胚胎干细胞定向诱导的多巴胺能神经元及其对食蟹猴的移植研究

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1、分类号密级公开编号責弟擘硕士研究營像於式题目胚胎干细胞定向诱导的多巴胺能神经元及其对食蟹猴的移植研究学院（所、中心）生命科学学院专业名称遗传学研究生姓名李燕皎学号导师姓名俞海菁职称副教授二零一五年五月分类号密级公开编号碛士呵究嗲像讼式题目胚胎干细胞定向诱导的多巴胺能神经元及其对食蟹猴的移植研究学院（所、中心）生命科学学院专业名称遺传学研究生姓名李燕皎学号导师姓名俞海菁职称副教授二零一五年五月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包

2、含其他人或集体已经发表或撰写过的研宄成果，对本文的研究做出贡献的集体和个人均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宂生签名：級日期：純论文使用和授权说明本人完全了解云南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文和论文电子版；允许论文被查阅或借阅学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密的论文在解密后应遵循此规定研宄生签名：爲政导师签名期：本人及导师同意将学位论文提交至清华大学“中国学术期刊（光盘版）电子杂志社”进行电子和网络出版，并编入

3、丨系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。研究生签名燕政导醒名：期：胚胎干细胞定向诱导的多巴胺能神紹及其对食蟹猴的移植研宄目录賺摘要—、帕金森氏病和目前的治疗方法帕金森氏病的临床症状和病因帕金森病的治疗方法和进展二、干细胞诱导为多巴胺能神经元的研宄多巴胺能神经元的功能和分类中脑多巴胺能神经元在体内的发育和各阶段转录因子表达第二材料与方法一、人胚胎干细胞的培养和鉴定以及细胞的悬浮培养饲养层细胞的准备人胚胎干细胞的培养人胚胎干细胞的悬浮培养人胚胎干细

4、胞的鉴定试验材料和试剂配制二、神经千细胞的诱导贴壁方法诱导胚胎干细胞分化为神经干细胞悬浮方法诱导胚胎干细胞分化为神经球神经干细胞的鉴定和不同培养体系的比较试验材料和试剂配制三、多巴胺能神经细胞的诱导神经干细胞启动时间点的选择和鉴定贴壁来源的神经干细胞的分化神经球来源的神经干细胞的分化多巴胺能神经前体细胞的鉴定多巴胺能神经细胞的自发成熟和鉴定胚胎干细胞定向诱导的多巴胺能神经元及其对食蟹猴的移植研宄试剂配制四、诱导多巴胺能细胞的移植移植细胞的准备动物脑部定位和手术组织取材和免疫组化的鉴定试验材料和试剂配制第三结果樹论一、

5、人胚胎干细胞的培养和鉴定以及细胞的悬浮培养贴壁生长形态观察干细胞球多能性基因检测二、神经干细胞的诱导三、多巴胺能神经细胞的诱导神经干细胞启动时间点的选择多巴胺能神经前体细胞的分化效率诱导的多巴胺能神经细胞自发成熟四、诱导多巴胺能细胞的移植第章展望致谢参考文献胚胎干细胞定向诱导的多巴胺能神经元及其对食蟹猴的移植研宄摘要帕金森病是由中脑黑质致密部多巴胺神经元退化、降解造成的神经退行性疾病。它导致肌肉僵硬、震颤、运动迟缓，损害患者的运动、语言和其他能力。在帕金森病患者的黑质中，多巴胺能神经元大量病变降解，使通过该回路作用于

6、纹状体的多巴胺明显缺乏，其低于阈值时就会导致多种运动障碍症状的出现。因为多巴胺能神经元属于神经终末细胞，几乎没有增殖能力，无法自我修复补充，因此，传统的药物和手术疗法都对这类疾病束手无策。年，等首次将周龄流产胎儿的中脑组织移植到帕金森病患者的壳核中，得了一定的治疗疗效，开辟了细胞移植疗法的新天地。在体外将胚胎干细胞定向诱导为多巴胺能神经元，移植替代体内退化神经元的治疗方案被认为是最具希望的帕金森病治疗方式之一。在本论文中，采用阶段诱导法，先将人胚胎干细胞（快速转化为均一完全的特定神经干细胞球，然后在不同的时间点添加诱

7、导因子，例如，、和。通过模拟体内神经发育，激活相关信号通路，促使其进入中脑多巴胺能神经元细胞分化命运，使其自发成熟，高效诱导为中脑多巴胺能神经元。诱导得到的多巴胺能神经元前体细胞，在向食蟹猴体内移植一个月后，可观察到诱导的细胞在体内分化成熟为多巴胺细胞。该诱导方法，不但提高了胚胎干细胞来源的多巴胺能神经元前体细胞的分化纯度，也通过悬浮培养，实现了神经前体细胞的大量扩增，可以提供大量的种子细胞。因此，该分化体系的建立，为以细胞移植为基础的帕金森病的治疗提供了重要基础。关键词：人胚胎干细胞；多巴胺分化；中脑多巴胺能神经元

8、；食蟹猴；细胞移植胚胎干细胞定向诱导的多巴胺能神经元及其对食蟹猴的移植研究胚胎干细胞定向诱导的多巴胺能神经元及其对食蟹猴的移植研宄，胚胎干细胞定向诱导的多巴胺能神经元及其对食蟹猴的移植研究第一章前言—、帕金森氏病和目前的治疗方法帕金森氏病的临床症状和病因帕金森综合症又被称为震颤麻瘦症，是最常见的神经退行性疾病之一。年，该疾病导致了，死亡，而年报