广泛存在于动物各个组织中，对肠道细胞的増生、移行和分化起重要作用。増殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｅｎ，ＰＣＮＡ是分子量为３６ＫＤ的蛋白质，是ＤＮＡ多聚酶ａｇ）的辅酶蛋白，在细胞増殖的启动上起重要作用，是反映细胞増殖状态的良好指标。本研究结果表明，，低鱼粉饲料中添加了酸钢修复了小肠上皮粘膜形态结构降低了隐窝，Ｐ深度，増加了绒毛高度／隐窝深度比值。低鱼粉饲料添加下酸钢后ＣＮＡ和ＯＤＣ表达＾２００５量均盈著上升，。与下酸钥在畜禽上的研究结果致。王继凤等（）发现在饲粮中添＇加ｉｆＩｇＴ酸纳后断奶仔猪空肠和回肠粘膜结构完整，层次清晰，肠绒毛排列整齐且粗ｔ化同肠林状细胞数量増加气Ｍａｎｚ細ｉｌｉａ等２００６发现，０．３％了酸钢可使断奶仔猪空（）肠隐窝深度増加，结肠杯状细胞数量増加。钟翔等口００９在断奶仔猪饲粮中添加Ｔ酸钢）Ｐ１１后，与对照组相比，十二指肠绒毛高度和空肠绒毛高度均有提高。郑瑞耕（２００８研究）－ｉ，表明，在鍾鱼饲料中添加１０００ｇｔ了酸钢后，小肠粘膜更加完整，绒毛高度、宽度和Ｐｓｉ肠粘膜基层厚度均比对照组高。高鱼粉饲料添加了酸钢后，对小肠粘膜形态结构及绒毛高度、隐窝深度及二者比值并未有影响。可能原因是低鱼粉饲料中含有大量抗营养因子，破坏了黄錯肠道粘膜形态结构，下酸是肠上皮细胞的直接能量来源，在肠道上皮细胞正常发育与自身粘膜损伤修复中起重要作用。了酸盐还可Ｗ刺激结肠内水和納离子的吸收，，产生促进粘膜修复的酶同时刺激细胞内ｍＲＮＡ和蛋白质的合成，力口速肠绒毛増殖，増加绒毛高度，増深隐窝深度，降低绒毛宽度。因此，低鱼粉饲料中添加了酸纳修复可抗营养因子对肠道造成的损伤，提高机体对营养物质的消化吸收能，力，进而促进了黄錯生长。而在高鱼粉饲料中添加Ｔ酸钥并没有此效果可能是因为鱼粉中抗营养因子含量低，未损伤黄錯肠道形态，因此添加Ｔ酸钢没有体现出其修复粘膜的功能。３．２下酸钢对黄錯肠道消化吸收酶活力的影响，本研究结果表明，饲料中添加Ｔ酸钢对黄罐肠道消化酶活为无影响与在畜禽上一些研巧结果不同的，钟翔等口００９研巧指出，１和２／ｋｇＴ酸钢使断奶仔猪空肠前段、）ｇ空肠后段和回肠总蛋白酶活性和十二指肠、空肠前段和回肠淀粉酶活性高于对照组，二ＰＵ且下酸钢浓度影响断奶仔猪十指肠和空肠前段的脂肪酶活性。杨在宾等口０１１研究）９２＋＋ｌ－发现，下酸纳可提高ＡＡ肉仔鸡肠道淀粉酶、脂肪酶和膀蛋白酶的活性ＬＮａＫＡＴＰ３１ －湖南农业大学硕丄－学位论文酶活力可＾１＾１反映细胞的代谢水平和小肠粘膜的吸收功能，碱性憐酸酶ＣＫ与脂类、氨、，基酸葡萄糖等营养物质的吸收有关，其活力是反映鱼营养物质吸收能力的标志肌酸激酶大量存在于ＡＴＰ快速再生的细胞中，与细胞内能量转运、ＡＴＰ再生存在直接关＋＋Ｋ－ＡＴＰ酶系。Ｎａ、碱性磯酸酶和肌酸激酶均与肠道上皮细胞吸收功能有关。本实验研究结果表明，低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢后肌酸激酶和碱性磯酸酶活力显著上升，高＋＋Ｋ－ＡＴＰ活力显著上升鱼粉饲料添加下酸钢后Ｎａ，说明下酸钢可提高黄錯肠道吸收功能。Ｃｈｕｎｇ等（１９８５）研究表明下酸能提高结肠癌细胞刷状缘膜酶如碱性磯酸酶的活性９３［］〇３．３Ｔ酸纳对黄錯葡萄糖转运基因表达的影响一葡萄糖转运载体是类镶嵌在细胞膜上转运葡萄糖的载体蛋白质，广泛分布于体内各组织中。葡萄糖是最基本的能量来源，葡萄糖自身无法穿过细胞膜进入到细胞内＋一发挥作用－，必须依靠转运蛋白来完成。葡萄糖转运载体有两类；类是Ｎａ葡糖共转＋＋－－运载体ＮａｌｕｃｏｓｅｃｏｔｒａｎｓｏｒｔｅｒＳＧＬＴｓ。该类载体能偶联葡萄糖直接沿着Ｎａ电化学（ｇｐ，）＋＋一－－ＡＴＰ酶的参与梯度摄入细胞，需要ＮａＫ。另类是易化葡萄糖转运载体ｆａｃｉｌｉｔａｔｅａｌ（ｕｃｏｓｅｒａｎｓｏｒｔｅｒｓＳｇｌｔｐＧＬＵＴ。该类载体使葡萄糖顺其浓度梯度将细胞内的葡萄糖转运，）至组织液一ＬＴ，这过程不需耗能。ＳＧＬＴｓ有６个亚型，其中ＳＧ１主要存在于小肠上皮细胞的纹状缘。ＧＬＵＴＳ也己鉴定出５亚型，其中ＧＬＵＴ２分布于巧、族腺的目细胞、肾和小肠，它是肾和肠上皮细胞中易化葡萄糖转运的基本载体。在本实验中，低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢提高了ＳＧＬＴ１和ＧＬＵＴ２两个基因在肠道上的表达，与Ｔａｋａｎｏ等（１９８８）研究相似，其发现在猪肾脏细胞的培养液中添加了酸钢，能显著増加肾脏细胞葡萄糖转运载体ｍＲＮＡ的表达。说明在饲料中添加下酸纳能提高肠道粘膜上皮葡萄糖的转运，促进葡萄糖的代谢。４小结低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢可改善肠道粘膜绒毛结构，増加肠道细胞的増殖，増强肠道吸收及葡萄糖转运功能，而高鱼粉饲料中添加下酸纳没有此功能。３２ 第四章饲料中添加微曼下酸钢对黄篤肠道蘭群多样性的影响第四章饲料中添加微囊下酸钢对黄韓肠道菌群多样性的影响动物肠道中寄生着数量巨大和种类繁多的微生物，可促进营养物质的消化吸收，诱导粘腹免疫保护，调节宿主脂肪的储存等功能。研究发现，饲料可影响水产动物肠９４ｔ１道的细菌群落结构的变化。－ＤＧＧＥｄｅｎａＰＣＲ（ｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，变性梯度凝胶电泳）是近几年一国内外应用较广泛的分子技术之。它是基于１６ＳｒＤＮＡ的可变区ＰＣ民扩増子的序列特异性溶解温度不同而进行分离的，可检测出序列中１个核昔酸的差异。对于肠道内大部分不能用传统方法分离培养和厌氧细菌，可直接从肠道样品中提取总ＲＮＡ，对１化出ＮＡ的可变区进行ＰＣ艮扩增，通过ＤＧＧＥ进行分析，相比传统方法，更能精确ＰＣＲ－ＤＧＧＥ技术己在人反映肠道微生态群落结构的多样性。、鸡、猪、羊、鱼等动物Ｐｗｗ］胃肠道细菌群落多样性的研究中大量应用。下酸是一种短链脂肪酸，有水脂两亲的持性，可透过革兰氏阳性菌和阴性菌的细胞膜。下酸进入细茵细胞内后分解为下酸根离子和氨离子，随着胞内氨离子浓度的升高，对氨离子耐受性差的细茜如沙口氏菌、大肠杆菌和梭状芽抱杆菌等大量死亡，而对氨离子耐受性强的细菌如乳酸杆茜和粪链球菌存活下来，，并且大量繁殖，另外下酸解离为酸根离子ＲＣＯＣＴ能破坏ＤＮＡ结构，阻碍蛋白质合成，使机体不能进行正常的复制，从而抑制不耐酸的大肠杆菌、沙口氏菌和弯曲杆菌等肠道有害菌，促进耐酸性强的乳酸茜等有益葫的大量繁殖，从而有效调节肠道内有益茜和有害茜之间的平衡，使整个肠道趋于健康状态。－本研巧采用免培养法提取黄錯肠道总ＤＮＡ，使用ＰＣＲＤＧＧＥ技术研究下酸钢对黄錯肠道细茜的ＤＧＧＥ指纹图谱，结合共性条带和特异性条带的克隆测序，研究了酸钢对黄錯肠道菌群结构的影响。１材料方法１．１实验试剂及仪器｜’尿素Ｎ－、ＮＮＮ四甲基乙二胺（ＴＥＭＥＤ）、丙婦醜胺、甲叉丙締醜胺、去离子甲，，，醜胺、过硫酸较（ＡＰＳ）均购自美国ＡＭＲＥＳＣＯ。其余试剂，如无特殊说明，均为分析纯，购自北京化工厂。ＤＣｏｄｅ－Ｒａｄ）通用突变检测系统（美国Ｂｉｏ；３３ 湖南农业大学硕上学位论文Ｃ、ｅｎｔｒｉｆｉｉｇｅ５４１７民高速低温离屯机（德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）；ＶＥＸ－４９０超低温冰箱（Ｔｈｅｒｍｏ）美国；Ｃｉ－１０００ＴＭＴｈｅｒｍａｌＣｙｃｌｅｒＰＣ民仪（美国ＢｏＲａｄ）；３７３０ｘＬＤＮＡＡｎａｌｙｚｅｒ测序仪（美国ＡＢｉ）；〇６－民３４１０〇〇进１凝胶成像仪（美国８；〇）。１．２样品采集及处理１．２．１样品采集每个网箱随机选取３条鱼，用灭菌后的解剖工具将肠道取出置于解剖盘内，去除－２（ＴＣ保存肠道外壁的脂肪，用剪刀将肠道剪开，用解剖刀将内容物收集到离也管中，备用。１２２ＤＮＡ提．．肠道微生物取采用北京Ｔｉａｎｇｅｎ公司的Ｔｉａｎｇｅｎ粪便基因组ＤＮＡ提取试剂盒提取肠道微生物总°ＤＮＡ－２０Ｃ保存备用。，操作步骤按照产品说明书进行，提取后置于１．２．３基因组总ＤＮＡ１６ＳｒＤＮＡＶ３区扩増１６ＳｒＤＮＡＶ３区通：Ｗ提取的肠道微生物总ＤＮＡ为模板，引物为基因用引物’’，３５７Ｆ－ＧＣ－ｃ－－－－ＡＴＴＡＣＣＧＧＣｌａｍｐ５ＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧ３）和５１７民（５（’’ＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧ－３）－－，其中ＧＣｃｌａｍｐ为５ＣＧＣＣＣＧＣＣＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧ’－３ｘ、，ＰＣＲ５０山）Ｓ、ＧＧＣＧＧＧＧＧＣＡＣＧＧＧＧＧ反应体系（：ｌＯＢｕｆｅｒ阵ｄＮＴＰ４阵Ｍ２４Ｍ？（１１ＥｘＴａ了浊祉３１．５ＵＤＮＡ２０５０ｎｇＣ１心引物０［ｉ）各阵、ｑ（大连）、模板ｇ、°°５０〇：＾。？（：民反应程序１：预变性５１１１；１１（：Ｃ：９４９４变性１１１１１１１，４８灭菌超纯水补齐至＾；°°０延伸０个循７２；退火１１１１扣（１〇。，７２１１１１加３环延伸１１１１１１１；最后１．２．４肠道微生物总ＤＮＡ１６ＳｒＤＮＡＶ３区扩増片段变性梯度凝胶电泳°？〇？采用６％１２％的丙帰醜胺凝胶，变性梯度为４０／〇７０％，上样量为１５ｕＬ。在６０Ｃ条件下６０１６ｈＳＹＢ趾ＧＲＥＥＮ染色ＧｅｌＤｏｃＸＲ凝Ｖ电泳，电泳结束后用，用胶成像仪采集图像。１．２．５切胶回收及克隆測序将ＤＧＧＥ图谱上明显的差异条带和共性条带切割回收。切胶固收步骤：（１）在紫外灯下（切胶时使用紫外防护挡板）用刀片将目的条带切下放入装有４００ｕＬ无水乙醇的１．５ｍＬ离也管中。３４ 第四章饲料中添加微囊Ｔ酸钢对黄錯肠道菌群多样性的影响？（２）静置１０１５ｍｉｎ，待胶块变为白色，吸弃上清，加入２００ｗＬＤｅｒ（ｉｆｉｉｓｉｏｎＢｕｆ含醋酸较０．