牛支原体的分离鉴定及对大环内酯类抗生素耐药机制研究

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1、分类号：S859.7单位代码：10193密级：公开学号：2012603硕士学位论文牛支原体的分离鉴定及对大环内酯类抗生素耐药机制研究SeparationandIdentificationofMycoplasmabovisandResistanceMechanismtoMacrolides作者姓名：高铎学位类别：农学硕士专业名称：基础兽医研究方向：兽医药理与毒理学指导教师：马红霞所在学院：动物科学技术学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以

2、标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：2015年5月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农

3、业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要牛支原体（Mycoplasmabovis,M.bovis）是引起肉牛和

4、奶牛多种疾病的重要病原体，其中以引发呼吸系统疾病（Bovinerespiratorydisease，BRD）最为常见。2008年，我国首次从患肺炎的犊牛肺脏中分离到M.bovis。由于M.bovis不具有细胞壁，因此β-内酰胺类抗生素对其治疗无效，且近年来抗生素的广泛及不合理使用，使M.bovis逐渐出现了耐药株，其产生的耐药性不仅给控制和治疗该病带来困难，而且加剧了抗生素在牛体内的残留，严重的危害动物食品安全。对吉林省售出至他省后患BRD的病牛进行病料采集，经过对分离菌进行纯化、形态观察及分子生物学鉴定共获得32株M.bo

5、vis。采用改良的微量二倍稀释法对临床治疗M.bovis有效的9种抗菌药物进行抗菌药物敏感性实验，结果显示，所分离的32株M.bovis有13株对红霉素、阿奇霉素、吉他霉素、泰乐菌素耐药（MIC≥64μg/mL），对克林霉素耐药（MIC≥4μg/mL），占40.63%，且这13株M.bovis同时对泰乐菌素、克林霉素和十四元环、十五元环、十六元环大环内酯类抗生素耐药，有1株对氟苯尼考耐药（MIC≥8μg/mL）；部分菌株对红霉素、泰乐菌素、环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考中度敏感；所有菌株均对多西环素敏感，多数菌株对恩诺沙星较敏

6、感。对M.bovis上与大环内酯类抗生素耐药相关的靶位包括23SrRNA结构域Ⅱ，23SrRNA结构Ⅴ，L4、L22核糖体蛋白的基因序列进行比对分析，发现13株对大环内酯类药物高度耐药的M.bovis，其23SrRNArrnA2058位的碱基都发生了A—G的突变，23SrRNA结构域Ⅱ、核糖体蛋白L4、L22均未发现其有耐药相关的基因突变或氨基酸置换。对编码甲基化酶的ermA、ermB、ermC基因及大环内酯类钝化酶基因mphA、mphC基因和调控药物主动外排系统的mefA、mefE、msrA、msrB基因进行检测，所分离3

7、2株M.bovis上均未检测到上述基因。采用微量稀释法检测敏感株Mb9、Mb10及耐药株Mb1和Mb12加入CCCP、VP和SOV后MIC值的变化，对其体内存在的药物主动外排系统进行初步确证，发现应用EPI前后抗菌药物对M.bovisMIC值无明显变化，提示M.bovis体内可能不存在对大环内酯类药物的主动外排系统，但还有待于进一步确证。关键词：牛支原体；大环内酯类类抗生素；耐药靶位突变；外排泵IABSTRACTMycoplasmabovisisanimportantpathogencausesvarityofclinica

8、ldiseasesonbeefandcow,amongthem,thebovinerespiratorydiseaseisthemostcommondisease.In2008，M.boviswasisolatedfromlungofcalfwithpneumoniainourcountr