自噬对甲状腺未分化癌发病机制及放化疗增敏作用的研究

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1、自噬对甲状腺未分化癌发病机制及放化疗增敏作用的研究Researchoneffectofautophagyinpathogenesisandsensitizationofradiothrapyandchemothrapyinanaplasticthyroidcarcinoma作者姓名：刘杨专业名称：外科学指导教师：孙辉教授学位类别：医学硕士论文答辩日期：2015年6月2日前言自噬（Autophagy），作为除细胞凋亡以外的另一种程序性细胞死亡方式，是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡，与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物的过程，其发生对维持细

2、胞内环境稳态具有重要作用。多项研究证实自噬在肿瘤的发病机制、进展、治疗策略以及新陈代谢方面扮演重要角色，自噬是一把双刃剑，在肿瘤发病起始阶段，自噬通过抑制致癌基因的蛋白质或细胞器积累而扮演着肿瘤抑制因子角色，而当肿瘤形成之后，自噬因提供丰富营养物质而发挥促进癌细胞生存作用。另有研究表明自噬对肿瘤的放化疗具有增敏作用，因此，深入研究自噬在肿瘤治疗方面的作用对完善肿瘤综合治疗方案，提高病人生存时间及质量具有重要意义。甲状腺癌是最常见的内分泌系统恶性肿瘤，其中超过90%为分化型甲状腺癌，主要包括乳头型和滤泡型甲状腺癌，而未分化型甲状腺癌(AnaplasticThyroid

3、Carcinoma,ATC)占所有甲状腺肿瘤不到1%的比例，ATC可以从正常滤泡细胞转化或从已分化甲状腺肿瘤去分化而成。国内外多项研究证实自噬在甲状腺癌的发病机制中具有重要作用，自噬同时也参与甲状腺癌细胞放、化疗反应。另外，有研究表明PI3K/AKT信号通路与人类肿瘤的发生发展密切相关，在甲状腺肿瘤细胞恶性增殖、转移以及拮抗放化疗反应中均发挥重要作用。甲状腺未分化癌是甲状腺肿瘤中恶性程度最高的一种，虽然发病率低，但病情进展迅速，生存率十分低下。目前，甲状腺未分化癌主要采取以手术切除结合放疗、化疗的综合治疗,但治疗效果并不理想。因此，优化甲状腺未分化癌综合治疗方案、改

4、善其预后已引起相关研究人员的高度重视。PI3K-AKT-mTOR信号通路对甲状腺肿瘤生存、增殖、自噬、血管形成以及迁移方面发挥重要作用，研究发现PI3KCA基因在甲状腺未分化癌中存在异常扩增及突变，LY294002作为一类能够阻断PI3K信号通路的蛋白激酶抑制剂，具有特异性抑制PI3K的作用，通过抑制自噬相关PI3K-AKT-mTOR信号通路，能够抑制甲状腺未分化癌的发生、发展，并提高放化疗效果，对甲状腺未分化癌的治疗及预后具有重要意义。本研究探讨了自噬在甲状腺未分化癌发病机制及放化疗增敏中的作用，结果发现在甲状腺未分化癌中通过沉默PI3KCA及使用特异性蛋白激酶抑

5、制剂LY294002能够抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路进而增加自噬，提高甲状腺未分化癌对放化疗的敏感性，进而为优化甲状腺未分化癌综合治疗方案、改善预后提供一定的理论基础，有助于发现甲状腺未分化癌临床基因诊治的分子新靶标。中文摘要自噬对甲状腺未分化癌发病机制及放化疗增敏作用的研究自噬是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡，与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物的过程，从而维持细胞内稳态。当细胞面对缺氧、饥饿、电离辐射、化学药物等其他外界刺激时，就会诱导自噬发生，进而激活自噬相关信号通路。研究报道甲状腺肿瘤细胞在应激状态下（如：电离辐射或化

6、学药物等）能够触发自噬，而自噬相关PI3K-AKT-mTOR信号通路的异常表达在分化型甲状腺癌发病过程中发挥着重要作用，但该信号通路在甲状腺未分化癌中致病机制尚不十分清楚。研究发现甲状腺未分化癌中存在PI3KCA异常扩增与突变，针对该通路抑制剂的靶向治疗很可能成为甲状腺未分化癌的新兴治疗策略。PI3K信号通路抑制剂联合放化疗治疗多种恶性肿瘤的研究已成为当下报道焦点，但在甲状腺未分化癌中的相关研究并不多。因此本实验通过研究自噬对甲状腺未分化癌发病机制及放化疗增敏作用，为PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制剂联合放化疗治疗甲状腺未分化癌加深理论认识，并为全面完善甲状腺

7、未分化癌的治疗策略开辟新的思路。目的：探讨自噬对甲状腺未分化癌发病机制及放化疗增敏作用的影响，研究甲状腺未分化癌放化疗联合自噬抑制剂对肿瘤细胞的毒性作用。方法：（1）应用荧光显微镜检测甲状腺未分化癌8505c细胞PI3KCA基因的沉默模型转染效果；（2）应用蛋白免疫印迹法检测PI3K-AKT-mTOR信号通路蛋白水平变化；（3）应用细胞增殖CCK-8实验检测甲状腺未分化癌细胞8505c增殖活性；（4）应用MDC荧光法检测甲状腺未分化癌细胞8505c自噬情况；（5）应用SPSS19.0软件分析数据，以P<0.05差异具有统计学意义。结果：（1）构建甲状腺未分化癌细