５ｍｏｌ／Ｌ、醋酸镑０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ＥＤＴＡ０．００１ｍｏｌ／Ｌ、ＳＤＳ０．１％ｍ／ｍ）。待（）°，４Ｃ放１６ｈ胶块从白色变透明盾置。°（３）加入３ｍｏ５００－ｌ／Ｌ醋酸钢２０ｕＬ、无水艺醇ｕＬ，混匀８０Ｃ放置３０ｍｉｎ。，°４１２－（）０００ｒｐｍ离也２０ｍｉｎ，弃上清，加入在２０Ｃ预冷的７０％乙醇（ｖ／ｖ）１ｍｌ。５）？（１２０００ｒｍ离２ｍｉｎ，弃上清，室温干燥３５ｍｎ。ｐｉ、（６）向离屯管中胶块上加入３５ＵＬＨ２Ｏ。（确保胶块浸没在水中）Ｗ回收的ＤＮＡ为模板，用不含ＧＣ夹子的引物对１６ＳｒＤＮＡ可变区进行扩增，ＰＣ民ｘｌ体系：ＯＢｕｆｅｒ５ｉＬ、ｄＮＴＰ４、Ｍ１２４ｉＬ（１０ｉＭ）１Ｌ、ＥｘＴａ（＾＾ＬｇＣ＾引物＾各＾ｇ大连Ｔａｋａｒａ）１Ｕ、模板５Ｌ、灭菌高．５ｎ纯水补齐至５０冲。引物；’’’’－－３５７Ｆ５ＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧ３－－，５１７民５ＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧ３。扩°°°°’增程序：９４Ｃ５ｍｉｎ；９４Ｃ３０ｓｅｃ，４８Ｃ３０ｓｅｃ，７２ＣＩｍｉｎ，３０个循环；７２ＣｌＯｍｉｎ。扩增产物纯化后与ＧＭ－Ｔｐ载体连接转入ＴＯＰＩＯ感受态细胞进行克隆，每个样品一挑选上步骤克隆得到的白色菌落各３个，摇菌，提质粒，使用Ｔ７引物’，－－（５ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧ３）测序。１．３数据分析－用分析软件ｕａｎｔｉｔＯｎｅ－４．６．３ＢｉｏＲａｄＰＣＲＤＧＧＥＱｙ，美国对指纹图谱进行条带记（）＇－Ｗｅ数及分析，多样性指数用Ｓｈａｎｎｏｎｉｎｅｒ指数Ｈ表示，采用ＵＰＧＭＡｕｎｗｅｉｈｔｅｄ（）（ｇ＇ｐａｒｉｇｒｏｕｐｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈａｒｉｔｈｍｅｔｉｃａｖｅｒａｇｅｓ）法进行相似性聚类分析。Ｈ指数按照如下公＇＝—２Ｐ式进行计算：ＨｉｌｏｇＰｉ一＇＝其中，Ｐｉ为泳道中Ｐｉ条带出现的可能性ｉｎｉ／Ｈ，ｎｉ为某，Ｈ；条带的峰髙为泳道密度曲线所有的峰高的总和。用ＤＮＡＭＡＮ６．０．３软件对测定序列进行编漫，并将序列与ＧｅｎＢａｎｋ数据库进行比对分析，寻找亲缘关系最近的细菌或克隆。２结果与分析２．１样品Ｖ３区ＤＧ化图谱分析对摄食不同Ｔ酸钢剂量的黄錯肠道内容物细茜的－１６ＳｒＤＮＡＶ３片段进行ＰＣＲ扩－ＤＧＧＥ指纹图谱－增，构建细菌群落多样性ＰＣＲ。ＰＣＲＤＧＧＥ能分离长度相同而序列不同的ＤＮＡ条带，Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４分别代表添加了酸钢量为０、２５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、３５ 湖南农业大学硕±学位论文ｌＯＯＯｍｇ／ｋｇ高鱼粉饲料组，ＬＫＬ２、Ｌ３、Ｌ４分别代表添加下酸钢量为０、２５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ低鱼粉饲料组。条带越多代表生物多样性越丰富，条带越亮说明该苗数量越多，每条泳道都有大量条带存在，说明在黄錯肠道内容物中存在大量的细菌，不同位置的条带代表不同的细菌，通过ＤＧＧＥ图谱分析共获得３９个不同的扩增条带，添加下酸钢的高鱼粉饲料投喂下黄韓肠道的细菌条带数分别为２５、２２、２０、１８，添加下酸钢的低鱼粉饲料投喂下錯鱼肠道的细菌条带数分别为１９、２７、１９、２６，高鱼粉饲料组所有样品有９条共有条带，其中条带１９、２９、３１为所有高鱼粉饲料样品的优，、１、１５２０３２势条带没有添加Ｔ酸钢的高鱼粉姐的特异性条带为４９、２、、２４、，添加了酸钢的高鱼粉组特异性条带为７和３５，低鱼粉饲料组所有样品有１２条共有条带，其中条带１９、３１为所有低鱼粉样品的优势条带，添加了酸纳低鱼粉姐特异性条带为１５，’１８和２９，通过计算各个样品ＤＧＧＥ指纹图谱中条带的Ｈ指数得出，．随着了酸钢添加量的増加，投喂高鱼粉饲料錯鱼肠道菌群多样性指数呈下降的趋势，多样性指数分别３１４２７９２５０ｍｌ为．３．０３，．９１，２．。，／ｋＯＯＯｍ／ｋ，与不添加下酸钢的低鱼粉组相比添加ｇｇ和ｇｇ下酸钢的低鱼粉组菌群多样性升高，而添加５００ｍｇ／ｋｇ下酸钢的低鱼粉组茜群多样性没有变化。图４．１肠道内容物细菌ＤＧＧＥ图谱，Ｈ和Ｌ分别代表髙鱼粉组饲料和化鱼粉饲料Ｆｉｕｒｅ４１ＩｌｂｉｉｍｉｌｉｉＤ打ｌＨｈｉ．ｎｔｅｓｔｉｎａａｃｔｅｒａｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓａｒｔｎｔｈｅＧＧＥｒｏｅｓａｎｄＬｒｅｒｅｓｅｎｔｈｇｙｐ，ｐｇａｎ过ｌｏｗｆｉｓｈｍｅａｌｄｉｅｔｓｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ，ｐｙ３６ 第四章饲料中添加微窠下酸钢对黄錯肠道蘭群多样性的影响表４．１肠道菌群ＤＧＧＥ图谱的多样性指数Ｔ，ａｂｌｅ４１ａｎｎｏｎｄｉｖｅｒｉｉｎｄＨｉａｌＤｒｏ衍ｅ．細ｓｔｙ巧ｏｆｂａｃ化ｒＧＧＥｐａｎｅＨＩＨ２Ｈ３Ｈ４ＬＩＬ２Ｌ３Ｌ４ｌ多度（条带数目）２５２２２０１８１９２７１９２６Ｓｈａｎｎｏｎ－Ｗｒｉｅｎｅ３．１４．０３２１２２．８３．２３２．２２３．９．７９３．８７３多样性成指数数Ｓ０．１．．０４７００５０５９０．０６７０．０６５０．０４２０．０６２０．０４２ｉｍｐｓｏｎ指数０ｅｕ０１２６０１．１４．１５５．１４１２０５１２４巧ｌｏ均匀度指数．．３８０６００９０．０．１０．１一－ＤＧＧＥ指纹图基于黄錯肠道内容物的ＰＣＲ，谱，进步分析相似性系数Ｈ２，Ｈ３，？Ｈ４为添加下酸钢的高鱼粉饲料投喂下錯鱼肠道细菌条带，相似度为６２％６７．６％，Ｈ１为不添加了酸钢的高鱼粉饲料投喂下錯鱼肠道细菌条带，１，Ｈ２，Ｈ３Ｈ４与Ｈ相似度为４？３．３％５８．２％，Ｌ２，Ｌ３，Ｌ４为添加下酸钢的低鱼粉饲料投喂下錯鱼肠道细菌条带，其？５３２７４４％，Ｌ１为不相似度为．％．添加了酸钢的低鱼粉饲料投喂下錯鱼肠道细茜条带，４？Ｌ２，Ｌ３，Ｌ４与Ｌ１相似度为８．５％５９．２％，说明饲料中添加下酸钢能改变錯鱼肠道细茜条带的数量、位置和亮度。表４．２黄雙瞄道菌群结构相似系致炬阵Ｔａｂｌｅ４．２ＳｉｍｉｌａｒｉｔｙｂｅｔｗｅｅｎＤＧＧＥｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓ村ｎａｌｃｏｎｔｅｎｔｓＬａｎｅＨＩＨ２Ｈ３Ｈ４ＬＩＬ２Ｌ３Ｌ４ＨＩ１００５８．２４５．２４３．３４２．９５４５３．２５２．１Ｈ２５８１００６４．７．８６５９４９．８６７．９．２６２６９．Ｈ３４５．．．．．２６２１００６７６５８５７０５４８５６３．６Ｈ４４３．３６４．７６７．６１００７６．３％．６５５．８６１．７ＬＩ４２．９６９．５７６３１００．．５５．２．８５８．巧９４８９Ｌ２５４６５．９７０．５％．６５９．９１００巧．５７４．４Ｌ３５３．２４９．８４８．５５５．８４８．５５７．５１００５３．２Ｌ４５２．１２７４．４５３．２１００．１６７９６３．６６．７５９．２．２ＤＧ化图谱中主要条带的巧列測定？对ＤＧＧＥ产物进行切胶回收后编号为１２６号条带进行另外序列测定。由下表可－知，所有序列与数据库中序列的相似性在９６％１００％之间１７，其中条序列的相似性为１－００％，其余克隆的相似性在９６％９９％之间，这％个条带的序列长度约为９３０ｂｐ，将经过序列测定获得的序列通过ＢＬＡＳＴ后在ＧｅｎＢａｎｋ中进行同源比对及检索，所得结３果见表４．。测序结果表明，黄錯肠道内容物菌群的已知细菌稍落主要为芽抱杆茜属、单胞菌属、不动杆菌属和大量的为培养菌。３７ 湖南农业大学硕±学位论文表４．３ＤＧＧＥ图谱中主要条带分子鉴定结果Ｔａｂｌｅ４．３ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｅｎｏｍｉｃｓｅｕｅｎｃｅｓｉｎｃｏｍｍｏｎｈａｎｄｓａｎｄｓｅｃｉａｌｂａｎｄｓｂｓｅｕｅｎｃｉｎａｎｄｇｑｐｙｑｇＢＬＡＳＴｉａｎａｌｙｓｓ条带号ＧｅｎＢａｎｋ数据库中同源序列登录名相似性（％）ＵｎｃｕｌｔｕｒｅｄｂａｃｔｅｒｉｕｍＫＦ０１０７３９．１９７目ａｎｄｌＵｎｃｕｌｔｉｗｅｄＡｃｉｎｅｔｏｂａｃ化ｒｓｐ．ＨＱ２８５０８５．１９６Ｂａｎｄ２ＵｎｃｕｌｔｕｒｅｄｂａｃｔｅｒｉｕｍＨ巧８４６１８．１９９ＢａｎｄｓＫｕｒｔｈｉａｉｂｓｏｎｉｉｓｔｒａｉｎＫＣ７４８３７２．１１００ｇＢａｎｄ４ＵｎｃｕｌｔｕｒｅｄｂａｃｔｅｒｉｕｍＥＵ６９７１６０．１１００ＢａｎｄｓＡｃｉｎｅ化ｂａｃｔｅｒｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓｓｔｒａｉｎＫＦ６９７１３０．１９８Ｂａｎｄ６ＵｎｃｕｌｔｕｒｅｄｂａｃｔｅｒｉｕｍＥＵ６９７１６０．１９９ｄ？４ＢａｎＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｄｉｏｒｅｉｔｅｎＡＢ８５９６７．１１００ｒａｓｓｓＢａｎｄｓＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐ．ＫＣ７５８１！３９．１１００Ｂａｎｄ９ＰｌｅｓｉｏｍｏｎａｓｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓｓｔｒａｉｎＫＣ７０６６６９．１９９呂ｌ０２３１００１ａｎｄＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｔｒａｉｎＫＦ６．１００ａｎｄｅｓｎａｓｅ（ｓａｎ７０６６６９．Ｂ１１ＰｌｉｏｍｏｓＷｇｌｌｏｉｋｓｔｒｉＫＣ１９９Ｂａｎｄ１２ＵｎｃｕｌｔｕｒｅｄｂａｃｔｅｒｉｕｍＪＱ２０１１５３．