长链非编码rna—uca1影响胃癌进展的机制研究

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1、分类号：____________R34密级：______________公开ＵＤＣ：____________单位代码：______________11646硕士学位论文论文题目：长链非编码RNA—UCA1影响胃癌进展的机制研究学号：_________________________1211076003姓名：_________________________蒋孝明专业名称：_________________________生物化学与分子生物学学院：_________________________医学院指导教师：_______

2、__________________郭俊明教授_________________________聂勇战教授论文提交日期：2015年04月15日AThesisSubmittedtoNingboUniversityfortheMaster’sDegreeMechanismsoflncRNA-UCA1onGastricCancerProgessionCandidate：JiangXiaomingSupervisors：ProfessorGuoJunmingProfessorNieYongzhanFacultyofMedicalSc

3、hoolNingboUniversityNingbo315211,Zhejiang,P.R.ChinaDate:April15,2015独创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得宁波大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。签名：___________日期：

4、____________关于论文使用授权的声明本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵循此规定）签名：___________导师签名：___________日期：____________宁波大学硕士学位论文长链非编码RNA—UCA1影响胃癌进展的机制研究摘要目的长链非编码RNA（longnoncodingRNA,lncRNA）是一类无蛋白编码功能的基因组转录本。

5、lncRNA通过多种调控机制影响生物体的正常生物学过程和肿瘤等疾病的发生发展。本研究通过转录组芯片和RNA测序（RNAsequencing,RNAseq）数据分析，筛选出与胃癌相关的lncRNA。我们发现lncRNA-尿路上皮癌相关1（urothelialcancerassociated1,UCA1）在胃癌中高表达并探讨其影响胃癌进展的可能机制。方法1.利用多组转录组表达芯片和RNAseq数据分析UCA1在胃癌组织中的表达水平。利用在线工具cBioPortal（http://www.cbioportal.org/）分析UCA

6、1基因在胃癌中拷贝数的变异情况；癌症基因组图谱（TheCancerGenomeAtlas,TCGA）数据分析UCA1表达水平与胃癌临床病理因素的关联性。2.实时定量RT-PCR技术检测UCA1在胃癌细胞株中的相对表达水平，并以胃癌细胞株AGS为模型，采用RNA-荧光原位杂交（fluorescentinsituhybridization,FISH）分析UCA1在AGS细胞中的定位情况。3.利用siRNA瞬时下调UCA1表达，MTT检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞周期和凋亡。4.利用慢病毒shRNA稳定下调UCA1表达，细胞计数

7、、高内涵分析和平板克隆实验检测细胞增殖；细胞划痕、高内涵分析实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和转移。5.分析TCGA的miRseq数据中差异表达的miRNA，并预测它们与UCA1的相互作用关系。6.蛋白质质谱技术分析受UCA1调控的蛋白质。结果1.胃癌转录组芯片数据和RNAseq数据分析均表明，UCA1在胃癌中高表达；它的表达水平与其基因组变异和胃癌患者的临床病理因素均无关。1长链非编码RNA—UCA1影响胃癌进展的机制研究2.相对于正常胃黏膜上皮细胞GES，UCA1在胃癌AGS细胞中显著高表达。RNA-FISH

8、实验证明它主要定位在细胞质中。3.利用siRNA沉默UCA1后明显抑制胃癌细胞增殖，阻滞细胞于G1/S期，但并未诱导细胞凋亡。机制研究发现，UCA1能够通过调控周期素依赖激酶抑制剂1B（cyclin-dependentkinaseinhibitor1B,CDKN1B）和细胞分裂周期蛋白25