长角血蜱谷氨酰胺转胺酶的真核表达及分子特征分析

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3、转胺酶（ＴＧａｓｅ）参与了节肢动物血淋己的凝集和皮肤角质层的形成，在节肢动物的免疫过程中发挥着重要的作用。实验室前期从长角血蜗的ＥＳＴ文库中克隆了谷氨酌胺转胺酶的全长基因，并将一／／／ＴＵａｓｅ基因亚克隆到大肠杆菌中，诱导表达出了具有定生物活性的重组蛋白ｒＨ订Ｇａｓｅ，但该重组蛋白表达量和活性均较低，鉴于长角血婢是真核生物，真核生物蛋白质翻译后的修饰往往与功能相关，本实验成功构建了真核表达质粒ｐＰＩＣＺＣ／／／／ｒＧａｗ，将ＭｒＧｏｙｅ基因亚克隆入毕赤酵母（巧Ｃ舶ａｐｏｓｔｏ地）中。用甲醇诱导含重

4、组质粒的毕赤酵母表达外源基因，用抗ｒＨｌＴＧａｓｅ鼠血清和抗多聚组氨酸抗Ｗｔ－体进行ｅｓｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎ分Ｉｆｆ，结果表明重组蛋白ＨｉｓｒＨｌＴＧａｓｅ己在真核表达系统中ｇ显示Ｈ为’５３０Ｃ时成功表达。在不同的条件下进行诱导表达，结果ｐ．０，诱导温度为－２５０Ｌ－表达量较高ｒＨｌＴＧａｓｅ／ｍ。根ｒＨｌＴＧａｓｅ催，而曲ｓ最佳的表达量约为峭据Ｈｉｓ化生物素标记的戊胺共价偶联到干酪素后产生的巧光强度与波长的变化测定°－－ＨＨｉｓｒＨｌＴＧａｓｅ活性：ｉｓｒＨｌＴＧａｓｅ能够，在２５Ｃ、，结果显示催化干

5、酪素和戊胺的交联Ｈ－催化时间长达３ｈ后，酶的催化活性达到最高值ｉｓｒ曲ＴＧａｓｅ催。用扫描电镜观察化干酪素的交联效果，结果发现蛋白质的构象发生了明盈变化，形成了更为致密的一－ｒＨＴＧａｓｅ生物活性分析ｌ，了解其酶学特征结构。通过对Ｈｉｓ，有助于我们进步了解该酶在长角血婢中发挥的生理功能，Ｗ便为长角血婢的防治提供科学依据。而且来自长角血蛛的谷氨醜胺转胺酶是否可Ｗ用作食品添加剂改善食品的外观和风味并用于新型生物医学材料的研制一，有待进步的研究。关键词，，克隆，表达，酶学分析：长角血蛛谷氨醜胺转胺酶ＩＡ

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