１１００Ｂ＾ａｎｄｌ３Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｈｉｌａｓｔｒａｉｎ１０３５８４３６．１９９ｐＢａｃｕｓａｎａｃｓｒａｎＫＦ７７９０７５．１１００ｉｌｌｔｈｒｉｓｔｉＢａｎｄｌ４ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓｓｔｒａｉｎＫＦ６６８６４３．１１００ＰａｎｔｏｅａａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓｓｔｒａｉｎＫＦ０３９９３１．１９９Ｂａｎｄｌ５ＵｎｃｕｌｔｕｒｅｄｂａｃｔｅｒｉｕｍＫＣ１１９２９４．１９９Ｂａｎｄ１６ＰｌｅｓｉｏｍｏｎａｓｓｈｉｅｌｌｏｉｄｅｓｓｔｒａｉｎＫＣ７０６６６９．１９９ｇＵｎｃｕｌｔｕｒｅｄｂａｃｔｅｒｉｕｍＫＣ２０８３４４．１１００Ｂａｎｄ１７ＡｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａｓｔｒａｉｎＫＦ３５８４３６．１９９Ｂａｎｄｌ８ＰｌｅｓｉｏｍｏｎａｓｓｈｉｅｌｌｏｉｄｅｓｓｔｒａｉｎＫＣ６３３８８２．１１００ｇＢａｃｉｌｌｕｓａｎｔｈｒａｃｉｓｓｔｒａｉｎＫＦ７７９０７５．１１００Ｂａｎｄｌ９ＢａｃｌｉＫＦ５１５．１１００ｉｌｕｓｃｅｒｅｕｓｓｔｒａｎ６５４Ｂａｎｄ２０Ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄｂａｃ化ｒｉｕｍＪＱ２０１１５３．１１００Ｂａｎｄ２１ＰｌｅｓｉｏｍｏｎａｓｓｈｅｏｅｓｓｎＫＦ６９８７．１１００ｉｇｌｌｉｄｔｒａｉ％Ｂａｎｄ２２Ａｅｒｏｍｏｎａｓｓ．ＫＦ６６１５４６．１１００ｐＢａｎｄ２３ＰｌｅｓｉｏｍｏｎａｓｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓｓｔｒａｉｎＫＣ７０６６６９．１９９Ｂａｎｄ２４ＡｅｒｏｍｏｎａｓｖｅｒｏｎｒａｎＡＢ４７．１１０ｉｉｓｔｉＷ＾０Ｂａｎｄ２５Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ化ｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓｓｔｒａｉｎＫＣ６３３８８２．１１００ＡｅｒｏｍｏｎａｓｓｏｂｒｉａｓｔｒａｉｎＫＣ２１０７８５．１９９Ｂａｎｄ２６ＡｅｒｏｍｏｎａｓｖｅｒｏｎｉｉｓｔｒａｉｎＫＦ６６１５４８．１９８３讨论鱼类肠道菌群作为肠道的重要组成部分，是肠道微生物与宿主Ｗ及所处的水环境，在鱼类的营养之间形成的相互依赖、相互制约的微生态区系、免疫和生长发育等方３８ 第四章饲料中添加微奠Ｔ酸钢对黄饒肠道巧群《样性的影响面发挥着重要的作用。鱼类食性不同，肠道菌群组成会有所差异。周文豪等认为因为不同的细菌对肠道内的环境适应能为不同一，细菌的种间竞争可导致某些细菌得抖在一些细菌却被淘汰ＵＷ二蒙等定时间内定植于肠道中，而另。郁通过对摄食不同巧料草－ＤＧＧＥ指纹图鱼肠道菌群ＰＣＲ谱构建及分子鉴定，发现脆化草鱼和化仔草鱼肠道内容ＤＳｉｔｌ－物细菌群落差异显著。ＤｏｕｇｌａｓＭｃｌｎｔｏｓｈａ通过研究了大西洋嬉鱼（Ｇａ成《７ｗ〇７／ｚＭａ王．）在前５０ｄ的生长期内采用不同原料喂食后的微生物群落结构变化发现，喂养轮虫的和＾１１小虫下的幼鱼体内呈现出完全不同的两种茜落结构状。Ｂａｋｋｅ等也对轄鱼的幼鱼饲喂ｉＳ种不同的活饲料ｔｗ，研究组之间肠道菌群亦存在不同的差异。本研究结果表明，饲料中添加下酸钢会改变黄錯肠道内容物菌群结构，低鱼粉饲料中添加Ｔ酸钢后内容物菌群多样性会大大提高，与下酸钥在其他动物上的研究结果一致＾ｉ。郭传珍等（２００９）研究发现，在肉鸡饲糾中添加２００ｇ下酸納后，盲肠中乳＇Ｐｙｉ，酸菌数量増加，大肠杆菌数量降低。钮海华等口０１０在仔猪饲料中添加１０００ｇｔＴ酸）ＰＷＬｕ等２００８钢后促进了肠道孰酸菌的増殖，降低了大肠埃希菌的数量。（）研究发现，－—ｉ＞５００ｍ，ｋ和，ｋ饲料中添加ｇｇ１０００ｍｇｇｒ酸钢减少断奶仔猪小肠和近侧结肠内产气英Ｐ７１膜杆菌和大肠杆菌的数量。Ｉｍｍｅｒｓｅｅｌ等（２００４）使用微胶囊型Ｔ酸盐饲喂试验感染的维鸡后，发现在盲肠中定植的沙口氏菌的数量减少。４小结饲料中添加Ｔ酸钢会改变黄錯肠道内容物茜群结构，低鱼粉饲料中添加了酸納后内容物菌群多样性会大大提高。３９ 湖南农业大学硕－±学位论文参考文献１王桂芹．，，，周洪琪陈建明等翅嘴红銷对饲料蛋白的营养需求及豆巧对鱼粉的适［］－００６：２７７宜替代量机．中国水产科学，３１２８５．，２口）［２］ＬｉｎＳＭ，ＬｕｏＬ．Ｅｆｅｃｔｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｌｅｖｅｌｓｏｆｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌｉｎｃｌｕｓｉｏ打ｉｎｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｆｏｒ打ｓｈｍｅａｌｏｎｒｏｗｔｈｄｉｅｓｔｉｖｅｅｎｚｍｅｓａｎｄｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉ打ｒａｃｔｉｃａｌｄｉｅｔｓｆｏｒｇ，ｇｙｐ＾ｕｖｅｎｉｌｅｔｉｌａｉａＯｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓｎｉｌｏｔｉｃｕｓＯ．ａｕｒｅｕｓＪ．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄｊｐ，［］Ｔｅｃｈｎｏ２０１１１－ｌｏ６８：８０８７．ｇｙ，，［３］ＹｕＤＨ，Ｇｏ打ｇＳＹ，ＹｕａｎＹＣ，ｅｔａｌ．Ｅｆｅｃｔｏｆｒｅｐｌａｃｉｎｇｆｉｓｈｍｅａｌｗｉｔｈｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌｏｎｇｒｏｗｔｈ，ｂｏｄｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏ打ａｎｄｄｉｇｅｓｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｕｖｅｎｉｌｅＣｈｉｎｅｓｅｓｕｃｋｅｒｊ，－ＭｘｏｃｙｒｉｎｕｓａｓｉａｔｉｃｕｓＪ，ＡａｃｕｌｔｕｒｅＮｕｔｒｉｔｉｏｎ２０１３１９ｙｐｑｕ：８４９０．［］，，４ＫｏｋｏｕＦＲｉｏｓＨｅｎｒｅｔａｌ－ＱＭ．Ｇｒｏｗｔｈｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｆｅｅｄｕｔｉｈｚａｔｉｏｎａｎｄｎｏ打ｓｅｃｉｆｉｃ［］，，ｇｙｐ，ｐｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏ打ｓｅｏｆｇｉｌｔｈｅａｓｓｅａｂｒｅａｍ（ｉＳ／７口ｒｗ度ａｗｒ幻ｆａＬｆｅｄｇｒａｄｅｄｌｅｖｅｌｓｏｆａ）－－ｂｉｏｒｏｃｅｓｓｅｄｓｏｂｅａｎｍｅａｌＪｕａｃｕｌｔｕｒｅ２０１２３６４３６５．．Ａ；７４８１ｐｙ［］ｑ，，［５］ＬｉｍＳＪ，ＫｉｍＳＳ，ＫｏＧＹ，ｅｔａｌ．Ｆｉｓｈｍｅａｌｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｂｙｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌｉｎｄｉｅｔｓｆｏｒ－ＴｉｅｒｕｆｆｅｒＴａｋｉｕｒｕｂｒｉｅｓＪ．Ａｌｔ２０１１３１３１６５１ｕｕａｃｕｕｒｅ：７０．ｇｐ，，，ｆｇｐ［］ｑ６何大庆，程宗佳．美国去皮豆化养殖南美白对軒的对比试验Ｊ．饲，曹双俊，等［］［］２－料广角，２００５，２１：８３０．７ＬｏｕＺＬｉｕＹＪ．ＰａｒｔｉａｌｒｅｌａｃｅｍｅｎｔｏｆｏｔｅｔＭａｉＫＳ巧ｓｈｍｅａｌｂｓｏｂｅａｎｒｉｎｉｎｄｉｅｓｆｏｒ［］，，ｐｙｙｐ－ＥｉｎｅｐｈｅｌｕｓｊｕｖｅｎｉｌｅｓＪ．ＦｉｓｈｅｒｉＣｈｉｎａ２００４２８２：１７５１８１．ｐ［］，，（）８ＫａｕｓｈｉｋＳＪＣｒａｖｅｄｉＪＰＬａｌｌｅｓＪＰｅｔａ．Ｐａｒｔａｏｒ１；ｏｔａｒｅａｃｅｍｅｎｔｏｆ打ｓｈｍｅａｌｉｌｌｌｂ［］，，，ｐｌｙｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｅｉ打ｏｎｇｒｏｗｔｈｒｏｔｄ打ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏ打ｏｔｅｎｔｉａｌｅｓｔｒｏｅｎｉｃｏｆａｎｔｉｅｎｉｃｅｆｅｃｔｓ，ｐｐｇｇ，，ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａａｎｄｆｌｅｓｈｕａｌｉｔｉｎｒａｉｎｂｏｗｔｒｏｕｔＯｎｃｏｒｈｎｃｈｕｓｍｋｉｓｓＪ．ｑｙ，ｙｙ［］Ａｕａｃｕ１－ｑｌｔｕｒｅ９９５，１３３：２５７２７４．，９ＳｈｉｍｅｎｏＭＫｕｍｏ打ＨＡｎｄｏＨｅｔａｌ．Ｔｈｅｒｏｗｔｈｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｂｏｄｃｏｍｏｓｉｔｉｏｎｏｆ［］，，，ｇｐｙｐｙｏｕｎｇｅｌｌｏｗｔａｉｌｆｅｄｗｉｔｈｄｉｅｔｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｄｅｆａｔｔｅｄｓｏｂｅａｎｆｏｒａｌｏｎｅｒｉｏｄＪ．Ｎｉｏｎｙｇｙｇｐ［］ｐｐ－ＳｕｉｓａｎＧａｋｋａｉｓｈ１９９３５９８２．：１８２２，，１０王广军，吴锐全，谢骇，等．军曹鱼饲料中用豆牠代替鱼粉的研究ｍ．大连水产学［］２００５２０５３－３０７．院学报，：０４，（）１１ＢａｕｔｉｓｔａＴｅｍｅｌＭＮＦｅｒｍｉｎＡＣＫｏｓｈｉｏＳＳ．Ｄｉｅｔｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｆｂｒ［］，，ｐ４０ 参考文献ｊｕｖｅｎｉｌｅａｂａｌｏ打ｅ，Ｈａｌｉｏｔｉｓａｓｉｎｉｎａ；ａｎｉｍａｌａｎｄＰｌａｎｔｐｒｏｔ：ｅｉｎｓｏｕｒｃｅｓ［巧．