铜绿假单胞菌的耐药表型与耐药基因型研究

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1、K^if^IAGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI全曰制硕士专业学位（毕业）论文铜绿假单胞菌的耐药表型与耐药基因型研究学位申请人：胡凡指导教师：李玉荣副教授学位名称：兽医硕士研究领域：授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月三H—日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不句.含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作

2、的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:签字曰期：^年6月I曰学位论文版权使W授权15太荦位论j作者完令了解河北农业大学冇关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家冇关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允仵论文被汽阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入存关数据痄进行检索，可以采用影卬、缩印成扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权15)学位论文作者签名:导师签名:签字曰期：、《年签字日期：^>'1年学位论文作者毕

3、业后去向:工作单位：电话:通讯地址：邮编:分类号：S854单位代码：10086密级：公开学号：20139140688铜绿假单胞菌的耐药表型与耐药基因型研究学位申请人：胡凡指导教师：李玉荣副教授学位名称：兽医硕士研究领域：授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月三十一日英文缩略表英文缩写英文全称汉语名称PAPseudomonasaeruginosa铜绿假单胞菌PCRPolymerasechainreaction聚合酶链式反应mlMilliliter毫升μlMicroliter微升minMinute分钟sSe

4、cond秒hHour小时dNTPDeoxyribonucleosidetriphosphate脱氧核苷三磷酸LBLuria-BertanimediumLB培养基CFUColonyformunit菌落形成单位CACetrimideAgar十六烷三甲基溴化铵琼脂STRStreptomycin链霉素NEONeomycin新霉素KANKanamycin卡那霉素GENGentamicin庆大霉素SPTSpectinomycin大观霉素AMKAmikacin阿米卡星NORNorfloxacin诺氟沙星CIPCiproflo

5、xacin环丙沙星ENREnrofloxacin恩诺沙星OFLOfloxacin氧氟沙星GATGatifloxacin加替沙星LOFLevofloxacin盐酸左氧氟沙星CROCeftriaxonesodium头孢曲松钠EFTCefotaximesodium头孢噻肟PENPenicillin青霉素CECefradine头孢拉定SCFCefoperaonesodiumandSulbactamsodium头孢哌酮钠舒巴坦钠AMEAminoglycosidemodifyingenzymes氨基糖苷类修饰酶摘要铜绿假单

6、胞菌（Pseudomonasaeruginosa,PA）是一种常见的人畜共患机会致病菌，给人畜健康带来巨大威胁。本研究自临床分离PA51株，并对其耐药表型、耐药基因型、外毒素及动物致病性进行了检测分析，以期为临床铜绿假单胞菌病的研究提供基础数据。自河北及周边地区2011年-2014年临床发病的鸡、猪体内分离并纯化，通过形态学及PCR技术进行鉴定后，获得PA野毒51株；采用Kirby-Bauer纸片扩散法（K-B法）进行3类17种抗菌药的药物敏感性试验，结果均表现为多重耐药性；对氨基糖苷类药物链霉素、阿米卡星、卡

7、那霉素、新霉素、庆大霉素和大观霉素的耐药率依次为84.3%、84.3%、78.4%、78.4%、54.9%和25.2%；对喹诺酮类药物氧氟沙星、恩诺沙星、盐酸左氧、加替沙星、诺氟沙星和环丙沙星的耐药率依次94.1%、82.4%、80.4%、78.4%、62.7%和25.2%；对β-内酰胺类药物头孢拉定、青霉素、头孢曲松钠、头孢噻肟、头孢哌酮钠/舒巴坦钠的耐药率依次98.0%、98.0%、70.6%、2.0%和0.0%。本文对51株PA分离株相应的抗性基因进行了PCR检测。6种氨基糖苷类耐药基因(AMEs)的检测

8、结果显示，ant(3′′)-Ia、aac(6′)-Ib、aac(3)-IIa、aph(3′′)-Ib(strA)、aph(6′)-Id(strB)、Aph(3′)-IIa的阳性率由高到低依次为98.0%、51.0%、43.1%、41.2%、31.4%、17.6%；其中有1株为所测AMEs基因阴性，3株为6种基因全携带者；16SrRNA甲基化酶（armA、rmtA、rmtB）的检测结果均