猪流产衣原体pmp18n-rvcg疫苗的构建、小鼠免疫评价和机制研究

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1、分类号：单位代码：密级学号：播犬令博士学位论文猪流产衣原体疫苗的构建、小鼠免疫评价和机制研究研究生潘青指导教师何诚教授合作指导教师教技申请学位门类级别农学博士专业名预防兽■医学研究方兽民生物工程所在学动物医学院年月分类号：单位代码：密级：学号：博士学位论文猪流产衣原体疫苗的构建、小鼠免疫评价和机制研究研究生潘青指导教师何诚教授合作指导教师教授申请学位门类级别农学博士专业名预防兽医学研宄方兽医生物工程所在学动物医学院年月ChinaAgriculturalUniversityDoctor'sDessertationConstructionandcomparativeeval

2、uationofChlamydiaabortussubunitcandidatevaccinerVCG-Pmpl8NinamousemodelandimmunemechanismofDCpulsedwithPmpl8NGraduate:QingPanSupervisor:ChengHe(Professor)Co-supervisor:EkoFrancis(Professor)Degree:DoctorMajor:PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty:VeterinaryBioengineerCollege:CollegeofVete

3、rinaryMedicineJune,2015本研宄受到国家自然科学基金（项目编号：的资助和美国基金项目项目编号：的资助独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借

4、阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）导师签名时间‘曰摘要流产衣原体、―是一种专性胞内菌，为革兰染色阴性，能够引起山羊、绵羊、牛、猪、马等的衣原体病，导致动物流产，给我国养殖业带来巨大的经济损失。同时，流产衣原体能够感染怀孕妇女，导致怀孕妇女流产，这给人类公共卫生构成了巨大威胁。目前，商品化疫苗只有基于温度敏感菌株菌株发展而来的弱毒活疫苗，该疫苗被用于预防山羊和绵羊感染导致的流产，起到了重要的作用，但是该疫苗的保护效果并不完全，并且弱毒疫

5、苗存在毒力返强的潜在危险，因此，开发安全有效的新型亚单位疫苗是十分必要的。蛋白是多型外膜蛋白家族的一个成员，该蛋白端外露，端位于胞内，属于型分泌系统，具有很高的免疫原性和诊断价值。前期研宄已经利用蛋白建立的间接方法检测临床血清样品，证明其具有很高的特异性和敏感性，本研宄重点在于对蛋白端的免疫原性进行系统的评价，构建种不同组方的疫苗，对其免疫效果进行系统的评价，并且对蛋白体外刺细胞的免疫应答机理做了进一步研究，为流产衣原体新型疫苗的开发及免疫机理研宄奠基础本研究主要实醃如下：的构建：基因克隆到质粒中之后电转到霍乱弧菌之前已转化裂解质粒中，诱导表达和裂解，制备冻干粉，两批共

6、计获得冻干粉并且进行鉴定，结果证明载体能够很好的递呈蛋白抗原，蛋白在中能够很好的表达。不同组方疫苗的免疫效果评价：利用小鼠模型，对亚单位疫苗、霍乱弧菌载体疫苗、以及三种不同形式疫苗的免疫效果进行评价，结果发现载体疫苗不仅可以刺激机体的体液免疫、细胞免疫、粘膜免疫，产生很好的免疫应答，而且本身具有免疫佐剂的功能，效果比效果之和更好；额外添加免疫佐剂，能够递呈抗原的能力，起到更好的免疫保护效果。同时，疫苗生产和运输过程中不需要额夕卜的冷藏条件，如上本身的佐剂特性不需要添加额外佐剂，大大降低了疫苗的生产成本，为该疫苗在兽医领域的大范围临床应用提供了可能性。免疫机理的初步研宂：

7、利用体外刺激细胞，发现能够促进细胞成熟，上调表达、、、分子，同时高表达细胞因子、、、增强细胞的抗原递呈功能，促进细胞向型免疫应答分化，型免疫应答是衣原体免疫所必须的，这与动物验丁细胞高表达相一致；并且通过进一步研宄发现，通过信号通路以及炎症体的激活活化细胞，最终导致细胞表型的变化以及递呈功能的增强。关键词：流产衣原体，，霍乱弧菌，菌影疫苗，免疫机理AbstractChlamydiaabortus(C.abortus)isanobligateintracellulargram-negativebacterium,andamajorcause