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，－２００３２１９：６４５６巧．，＾［１２］ＦｌｏｒｅｔｏＥＡＴ，Ｂａｙ＾民Ｃ，ＢｒｏｗｎＲＴｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｓｏｙｂｅａｎｂａｓｅｄｄｉｅｔｓ，ｗｋｈａｎｄｗｉｔｈｏｕｔａｍｉｎｏａｃｉｄｓｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｏｎｇｒｏｗｔｈａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏ打ｏｆ－ｕｖｅｎｉｌｅＡｅｒｉｃａｎｌｏｂｓｔｅｒＨｏｍａｒｕｓａｍｅｒｉｃａｎｕｓＪＡｔｕｒｅ２０００１８９１１２３５ｍ．ｕａｃｕｌ：２．ｊ，［］ｑ，，１３ＧｒａｎｔＧＰｒｏｔｅｉｎｒｏ化ａｓｅｉｎｈｉｂＵｏｒｓｆｒｏｍｌａｎｔｓ．Ｉｎ：ＣａＵｌＪＣ．ＨａｒｖｅＩＭｅｄｓ．［］ｐｐｙｇｙ，ｔｔＳｅｃｏｎｄａｒｙＰｌａｎＰｒｏｄｕｃｔｓ：ＡｎｉｒｘｕｔｒｉｔｉｏｎａｌａｎｄＢｅ打ｅｆｉｃｉａｌＡｃｔｉｏ打ｓｉ打ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄｉｎｇ．ｔｎｉｖｅｒｓｉｔ－Ｎｏｔｔｉｎｈａｍ：ＮｏｔｉｎｇｈａｍＵｙＰｒｅｓｓ１９９８７１８６．ｇ，，［１４］ＧａｌｌａｈｅｒＤＳｃｈｎｅｅｍａｎＢＯ．【打ｔｅｓｔｉ打ａｌｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆｂＵｅａｃｉｄｓｈｏｓｈｏｈｉｄｓｄｉｅｔａｒ，，ｐｐｐ，ｙ－巧ｂｅｒｓａｎｄｃｈｏｌｅｓｔｒａｍｉｎｅＪ．ＡｍｅｒＪＰｈｓｉｏｌ１９８６２５０：４２０４２６．，ｙ［］ｙ，，１５ＨｅｎｄｒｉｋｓＨＣＪＭｅｔａｌ．Ｂｉｎｄｉｎｏｆｓｏｂｅａｎａｌｕｔｉｎｉ打！１ｔ［］Ｑ，ｇｙｇｇ；〇ｓｍａｌｌｉｎ：ｅｓｉｎａｌｂｒｕｓｈｔｔｔｔｂｏｒｄｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｓａｎｄｂｕｓｈｂｏｒｄｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｅｎｚｙｍｅａｃｉｖｉｉｅｓｉｎＡｌａｎｉｃｓａｌｍｏｎＡ－ｓａｌｍｏｓａｌｔＪｕａｃｕｌｔｕｒｅ１１１１．．９９０９：６３７０（）［］ｑ，，１６ＶｉｅｌｍａＪＭａｋｉｎｅｎＥｋｈｏｌｍＰｅｔａＬＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｄｉｅｔａｒｓｏａｎｄｈｔａｓｅｌｅｖｅｌｓｏｎ［］，ｊｙｙｐｙｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｂｏｄｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｌａｒｇｅｒａｉｎｂｏｗｔｒｏｕｔＯｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｍｙｋｉｓｓａｎｄｕａｃｕ－ａｌｇａｌａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙｏｆｈｏｓｈｏｒｕｓｌｏａｄＪ．Ａｌｔｕｒｅ２０００１８３：３４９３６２．ｐｐ［］ｑ，，１７ＡｉｎｅｓＭＪｅｔａｌＡｖａｉｌａｉｌｔｏｆ－ＳＳａｔｏｈＳＫｉｒｏｎＶｂｓｕｌｅｍｅｎｔａｌａｍｎｏａｃｄｔ［］ｐ，，，．ｉｙｐｐｉｉｃｈｅｌａｅｄｔｒａｃｅｅｌｅｍｅ打ｔｓｉｎｄｉｅｔｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｔｒｉｃａｌｃｉｕｍｈｏｓｈａｔｅａｎｄｈｔａｔｅｔｏｒａｉｎｂｏｗｔｒｏｕｔｇｐｐｐｙ，ＯｎＡｔ２００３２２５４３－４４４ｅｏｒｈｎｃｈｕｓｍｋ．ｙｙｉ％Ｊ．ｕａｃｕｌｕｒｅ：１［］ｑ，，［１８］ＦｒａｎｃｉｓＧｊＭａｋｋａｒＨＰＳ，ＢｅｃｋｅｔＫ，Ａｎｔｉｎｕｔｒｉｔｉｏ打ａｌｆａｅｔｏｍｐｒｅｓｅｎｔｉｎｐｌａｎｔｄｅｒｉｖｅｄａｌｔｅｒｎａｔｅｆｉｓｈｆｅｅｄｉｎｒｅｄｉｅｎｔｓａｎｄｔｈｅｉｒｅｆｅｃｔｓｉｎｆｉｓｈＪ．ａｕａｃｕｌｔｕｒｅ２００１１：ｇ［］ｑ，，９９－１９７２２７．Ｍ■１９ＫｒｏｄａｈｌＡＭＢａｋｋｅＢａｅｖｅｉｏｒｄＧ．Ｅ瓶ｃｔｓｏｆｒａｄｅｄｌｅｖｅｌｓｏｆｓｔａｎｄａｒｄｓｏｂｅａｎ［］ｇ，，巧ｇｙｍｅａｌｏｎｉ打ｔｅｓｔｉｎａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｍｕｃｏｓａｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ａｎｄｐａｎｃｒｅａｔｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎ－ＡｔｌａｎｔｉｃｓａｌｍｏｎＳａｈｎｏｓａｌａｒＬＪ．ＡｕａｕｌｔｕｒｅＮｕｔｒｉｔｉｏｎ２００３义３６１３７１？（）［］ｑ，，２０Ｃｈｅ打ＪＨａｒｄ反Ｗ，ＵｓｒＪＬ．Ｅｆｅｃｔｓｏｆｌｓｉｎｅｓｕｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｉ打ｌａｎｔｒｏｔｅｉｎ［］ｇＺ，ｙｙｙｐｐｐｐｂａｓｅｄｄｉｅｔｓｏ打ｔｈｅｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｒａｉｎｂｏｗ杜ｏｕｔＯｎｃｏｒ巧ｃ片ｗｓｗｙｈｓ五ａｎｄａａｒｅｎｔｐ（皆）ｐｐｄｅｓ化－ｉｌｉｔｃｏｅｆｉｃｉｅｎｅｎｔｓｕａｃｕｌｕ：ｉｇｔｙｔｓｏｆ打ｕｔｒｉＪ．Ａｔｒｅ２００３，２１５２５５２６５，［］ｑ，Ｅｌ－ＤＭｔａｃｅｍｅｎｔｏｆ２ＳａｉｄＳＤＧａｂｅｒｆｉｅａｌｂＭＭＡ．Ｃｏｍｌｅｅｒｅｌｓｈｍｓｏｂｅａｎｍｅａｌ［，ＵｙｐｐｙｙｔｈｔＬ－ｔＴｔｗｉ出ｅａｒｌｓｉｎｅｓｕｌｅｍｅｎａｔｉｏ打ｆｏｒＮｉｌｅｉｌａｉａＯｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓｎｉｌｏｉｃｕｓＬ．ｆｉｎｅｒｙｙｐｐｐ（）ｇ－ｌｉｎｓＪ．ＪｏｕｒｎａｌＷｏｒｌｄＡｕａｃｕｌｔｕｒｅＳｏｃｉａｌ２００２３３３：２９７３０５．ｇ［］ｑ，，（）４１ 湖南农业大学硕上学位论文［２２］艾庆辉．饲料中大豆蛋白对南方站生长的影响及其能量学机理的研究脚．北京：，２００１中国科学院水生生物研究所．［２３］ＧｏｍｅｓＥＦ，ＲｅｍａＰ，ＫａｕｓｈｉｋＳＪ．Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｏｆｆｉｓｈｍｅａｌｂｙｐｌａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｔｈｅｄｉｅｔｓｏｆｒａｉｎｂｏｗ杜〇山Ｏｎｃｏｒｈｎｃｈｕｓｍｋｉｓｓ：ｄｉｇｅｓｔｉｂＵｉｔｙａｎｄｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．（ｙｙ）ｇ口］Ａａｃｕｔ５－ｕｒｅ：１７７１ｑｕｌ１９９１３０８６．，，２４ＥｓｃａｆｉｆｒｅＡＭｆａｎｔｅＪａｈｕＣＬｅｔａｌ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏ打ａｌｖａｌｕｅｏｆｓｏｒｃｒｔｅｉｎ，ＩｎＬ文Ｃ，［］，ｙｐｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｆｏｒｌａｒｖａｅｏｆｃｏｍｍｏｎｃａｒｐ（Ｃｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏ）ｂａｓｅｄｏｎｇｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ－ａｎｄｄｉｅｓｔｉｖｅｅｎｚｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓＪ．Ａｕａｃｕｌｔｕｒｅ１９９７１５３６．：３８０ｇｙ［］ｑ，，［２５］ＳｃｈｅｐｐａｃｈＷ．Ｅｆｅｃｔｓｏｆｓｈｏｒｔｃｈａｉｎｆａｔｙａｃｉｄｓｏｎｇｕｔｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｆｉｍｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇ山，１９９４３５－：３５３８．，２６民ｏｅｄｉｅｒＷＥ．Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｎｕｔｒｉｅｎｔｓｂｉｓｏｌａｔｅｄｅｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｏｆｔｈｅｒａｔｃｏｌｏ打？［］ｇｙｐ口］－４２９Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ１９８２８３２：４２４．，，（）２７ＦｒｉｅｄｅＤＬｅｖ－ｌｉ打ｅＧＭ．ＥｆｅｃｔｏｆｓｈｏｒｔｃｈａｉｎｆａｔｔｙａｃｉｄｓｏｎｃｏｌｏｎｉｃｆＵｎｃｔｉｏ打ａｎｄ［］，－ｓｔｒｕｃｔｕｒｅＪ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｒｅｎｔｅｒａｌａｎｄＥｎｔｅｒａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ１９９２１６１：１４．［］，，（）２８ＦｒａｎｋｅＷＭｔｔｒｔｓ－ｌＷＬＺｈａｎＳｉｎｈＡｅｔａｌ．