秋刀鱼蛋白抗氧化肽的分离纯化及其抗疲劳功效研究

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1、硕士学位论文秋刀鱼蛋白抗氧化肽的分离纯化及其抗疲劳功效研运作者姓名刘丹学科专业食品科学导指教师赵强忠教授所在学院轻工与食品学院论文提交E1期2015年4月StudyonthePurificationofAntioxidantPeptidefromPacificSauryProteinanditsAntifatigueActivitiesADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：LiuDanSupervisor：Prof.ZhaoQiangzhongSouthChinaUniversityof

2、TechnologyGuangzhou,China分类号：TS201.2学校代号：10561学号：201220121852华南理工大学硕士学位论文秋刀鱼蛋白抗氧化肽的分离纯化及其抗疲劳功效研究国家“十二五”科技支撑计划项目（NO.2012BAD33B03）广东省公益研究与能力建议项目（NO.2014B020204001）广东省战略性新兴产业核心技术攻关项目（NO.2012A020800002）作者姓名：刘丹指导教师姓名、职称：赵强忠教授申请学位级别：工学硕士工程领域名称：食品科学研究方向：食品生物技术论文提交日期：2015年4月25日论文答辩日期：20

3、15年6月8日学位授予单位：华南理工大学学位授予日期：2015年7月2日答辩委员会成员：主席：崔春教授委员：赵谋明教授、赵强忠教授、孙为正副研究员、赵海锋副研究员华南理工大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研宄所取得的研宄成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，、本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：如日期：Vij年月，日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使

4、用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华南理工大学。学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅（除在保密期内的保密论文外）；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。本学位论文属于：□保密，在____年解密后适用本授权书。<不保密,同意在校园网上发布，供校内师生和与学校有共享协议的单位浏览；同意将本人学位论文提交中国学术期刊(光盘版)电子杂志社全文出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，传播学位

5、论文的全部或部分内容。(请在以上相应方框内打“V”）日期：>〇

6、了乂日期川叫摘要本论文以蛋白含量丰富的秋刀鱼为原料，通过可控酶解技术制备抗氧化肽，利用体外化学模型和体内动物模型综合评价了秋刀鱼多肽的抗氧化活性，在此基础上利用动物模型评价其抗疲劳功效。然后采用多种分离技术对秋刀鱼多肽进行分离纯化，并采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）联用电喷雾质谱（ESI-MS/MS）对目标肽段进行一级氨基酸序列的鉴定，最后研究了秋刀鱼多肽的在加工储藏过程中的抗氧化活性，并研究了抗疲劳肽功能性饮料的配方。秋刀鱼的蛋白含量为18.18%，鱼肉的氨基酸含量丰富，组成合理，

7、富含必需氨基酸、呈味氨基酸、抗氧化活性氨基酸以及支链氨基酸等多种具有营养价值的氨基酸可用于蛋白酶解生产活性多肽。采用食品级风味蛋白酶、中性蛋白酶、Alcalase、胰酶和木瓜蛋白酶水解秋刀鱼蛋白，以还原力为指标，确定了胰酶为秋刀鱼蛋白制备抗氧化肽的最适酶。在此基础上，分析了加酶量、水料比和酶解时间对胰酶酶解秋刀鱼的影响，并利用响应面对酶解条件进行优化，结果表明，蛋白回收率和氧化自由基吸收能力（ORAC值）达到最优的酶解条件为加酶量1085U/g蛋白，水料比3:1，酶解时间8h，pH8，酶解温度50°C，此时蛋白质利用率77.16%，ORAC值为877.

8、92μmolTrolox/g。采用3种体外化学模型和小鼠实验综合评价秋刀鱼多肽的抗氧化活性。体外抗氧化活性结果表明秋刀鱼多肽的DPPH•清除能力是相同蛋白浓度的GSH的0.5倍；当PSPHs－的蛋白浓度分别是GSH蛋白浓度的15倍、6倍时，两者O2•清除能力和还原力相等。体内抗氧化活性结果表明PSPHs能使小鼠体内的抗氧化酶系超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活力比空白组分别提高4.97%-15.11%和20.89%-34.74%，而谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）相对空白组却并无显著提高。综上可表明秋刀鱼多肽具有一定的体外和体内抗氧化

9、活性。.与空白组相比，秋刀鱼多肽可延长小鼠的死亡游泳时间达8.67%-34.69%；能延缓或减