猪丹毒杆菌安徽分离株的生物学特性及spaa蛋白免疫原性研究

《猪丹毒杆菌安徽分离株的生物学特性及spaa蛋白免疫原性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、＋２分类号：Ｓ８５５１：１的６４．单位代码密级：学号：１２７２０２巧会敗怎必少、等学位论文猪丹毒杆菌安徽分离株的生物学特性及ＳｐａＡ蜜白免疫原性研究ＴｈｅＳｔｕｄｏｎＢｉｏｌｏｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄＩｒｍｍｉｎｏｅｎｉｃｉｔｏｆｙｇｇｙＳａＡＰｒｏｔｅｉｎｏｆ怎叩別女ｅ／ＷＡＷｘ口班相ｅＩｓｏｌａｔｅｄ任ｏｍｐＡｎｈｕｉ研究生：－陆萍指导教师：李郁教授申请学位口类级别：农举硕击专业名称：预防兽医学研究方向：家畜传染病学

2、．所在学院：动物科巧学院答辩委员会主席：Ｖ＜二零一五年六月AnhuiAgriculturalUniversityDissertationfortheMasterateTheStudyonBiologicalCharacteristicsandImmunogenicityofSpaAProteinofErysipelothrixrhusiopathiaeIsolatedfromAnhuiCandidate:LuPingSupervisor:Prof.LiyuAcademicDegreeappliedfor:MasterofAgricu

3、ltureSpeciality:PreventiveVeterinaryScienceResearchfield:InfectiousdiseasesofdomesticanimalsCollege:AnimalScienceandTechnologyCollegeJune,2015II独创性声巧本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徹农业大学或其它教育化构的学位或证书而使用过的材料一同工作的同志对本研

4、巧所做的任何贡献均已在论文中作了明。与我确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年＾月Ｄ日辑哥／关于论文使用授权的说明本人完全了解安徹农业大学有关保留、使巧学位论文的规定－即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盎，允许论文被蒼阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存＾、、汇编学位论文。同意安徵农业大学可［＾用不同方式在不同媒体上发表传播学位论文的全部或部分内容。保密的学位论文在解密后应遵守此协化）（研究生签名：时间：ｏ日祥句式ｆｆ年＾月一：第导师签名时间；去年月／０曰ＩＩＩ摘要猪丹毒（Swineery

5、sipelas）是由猪丹毒杆菌（Erysipelothrixrhusiopathiae）引起的一种人畜共患传染病，已有二十多年极少见到，但近几年，无论国内、国外猪丹毒的发生都有明显的增多。SpaA蛋白是猪丹毒杆菌的主要免疫保护性抗原，而且该抗原几乎存在于所有毒力较强的猪丹毒杆菌中。本研究对分离自安徽省8个不同地区猪场的猪丹毒杆菌进行生物学特性研究，鉴定SpaA蛋白的免疫原性，确定其对小鼠的免疫保护性，为选择良好的亚单位疫苗候选单位提供参考，为猪丹毒的防控及猪丹毒新型疫苗的研究提供理论依据。通过形态学及培养特性观察、生化试验、PCR方法对菌株进行鉴定，并进行药

6、物敏感性试验及商品化猪丹毒G4T10株弱毒疫苗免疫保护实验。利用PCR扩增猪丹毒杆菌SpaA基因，连接pGEX-6P-1载体，将鉴定为阳性的重组载体转化至大肠杆菌中，加入诱导剂常温诱导表达，获得的蛋白经过聚丙烯酰氨凝胶电泳和Western-blotting分析鉴定；重组蛋白免疫小鼠，检测血清中IgG抗体和Th1/Th2细胞因子含量；临床分离自败血型病例及疹块型病例猪丹毒杆菌攻击免疫后小鼠，测定其免疫保护性，采集小鼠脏器制作病理组织切片，观察病理组织变化。结果显示：共分离到29株猪丹毒杆菌，源自8个地区的猪丹毒杆菌分离菌具有较一致的形态特征和相似的生化特性。2

7、9株猪丹毒杆菌对氨苄西林、头孢曲松敏感率均达100%，其次是青霉素93%、红霉素89.7%和头孢噻肟75.9%，对其他13种药物则表现不同程度的耐药性。8株不同地区猪丹毒杆菌分离菌的LD250在14.3-2.36×10CFU/mL之间，显示分离菌对小鼠均具有较强的致病力。商品化猪丹毒G4T10株弱毒疫苗2次颈部皮下免疫小鼠后，分别用剂量为100LD50的8株猪丹毒杆菌分离菌腹腔攻毒小鼠，免疫保护率为100%。猪丹毒杆菌SpaA基因在大肠杆菌中实现表达，获得大小为75kD的目的蛋白，能够与猪丹毒杆菌阳性血清反应；重组蛋白能诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体，同时

8、诱导Th1、Th2细胞因子水平显著升高，SpaA重组