ｅｉｉｉａｉｏｎｏｆ化ｅｏｈｉｃｅｆｅｃｏｆｓｈｏｒｔｃｈａｉｎ［］，ｇ，ｇ，ｐ－ｆａｔｔａｃｉｄｓｏｎ化ｅｒａｔｅｕｎｕｍａｎｄｃｏｌｏｎＪ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ１９９４１０６２：３７５３８０．ｙ，，ｊｊ［］ｇｙ（）［２９］王继凤，李芙燕，陈耀星，等．３种饲料添加剂对肉鸡小肠形态结构的影响［Ｊ］．畜１１１１－１１１５牧兽医学报，２００８３９８．：，（）３０王继凤，陈耀星，王子旭，等．下酸納对断奶仔猪小肠粘膜形态结构的影响Ｊ．中［］［］５３５１２９８－３０１国兽医科技．，２００：，（）３１钟翔，．．，膝莎莎李伟，等了酸钢对断奶仔猪生产性能和肠道形态的影响［Ｊ饲［］］－料研究０：１９２２，２００９．，。）３２郑瑞耕。２００８．．Ｔ酸钢对淡水鱼类生长性能及肠粘膜结构的影响。硕±论文［］［３＾ＤａｈｉｙａＪＰ，ＷｉｌｋｉｅＤＣ，ＶａｎＫｅｓｓｄＡＱｅｔａｌ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ－ｎｅｃｒｏｔｉｃｅｎｔｅｒｉｔｉｓｉ打ｂｒｏｉｌｅｒｃｈｉｃｋｅｎｓｉｎｏｓｔａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｅｒａＪ．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄｐ［］Ｔ２００６－ｅｃｈｎｏｌｏ１巧１：６０８８．ｇｙ，，（）３４ＧｈｏｓｈＨＫ，ＨａｉｄｅｒＧ，ＳａｍａｎｔａＱｅｔａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｅｔａｒｓｕｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｏｒａｎｉｃ［］ｙｐｐｇａｃｉｄａｎｄｍａｎｎａｎｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｏｎｔｈｅｌａｓｍａｍｉｎｅｒａｌｓａｎｄｃａｒｃａｓｓｔｒａｉｔｓｏｆＪａａｎｅｓｅｐｐ－ｉｌＪ．ＲｅｓｅａｒｃｈＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｒｉｎＳｃ２００８１１４４４９．ｕａＶｅｅａｒｉｅｎｃｅｓ：ｑ［］ｙ，，（）３５郭传珍，曹兵海．下酸钢对肉鸡肠道Ｈ值、微生物菌群和挥发性脂肪酸的影响研［］ｐ－．究Ｊ．中国家禽，２００９３１１１６２１：［］，口）４２ 参考义献３６，王勇，钮海华，马文强等．包膜了酸钢对仔猪肠道微生物细菌数量的影响Ｊ．饲［］［］料研究４－，２０１０１１；３％．，［３７］ＬｕＪＪ，ＺｏｕＸＸ）ＷａｎｇＹＭ．Ｅｆｅｃｔｓｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅ０打化ｅｇｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａａｎｄｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆｗｅａｎｌｉｎｉｓＪ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌａｎｄＦｅｅｄｇｐｇ［Ｊ－Ｓｃｉｅｎｃｅ２００８１７．：５６８５７８，，Ａ－３８ＬｅｏｎｅｌＡＪｌｖａｒｅｚＬｅｉ化ＪＩ．Ｂｕｔｒａｔｅ：ｉｍｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｆｉｍｃｔｉｏｎＪ．Ｃｕｒｒｅｎｔ［］，ｙｐ［］ＯＭ２０２５５７４－４７乂ｉｎｉｏｎｉｎＣｌｉｎｉｃａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ皮ｅｔａｂｏｌｉｃＣａｒｅ１１：４ｐ，，（）２９２－７３９．，钟样。仔錯肠粘膜营养学与肠道修复町饲料工业２００８：２［］王惜，，（）４０ＰｌｏｅｒＳＳｔｕｍｆｆＦＰｅｎｎｅｒＧＢｅｔａｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｂｕｔｒａｔｅａｎｄｉｔｓｒｏｌｅｆｂｒｂａｒｒｉｅｒ［］ｇ，ｐ，，ｙｆｉｍｃｔｉｏ打ｉ打ｔｈｅａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔＪ，ＡｎｎａｌｓｏｆｔｈｅＮｅｗＹｏｒｋＡｃａｄｅｍｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｇ［］ｙ，２０５８２－１２１２：５５９．，４，冯国强，．了酸钢对断奶仔猪生长性能及免疫功能的影响化动１李丹丹，钮海华等［Ｊ２４２－物营养学报：７３１３．，２０１２３０，（）４２唐明红．？，王启军，胡隣，等下酸钢对生长肥育猪禍体品质和小肠形态的影响Ｊ单［］［］２４－５２胃动物营养．，２０１０６：９，（）４３李芙燕，陈耀星，王子旭，等．Ｓ种饲料添加剂对肉鸡小肠肥大细胞数量分布的［］－．动物医学进展：．，２００６２７２６５６８影响明［Ｊ］，（）４４刘丽华，．，张卫辉，夏新成等．下酸钢对肉仔鸡生产性能及免疫功能的影响中［］［巧－国粮油学报，２００９２４０４．：８８８，。）４５ＣｈａｍＭＭＧｏｕｒＳＭｅｔａｌ．ＲｅｓｔｔｓｔｔＭｏｒｅａｕＮＭｉｓａｎａｒｃｈｍｏｄｕｌａｅｓｉｎｖｉｖｏ［］，ｐ，ｐｙ，ｃｏｔｔｔｓｔｓｔｔｒｔ－ｌｏｎｉｃｂｕｙｒａｔｅｕｐａｋｅａｎｄｉｏｘｉｄａｔｉｏ打ｉ打ｒａｗｉｈｄｅｘａｎｓｕｌｆａｅｓｏｄｉｕｍｉｎｄｕｃｅｓＪ－ｃｏｌｉｔｉｓＪ．ｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｔｒｉｔｉｏｎ２００４１３４３：４９３５００．［］，，（）［４６ＡｒａｋｉＹＡｎｄｏｈＡＴａｋｉｚａｗａＪｅｔａｌ．Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｂｕｔｒｉｃｕｍ，ａｒｏｂｉｏｔｉｃｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ，］，，，ｙｐ－ｓｕｐｐｒｅ巧ｅｓｄｅｘｔｒａｎｓｕｌｆａｔｅｓｏｄｉｕｍｉｎｄｕｃｅｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｌｉｔｉｓｉｎｒａｔｓＪ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ［］ｏｕｍａｏｆｍｏｅｃｕａｒｍｅｄ－ｉｃｉｎｅ２００４：５７７ｊｌｌｌ，，１３（４）５８０．４７ＭｅｉｅＫ，ＤｅｖｏＲ，ＰｒｉｅｂｅｍＱＢｕｔｒａｔｅａｎｄ０化ｅｒｓｈｏｒｔｃｈａｉｎｆａｔｔａｃｉｄｓａｓｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ［］ｊｙｙｏｆｔａｎｃｅＪ．ｉｎｏｎｃａｌＮｕｔｉｍｍｕｎｉｙ：ｗｈａｔｒｅｌｅｖｆｏｒｈｅａｌｔｈＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｉｎＣｌｉｎｉｒｉｔｉｏｎａｎｄ［］２０３７５－７２１１０１６．ＭｅｔａｂｏｌｉｃＣａｒｅ：１，，（）４８．Ｔ酸钢对醋酸诱导的大鼠结肠炎的治疗作用Ｊ瑞卫，．医，［］，姜燕沈志祥［］药导报－２０００１９５５．：４６４６６，（）４９ＺｈａｎＷＨＪｉａｎＹＺｈｕＦｅｔａｌ．Ｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａｔｅｍａｉｎ１；ａｉｎｓｒｏｗｔｈｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｂ［］ｇ，呂，Ｑ，ｙｇｐｙ４３ 湖南农业大学硕－丄？学位论文ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｂｒｏｉｌｅｒｃｈｉｃｋｅｎｓＪ．ＢｒｉｔｉｓｈＰｏｕｌｔｒＳｃｉｅｎｃｅ２０１１［］ｙ，，５２－３：巧２３０１．（）５０．张猴琳，等［］，常建波，叶继丹下酸钢对美洲媛麵摄食、生长性能和抗氧化能为－５５１Ｊ．的影响［．２０１１２６４：５４９］，（）－５１ＣｒｕｓｅＪＬｅｗｉｎＭ民ＦｅｍｌａｎｏＧＰｅｔａｌ．Ｃｏｃａｒｃｉｎｏｅｎｉｃｅｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒ［］，，ｇｙｃｈｏｔｔｔ７８２７６－ｌｅｓｅｒｏｌｉｎｅｘｅｒｉｍｅｎａｌｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒＪ．Ｎａｕｒｅ１９５６９０：８２２８２５，ｐ［］，，（）［５２］Ｅｎｇｅ化ａｉｄＨＨ，ＤｕｎｃａｎＨＡ，ＤａｌＣａｎｔｏＭ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａＪＮｅｕｒｏｓｕｅ－ｃｅｌｌｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．ｒｇｒ１９９７４１４：８８６８９６．［］ｙ，，（）［５３］ＳｔｅｉｎｅｒｔＭ，ＷｏｂｕｓＭ，ＢｏｌｔｚｅＣ，ｅｔａｌ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＣＤ９７ｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓａｎｄｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅｓＪ．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆａｔｈｏｌｏ２００２［］ｐｇｙ，，１６１－５：１６５７１６６７（）．－－５４ＧａｓｃｈｏｔｔＴＷｅｒｚＯＳｔｅｉｎｍｅｙｅｒＡｅｔａｌ．ＢｕｔｒａｔｅｉｎｄｕｃｅｄｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＣａｃｏ２［］，，，ｙｃｅｌｌｓｉｎｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｖｉｔａｍｉｎＤｒｅｃｅｐｔｏｒＪ．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ［］Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ２００１２８８３－：６９０６９６．，，（）Ｍａｎｄａ－５５ｌＭＷｕＸＫｕｍａｒ民．Ｂｃｌ２ｄｅｒｅｕｌａｔｉｏｎｌｅａｄｓｔｏｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍ［］，，ｇ－ｂｕｔｒａｔｅｉｎｄｕｃｅｄａｏｔｏｓｉｓｉ打ｈｕｍａｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｒｃｉ打ｏｍａｃｅｌｌｓＪ．Ｃａｒｃｉｎｏｅｎｅｓｉｓｙｐｐ［］ｇ，１１１２２９－２３２９９７８．：，（）［５６］ＢｌｏｔｉｅｒｅＨＭ，ＢｕｅｃｈｅｒＢ，ＧａｌｍｉｃｈｅＪＰ，ｅｔａｌ．Ｍｏｌｅｃ山ａｒａｎａｌｙｓｉｓｏｆ化ｅｅ报ｃｔｏｆｓｈｏｒｔｃｈａｉｎｆａｔｙａｃｉｄｓｏ打ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆＮｕｔｒｉｔｉｏｎＳｏｃｉｅｔｙ，２００３６２１１０－１：１０６．，（）５７刘锐钢，肖英平，陈安国．了酸茲的生物学功能和机制及其在动物生产中的应用［］－？动物营养学报２５１１１１．，２０１３６；８０８８ｙ］，（）５ＯｗｅｎＭＡＱＷａｉｎｅｓＰＢｒａｄｌｅ巧ａｌ．Ｔｈｅｅ瓶ｃｔｏｆｄｉｅｔａｒｓｕｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆ［別，ｙＱｙｐｐｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅｏｎ化ｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｉｃｒｏｆｌｏｒ过ｏｆＣｌａｒｉａｓｇａｒｉｅｐｉｎｕｓ（Ｂｕｒｃｈｅｌｌ１８２２）．ＸＩＩｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎＭａ２８—ＪｕｎｅＢｏｏｋｏａｌｓｍｏｓｉｕｍ行ｓｈｎｕｔｒｉｔｉｏ打ａｎｄｆｅｅｄｉｎ１ｆｙｐｇ．ｙ，ａｂｓｔｒａｃｔｓ：１４９［５９ＤｅＷｅｔＦ，ＶＵｏｅｎＳ．Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇｃａｌｃｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅａｎｄｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｆｏｒｕｓｅｉｎｄｉｅｔｓｏｆ］ｊｍｏｚａｍｂｔ．Ａｔ２０１２．ＢｏｏｋｏｉｑｕｅｉｌａｐｉａＯｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓｍｏｓｓａｍｂｉｃｕｓｑｕａｃｕｌｕｒｅＥｕｒｏｐｅｆａｂｓｔｒａｃｔｓ．Ｐｒａｇｕｅ．６０ＰｉｖａＡＭＯｓｃｈ．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｎ１；ｅｓｔｎａｍｃｒｏｒａａｎｄｗａｍｏｒｏｏｏｆｗｅａｎｉｎｉＭｉｉｌｉｆｌｏｌｌｌ［］，，，ｐｈｇｙ－．ｌｉｎｉｓｆｅｄｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａｔｅＪ，ＡｎｈＳｃｉ２００７８５１１８４１１９１ｇｐｇ：ｙ［］，，４４ 参考文献［６１刘丽华，２００９．下酸钢对肉仔鸡生长、消化、肠道组织形态及肠粘膜免疫的影响。］硕±论文。６２刘锐刚，，２０１４Ｔ酸巧对断奶仔猪生长性能、血液生化和消化道功能的影响及其［］机理研究。硕±论文。６３陈国顺，赵芳芳，，徐振飞等。包膜Ｔ酸钢对断奶仔猪生长性能和肠道消化酶活［］性的影响Ｊ－３５－．国外畜牧学猪与禽，２０１１，１：６６７．［］口）［６４］刘嘉莉，胡晓波，田在锋，等．下酸钢对肉鸭生长及粪便中污染物减排效果的影－响口］．生态与农村环境学报，２０１１２７１：３９４３．，（）［６５］Ｌｅｅｓｏ打Ｓ，ＮａｍｋｕｎｇＨ，ＡｎｔｏｎｇｉｏｖａｎｎｉＭ，ｅｔａｌ．Ｅｆｅｃｔｏｆｂｕｔｙｒｉｃａｃｉｄｏｎｔｈｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｃａｒｃａｓｓｙｉｅｌｄｏｆｂｒｏｉｌｅｒｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ］‘Ｐｏ山ｔｒｙｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，８４（９）：－１４１８．１４２２６６ｓＲＧｕｎｕＢ－［ＣｌａｕｔｈｎｅｒＤＬｅｔｚＨ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｅｅｄｉｎｆａｔｃｏａｔｅｄｂｕｔｒａｔｅｏｎｍｕｃｏｓａｌ］，ｇｇｙ，ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｆｉｉｎｃｔｉｏ打ｉｎ化ｅｓｍａｌｌｉｎ化ｓｔｉｌｌｅｏｆ化ｅｐｉｇＪ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆａｎｉｍａｌ［］ａｎｄａｎｕｉｔｉｏ２００７１７－３１２－ｈｓｎ．ｐｙｉｏｌｏｇｙｉｍａｌｎｔｒ，，９（８）；３１８［６７］Ｍａｎｚａｎｉｌｌ过ＥＧＮｏｆｒａｒｉａｓＭ，ＡｎｇｕｉｔａＭ，巧ａｌ．Ｅｆｅｃｔｓｏｆｂｕｔｙｒａｔｅ，ａｖＵａｍｙｃｉｎ，ａｎｄａ－ｔｒｔｔｔｔｔｕｉｌｉｂｒｉｕｍｏｆＪ．Ｊｐｌａｎｔｅｘａｃｃｏｍｂｉｎａｉｏｎｏ打ｈｅｉｎｅｓｉ打ａｌｅｑｅａｒｌｙｗｅａｎｅｄｉｓｏｕｒｎａｌｐｇ［］８４１７４３－２７５１ｏｆ．ａｎｉｍａｌｓｃｉｅｎｃｅ２００６０：２，，｛）６８Ｃｚｅｒｗｉ打ｓｋｉＪＨｏｂｅｒ０ＳｍｕｌｉｋｏｗｓｋａＳｅｔａｌ．Ｅｆｅｃｔｓｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａｔｅａｎｄ［］，ｊｇ，，ｙｓａｌｉｎｏｍｃｉｎｕｏｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｂｉｏｔａｍｕｃｏｓａｌｍｏｒｈｏｌｏａｎｄｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｙｐ，ｐｇｙｐｂｒｏｉｌｅｒｃｈｉｃｋｅｎｓｒｉｉｏｎ２０１２２－？ＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｔ：１１．，，６６１０２６…（）６９ＺｈａｎＷＨＧａｏＦＺｈｕＦｅｔａｌ．Ｄｉｅｔａｒｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａｔｅａｌｌｅｖｉａｔｅｓｔｈｅｏｘｉｄａｔｉｖｅ［］ｇ，，Ｑ，ｙｙｓｔｒｅｓｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅｅｘｐｏｓｕｒｅａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｓｍｅａｔｑｕａｌｉｔｙｉｎｂｒｏｉｌｅｒ－ｃｈｉｃｋｅｎｓＰｏｕｔｒｓｃｅｎｃｅ２０１：２．？ｌｉ１１９０５９２２５９９…ｙ，，（。７０ＢＭＭ＊ｉａｉＰｉｖ泣Ａｏｓｃｈｉｎｉｅｔ过１．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｎｉｃｒｏｆｌｏｉａ，ａｎｄｗａｌｌ［］ｇＱ，，ｍｏｒｐｈｏｌｏｏｆｔ．２００７ｗｅａｎｌｉｎｉｓｆｅｄｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａｅＪＪｏｕｒｎａｌｏｆａｎｉｍａｌｓｃｉｅｎｃｅ，ｇｙｇｐｇｙ［］，－１１８５５．：１１８４１９（）［７１］ＷｉｌｓｏｎＤＪ，ＭｕｔｓｖａｎｇｗａＴＴ，ＰｅｎｎｅｒＧ目．Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｌｂｕｔｙｒａｔｅｄｏｅｓｎｏｔｅｎｈａｎｃｅｔｈｅａｂｓｏｒｐｔｉｖｅｏｒｂａｒｒｉｅｒｆｕｎｃｔｉｏ打ｓｏｆｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｄｏｖｉｎｅｒｕｍｉ打ａｌｅｐｉｔｈｄｉａＪ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ［］ｃｉｅｎｃｅ－Ａｎｉｍａ；３３１１．ｌＳ２０１２９０９３１５６，（，）７２Ｋｔｔｌ－ａｔｏＳＩＳａｏＫＣｈｉｄａＨｅａ．ＥｆｅｃｔｓｏｆＮａｔｔｓｔｂｕｒａｅｕｌｅｍｅ打ｔａｉｏ打ｉｎｍｉｌｋ［］，，，ｙｐｐｆｂｒｍｕｌａｏｎｌａｓｍａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＧＨａｎｄｉｎｓｕｌｉｎａｎｄｏｎｒｕｍｅｎａｉｌｌａｐ，ｐｐ４５ 湖南农业大学硕上学位论义ｄｅｖｅｍｅｎｔＪ－ｌｏｉｎｃａｌｖｅｓ．ｏｕｒｎａｌｏｆＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏ２０１１２１１３：２４１２４８．ｐ口］ｇｙ，，（）＾７ｏｒｋａＩＫｏｗａｌｓｋｉＺＭ，ＩＭｅｔｒｚａｋＰ，ｅｔａｌ．Ｅ祗ｃｔｏｆｍｅｔｈｏｄｏｆｄｅｌｉｖｅｒｏｆｓｏｄｉｕｍ［＾Ｇ，ｙｂｕｔｒａｔｅｏｎｒｕｍｅｎｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｉｎｎｅｗｂｏｒｎｃａｌｖｅｓＪ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｄａｉｒｙｓｃｉｅｎｃｅ，２０１１ｙｐ［］，９４－１１：巧７８５５８８（．）７４杨代勤．Ｊ．，陈芳，李道霞黄錯的营养素需要量及饲料最适能量蛋白比［水产学报，［］］２０００－，２４３：２５９２６２．（）［７５］杨代勤，严安生，陈芳．几种氨基酸及香味物质对黄錯诱食活性的初步研究［Ｊ］．水生生物学报００２２６２２０５－２０８，２，：．（）７６杨代勤，陈芳，阮国良．饲料中添加胆碱对黄錯生长，组织脂肪含量及消化酶活性［］－的影响［Ｊ．，２００６３０５：６７６６８２．］水产学报，（）７７张国辉，何瑞国，张世萍．维生素Ｅ对黄錯繁殖性能的影响化水生生物学报，２００７，［］１２－２００３．：１９６（）７８曹志华，，．豆Ｊ．［］，罗静波文华等巧替代部分鱼粉对黄錯生长性能的影响［］湖北农业科学１０６－，２００８，４７９１：８０７０．（）７９Ｊ．曹志华，罗静波，文华等．肉骨粉代替不同水平的鱼粉对黄錯生长的影响［湖北农［］］２００９４８－业科学：１，，８１９７１９７２．（）＂Ｗ－８０ＹｅｕｎＳＣｈａｎＳＴ．ＩｎＶｉｖｏＥｆｆｅｃｔｓｏｆＬＨａｎｄＬＨＲＨＡｎａｌｏｏｎＳｅｘＲｅｖｅｒｓａｌａｎｄ［］ｇ，ｇＰｌａｓｍａＳｅｘＳｔｅｒｏｉｄＰｒｏｆｉｌｅｓｉｎｔｈｅＦｅｍａｌｅＭｏｎｏｐｔｅｒｕｓａ化ｕｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｒａｌａｎｄ－ＣｏｍａｒａｔｉｖｅＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏ．１９９３９０４。３３０ｐｇｙ，（）８１ＳｉａｎｇＨＹＹｅｅＬＭＳｅｎｇＣＴ．Ａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｏｆｔｃｏｒａｎｏｃｈｌｏｒｉｎｅｉｎｓｅｃｉｉｄｅｅｎｄｏｓｕｌｆａｎ［］，，ｙｇａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｂｅｈａｖｉｏｕｒａｎｄｓｏｍｅｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆＡｓｉａｎｓｗａｍｐｅｅｌ（Ｍｏｎｏｐｔｅｒｕｓａｌｂｕｓ，Ｚｕｉｅｗ）［Ｊ］．ＰｅｓｔｉｃｉｄｅＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００７，８９：４６－５３．８２周歧存，．．］麦康森，刘永坚，等动植物蛋白源替代鱼粉研巧进展阴水产学报，［２００９－，２９３：４０４４１０．（）冷向军，，．．８３，李小勤陈巧爱等鱼类对晶体氨基酸利用的研巧进展叫水生生物［］－学报，２００９，３３１：１１９１２０．（）ＲＥＦＳＴ＇８ＩＥＳＳＴＯＲＥＢＡＫＫＥＮＴＲＯＥＭＡＪ．Ｆｅｅｄｃｏｎｓｕｍｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｉｎ［叫，，ｐＡｔｌａｎｔｉｃｓａｍｏｎＳａｌｍｏｓａｌａｒｆｅｄｄｉｅｔｓｗｉ化ｆｉｓｈｍｅａｌｅｘｔｒａｃｔｅｄｓｏｂｅａｎｍｅａｌｏｒ（），ｙ４６ 参考文献ｓｏｂｅａｎｍｅａｌｗｉｔｈｒｅｄｕｃｅｄｃｏｎｔｅｎｔｏｆｏｌｉｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｔｒｓｉ打ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｔｎｄｙｇ，ｙｐ，Ｉｅｃｉｎｓａｓｏａａｎｔｉｅｎｓｕａｃｕｔｕｒｅ１－．Ａ：１２．ｙｇ…ｑｌ，９９８，１６２３０１３－ＭＣＫＥＬＬＥＰＡＢＡＫＫＥＭＰＲＥＳＳＣＭＢＡＥＶＥＲＦＪＯＲＤｅｔａｌＣａｎｅｓｕｎｅ於．ｈｉｎｉｍｍ［］，，ＱｇａｎｄｅｎｚｙｍｅｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａｏｆＡｔｌａｎｔｉｃ－ｓａｌｍｏｎＳａｌｍｏｓａｌａｒＬｗｏｂｅａｎｍｅａｎｄｕｃｅｄｅｎｅｒｓ．ｏｕｒｎａｏｆｅｓ．ｉｔｈｓｌｉｔｉｔｉＪＪｌＦｉｓｈＤｉｓｅａｓ，，ｙ［］，－２０００２３：１１５１２７．，［８６］ＬＩＮＳＭ，ＭＡＩＫＳ，ＴＡＮ目ＲＥｆｅｃｔｏｆｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｂｙ－ｒａｅｓｅｅｄｃｏｔｔｏｎｓｅｅｄｃｏｍｏｕｎｄｏｎｒｏｗｔｈｂｏｄｃｏｍｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｉｔｏｆｔｉｌａｉａｐｐｇ，ｙｐｙｐｘＯｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓｎｉｌｏｔｉｃｕｓＯ．ａｕｒｅｕｓＥｔＬ２００７．ＯｃｅａｎｏｌｏｉａｉｍｎｏｌｏｉａＳｉｎｉｃａ３８２：ｇｇ，，（）－１６８１７３．口７ＡＯＡＣ．ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＯｆｆｉｃｉａｌＡｎａｌｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｓＡ．Ｉｎ：ＷｉｌｌｉａｍｓＳＥｄｓＯｆｆｉｃｉａｌ］ｙ［］（），ＭＷ－ｅｔｈｏｄｓｏｆ．１Ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｍ］１４化ｅｄ，ａｓｈｉｎｇｔｏｎ．１９８４：１５２６３．［８８］ＹａｎＱ，ＸｉｅＳ，ＺｈｕＸ，ｅｔａｌ．Ｄｉｅｔａｒｙｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｆｏｒｊｕｖｅｎｉｌｅｒｏｃｋｆｉｓｈ，－ＳｅｂａｓｋｓｓｃｈｌｅｅｌｉＪＡｕａｃｕｌｔｕｒｅＮｕｔｒｉｔｉｏｎ２００７１３３：１６３１６９．ｇ［．ｑ］，，（）８９胡卫，姜燕，沈志祥Ｊ．医药导报，．下酸钢对醋酸诱导的大鼠结肠炎的治疗作用［］［］－２０００，５４６１９：５４６６．（）［９０］ＭｏｒｉＫ，ＮａｋａｎｉｓｈｉＴ，ＳｕｚｕｋｉＴ，ｅｔａｌ．Ｄｅｆｅｎｓｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｉｎｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓａｎｄｆｉｓｈ［Ｊ］．Ｔａｎａｓｈｓｕａｋｕｓａｎｏｓｏ３４－ｋｕｉｔＫＫ１９８９：２１４２２３ｐ．，，［９１］ＭｃｃｏｒｄＪＭ，ＦｒｉｄｏｖｉｃｈＩ．Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅｒａｎｅｎｚｙｍａｔｉｃｆｕｎｃｔｉｏｎｆｏｒｅｒｔｈｒｏｃｈｅｍｏｃｕｒｅｉｎ．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｉｃａｌＣｈｅｍｔｒ１化ｉｎｉｓ９６９２４４：ｙ叩（ｐ）ｙ］ｇｙ，，６０４９－６０５５．９２杨在宾，邹阳，杨雄仁等？微囊了酸钢对肉仔鸡肠道消化酶活性的影响Ｊ？［］，［］饲料工业２７－２０１１２．：巧，，９３ＣｈｕｎＹＳｎＥｒｉｃｋｓｏｎ民Ｈｅｔａｌ．ｅｃｔｏｆｒｏｗｔｈａｎｄｓｏｄｉｕｍｂｕｔｒａｔｅｏｎｇ，ＳｏｇＩＳ，Ｅｆ［］，ｇｙ－ｕｍａｎｂｒｕｓｈｂｏｒｄｅｒｍｅｍｂｒａｎｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｈｙｄｒｏｌａｓｅｓｉｎｈｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓＪ．［］Ｃａｎｃｅｒｒｅｓｅａｒｃｈ－１９８５４５７：２９７６２９８２．，，（）－９４李可俊，管卫兵．ＰＤＧＧＥ口八种，徐晋麟，等ＣＲ对长江河野生鱼类肠道菌群多［］３－２６９样性的比较研究机．．中国微生态学杂质，２００７１０：２６８，（）［９５］ＺｏｅｔｅｎｄａｉＥＱＡｋｋｅｒｍａｎｓＡＤＬ，ＤｅｖｏｓＷＭ．Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｔｒｔｔ－ｌｅｃｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎａｌｙｓｉｓｆｒｏｍｈｕｍａｎ拓ｃａｌｓａｍｐｌｅｓｒｅｖｅａｌｓｓａｂｌｅａｎｄｈｏｓｓｐｅｃｉ打ｃｔＪ－ｃｏｍｍｕｎｉｉｅｓｏｆ．ＡＥｎｖｉ１１ａｃｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａｌｒｏｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ９９８６４０：３８５４３８５９．［］ｐｐ，，（）４７ 湖南农业大学硕丄－学位论文［９６］Ｓｉｍｐｓ打ＪＭ，Ｍｃｃｒａｃｋｅ打Ｎ，ＧａｓｋｉｎｓＨＲ，ｅｔａｌ．Ｄｅ打ａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅ打ｔｇｄｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆ１６ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡａｍｌｉｃｏｎｓｔｏｍｏｎｉｔｏｒｃｈａｎｇｅｓｉｎｆｅｃａｌｂａｃｔｅｒｉａｌｐｐｏｐｕｌａｔｉｏ打ｓｏｆｗｅｎｉｎｉｓａｆｔｅｒｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｅｕｔｅｒｉｓｔｒａｉ打ＭＭ５３Ｊ．ｇｐｇ［］Ａ＿４７ｐｐｌＥｎｖｉｒｏｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ２０００６６ｌｌ：４７０５１４．，，（）ｏｎｔ－－９７ＧｇＪＳｉＷＦｏｉｒｓｔｅｒ艮Ｊｅａｌ．１６ＳｒＲＮＡｅｎｅｂａｓｅｄａｎａｌｓｉｓｏｆｍｕｃｏｓａａｓｓｏｃｉａｔｅｄ［］，，，ｇｙｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙａｎｄｈｙｌｏｅｎｙｉｎｔｈｅｃｈｉｃｋｅｎａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔｓ：ｆｒｏｍｃｒｏｓｔｏｐｇ呂ｐｃｅｃａＪＦＥＭＳＭｉｃｏｂｏｌＥｃｏｌ２００７５９－ｒｉ１：１４７１５７．．［］，，（）９８王金全，蔡辉益，印遇龙，等．小麦日粮非淀粉多糖和木聚糖酶对肉仔鸡肠道微［］１０１４－生物区系的影响Ｊ．畜牧兽医学报２００５０２０．％〇０；１［］，，）９９姚文，，．，朱伟云韩正康等应用变性梯度凝胶电泳和１６ＳｒＤＮＡ序列分析对［］Ｊ－山羊瘤胃细菌多样性的研究，２３７４３７８．．中国农业科学００４３７９：１１［］，（）１００刘玉春，周志刚，石鹏君，等．网箱养殖青石斑鱼鲍及体表粘附菌群的［］ＰＣＲ－ＤＧＧＥ比较分析口１１－．中国农业科技导报００８１０：８８６．］，２，（）１０１ＺｈｏｕＷＨＣｈｅｎＸＸＺｈａｎＸＤｅｔａｌ．ＡＰｅｒｌｉｍｉｌａｒｓｔｕｄｏｎｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆ［］，，ｇ，ｙｙｄｉｆｅｒｅｎｔｆｅｅｄｉｎｇｓｔｕｆｏｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｏｆｇｒａｓｓｃａｒｐ（〇£。邸片口作内各０麻。／成－ＪＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｕａｚｈｏｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ１９９８１７３：２５２２５６．．ｇｙ［］，，（）。０２］ＹｕＥＭ，ＹｕＤＱＢｉＸＭ，ｅｔａｌ．ＦｉｎｇｅｒｔｐｒｉｎｔｉｎｇａｎｄＤｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ也ｅＩｎｔｅｓｔｉｎａｌＢａｃｔｅｒｉａｌｔｏｆ－ＣｏｍｍｕｎｉＣｒｉｓＧｒａｓｓＣａｒａｎｄＤａｎｚａｉＧｒａｓｓＣａｒ〇６。〇７片幻／打妒麻。棘ｙｐｐｇｐ（／７／／崎ｔ－ＤＧＧＥＪＪｏｔｔ２０１２２０１０１１８４－１１ｗｉｕｒｎａｌｏｆ．ｈＰＣ民［］．ＡｇｒｉｃｕｌｕｒａｌＢｉｏｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，，（）：１９１０３ＤｏｕｌａｓＭｃｌｎｔｏｓｈａＢａｉｉｎ如〇＾ＢｅｎａｍｉｎＳｅｔａｌ．ＦｏｒｗａｒｄＣｕｌｔｕｒｅｉｎｄｅｅｎｄｅｎｔ［］ｇ＾ｊｇｊ，ｐｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｏｕｌａｔｉｏｎｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｃｏｄＧａｄｕｓｍｏｒｈｕａＬｐｐ（）ａｎｄｌｉｖｅｆｅｅｄａｔａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｈａｔｃｈｅｒｙｆａｃＵｉｔｙｕｓｉｎｇｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａ出ｅｎｔｇｅｌ－ｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓ．Ａｕａｃｕｌｔｕｒｅ２００８４２５０．ｉｓ２７５：ｐ机ｑ，，１０４ＢａｋｋｅＩＳｋｅｒｍｏＪＶｏＴＡ约ａｌ．Ｌｉｖｅｆｅｅｄｉｓｎｏｔａｍａｏｒｄｅｔ：ｅｎｎｉｎａｎｔｏｆ也ｅ［］，ｊ，，ｊｍｉｃｒｏｂｉｏｔａａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｃｏｄｌａｒｖａｅＧａｄｕｓｍｏｒｈｕａＪ．ＥｎｖｒｏｎＭｃｒｏｂｏＲｅｉｉｉｌｐ（）［］，２０１３４－５：５３７５４８．，（）４８ 致谢致谢时光飞逝，三年研究生生活即将结束，踏上新的征程。回首Ｈ年时光，感谢那些帮助我，关必我的老师和同学，是你们让我这Ｈ年充满快乐、激情和动力，也感谢曾遇到的困难和挫折，让我变得成熟、强大。本论文是在胡毅副教授、张建社教授和褚武英教授的关怀和指导下完成的，从论文的选题到论文的撰写，无不倾注着导师的辛勤汗水，两位老师渊博的知识、严谨的科学态度一直深深的影响和激励着我。另外，老师还是我的人生导师，教会我很多的道理，同时给予我很多生活上的帮助。再此，向老师表示真挈的感谢。同时，我还要感谢水产系王晓清、肖调义、钟蕾、戴振炎、李德亮、刘巧林、张婷、文祝友、王宏权、赵玉蓉、陈开健、许宝红、刘晓燕、江辉、杨水才等老师在硕±研究生期间对我学习。、实验上的帮助与支持感谢师姐毛盼、王诞明、师兄陈敦学、马晓、王开卓、金柏涛、李金龙、黎玉元等在实验过程中给我提出了许多宝贵意见和指导，同届刘庄鹏、王桂苹、朱塞、易谭、桂琳、师妹田芋芋、蔡荣、李迪等在实验上的帮、孙念、师弟李昭林、陈云飞、蒋迪助。最后，深深地感谢我的父母、我的家人，有你们的支持才能够顺利完成硕±阶段的学习，爱你们。张俊智２０１５年５月４９ 湖南农业大学硕－上学位论文作者简介姓名：张俊智性别：男出生年月：１９８９年１１月籍贯：山东省禹城市民族；汉族政治面貌：中共党员主要教育经历：２０１２年０９－２０１５年０６ｔ月月，湖南农业大学动物科学技术学院，水产养殖，硕：２００８年０９－２０１２年０６月月，潍坊学院，生物专业，生物技术，学±一２００－２００８年０６５年０９月月，山东省禹城市中获奖情况：。＂２０１４年获研究生国家奖学金＂＂＂＂２０１３年获学习优秀二等奖学金和天锐企业笃学奖发表论文情况：胡毅，黄云，，张俊智等。高棉稍饲料中补充赖氨酸和铁对青鱼幼鱼生长、免疫力及４２６（－１１）：４４３３４５１．组织中游离棉龄含量的影响。动物营养学报，２０１，３ＪｕｎｚｈｉＺｈａｎｕｉｎｕｅｔａ．ｔｔｌＣｏｍｌｅｔｅｍｉｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｅｎｏｍｅｏｆｈｅｈｂｒｉｄｏｆｇ，ＷｙｇＣｈ，ｐｇｙ乂Ｃ化ｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎｉｄｅＵｕｓ．Ｅｌｏｐｉｃｈｔｈｙｓｂａｍｂｕｓａ．ＭｉｔＱｃｈｏｎＡｒｉＡｌｉｙＮＡＪｉｍｚｈＺｈａｎＹｉＨｕａｅｔａｌ．Ｅｆｅｃｔｏｆｄｉｅｔａｒｔａｕｒｉｎｅｏｎｒｏｗｔｈｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｄｉｅｓｔｉｖｅｉｇ，＾，ｙｇｐ，ｇｅｎｚｔｔｔＴＯ民Ｅ－ＢＰｍｅａｃｉｖｉｉｅｓａｎｉｏｘｉｄａｎｔｓｔａｔｕｓａｎｄａｎ过４ｅｎｅｅｘｒｅｓｓｉｏ打ｓｏｆｂｌａｃｋｃａｒｙ，ｇｐｐ（Ｍｙｌｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎｐｉｃｅｕｓ）Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ（已投）ＹｉＨｕＪｕｎｚｈｉＺｈａｎｅｔａｌ．Ｅｆｅｃｔｓｏｆ巧ｓｈｍｅａｌｒｅｌａｃｅｍｅｎｔｂｓｏｒｏ化ｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｏｎ，，ｇｐｙｙｐｒｏｗｔｈｓｏｍｅｓｅｒｕｍｂ－ｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｉｃｅｓａｎｄｒｏｗｔｈｒｅｌａｔｅｄｅｎｅｓｅｘｒｅｓｓｉｏｎｉｎｍｕｓｃｌｅｆｏｒｇ，ｇｇｐｕｖｅｎｉｌｅｒｉｃｅｆｉｌｅｄｅｅｌＭｏｎｏｔｅｍｓａ化ｕｓＡｕａｃｕｌｔｕｒｅｎｕｔｒｉｔｉｏｎｄ＊投）ｊ（ｐ）ｑ（５０ 作者简介ＹｉＨｕ，ＪｕｎｚｈｉＺｈａｎｇｅｔａｌ．ＤｉｅｔａｒｙｖｉｔａｍｉｎＣｒｅｑｕｉｒｅｍｅ打ｔａｎｄｉｔｓｅｆｅｃｔｓ〇打ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｔａｔｕｓａｎｄｍｍｕｎｅｒｅｓｏｎｓｅｏｆｒｉｃｅ行ｅｌｄｅｅｌ化＾化ｗｙｕａｃｕｌｕｒｅｉｎｎａｏｎａｌｉｐ，Ａｑｔｔｅｒｔｉ巧投）ＺｏｎｇｊｕｎＬｉ，ＹｕａｎｈｕａＣｈｅｎ，ＪｕｎｚｈｉＺｈａｎｇｅｔａｌ．．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙＢａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏｓｕｅｍｅｎａｉｏｎｏｎｒｏｗｔｈｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｔｈｅｒｏｗｔｈ－ｒｅａｅｅｎｅｓｍｃｒｏｓｐｐｌｔｔｇｐｇｌｔｄｇ／ｉＲＮＡ？庇ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉ打ｔｈｅｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｏｆｒａｓｓｃａｒＣ／ｅ灼內灼ｚ／／口Ａｕａｃｕｌｔｕｒｅｇｐ（）ｑｎｕｔｒｉｔｉｏｎ修魄），张俊智，呂富郞志利等。膨化豆相替代鱼粉对黄錯生长、体成分及部分血液生理生化指标的影响《动物》（已投）。营养学报专利：胡毅，张俊智，钟蕾《了酸钢在黄錯饲料中的应用》一胡毅，张俊智《》，钟蕾种提高词料中棉牠利用、降低游离棉酷毒性的方法５１
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