肺炎支原体的感染、耐药情况及其对阿奇霉素耐药机制的研究

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1、中山大学硕士学位论文肺炎支原体的感染、耐药情况及其对阿奇霉素耐药机制的研究肺炎支原体的感染、耐药情况及其对阿奇霉素耐药机制的研究专业：内科学硕士生：潘明安导师：张天托教授中文摘要肺炎支原体(Mp)是儿童和青少年社区获得性呼吸道感染的常见病原体之一，支原体作为原核生物界中的最小微生物，结构中无细胞壁，因此对作用于细胞壁的抗生素如青霉素类、头孢类抗生素天然耐药，而对影响细菌蛋白质合成的抗生素如四环素类、大环内酯类、喹诺酮类等敏感。由于药物本身较大的不良反应以及儿童处于生长发育期等原因，四环素类、喹诺酮类药物的使用受到一定的限制，目前临床治疗应用最广泛的药物为大环内酯类，如

2、阿奇霉素。国内外检测Mp方法很多，目前主要包括经典的培养法、血清学抗体检测方法和核酸检测方法等，但尚无令人满意的、能准确、快速、经济而又简便的检测方法对Mp感染进行诊断。因此，寻求更加适合临床检测要求的诊断方法显得尤为重要。随着抗生素的广泛使用，本世纪初欧美和日本先后发现Mp对大环内酯类抗生素的耐药现象，目前国内外也都已经分离出对大环内酯类抗生素耐药的菌株，该现象导致Mp感染的病人发病时间增加，治疗效果差、治疗时间延长，甚至治疗无效。相对其他病原体而言，目前国内外对Mp耐药现象的研究较少，主要原因是肺炎支原体分离培养困难，现有文献的报道主要集中在Mp对红霉素的耐药情况

3、研究，而对临床治疗普遍使用的阿奇霉素以及喹诺酮类抗生素耐药现状的研究国内外报道都不多，本课题将进一步加强和完善该方面的研究，以便较全面地了解肺炎支原体耐药的情况，为临床诊断和治疗提供依据。中山大学硕士学位论文肺炎支原体的感染、耐药情况及其对阿奇霉素耐药机制的研究目前的研究显示，Mp对大环内酯类抗生素的耐药机制主要是：1．靶位改变：基因突变或甲基化；2．主动外排；3．药物灭活。其中结合位点的基因突变是目前国内外的研究热点，也是引起Mp耐药的主要机制之一。大环内酯类抗生素作用区域在基因23SrRNAII区和V区，点突变会导致大环内酯类抗生素与之亲和力下降而产生耐药，这在M

4、p对红霉素的耐药机制中已经得到证实，文献报道己发现的突变位点包括23SrRNAV区基因2058位、2059位(大肠埃希菌编码)等，但15元环与14元环大环内酯类抗生素结合位点有所不同，至今为止国内尚无Mp对阿奇霉素耐药机制的研究报道。核糖体蛋白L4、L22是核糖体大亚基早期组装过程中的蛋白质，可引起大环内酯类抗生素进入或者流出改变，rplD基因(核糖体蛋白L4基因)、rplV基因(核糖体蛋白L22基因)的点突变可能引起编码氨基酸的变异，从而影响大环内酯类抗生素的作用。据此，国内外文献报道rplD基因和rplV基因的点突变可能与大环内酯类抗生素耐药相关，但尚无肯定性结论

5、。因此检测上述基因的点突变可以初步研究Mp对阿奇霉素的耐药机制。本课题研究目的在于通过不同的检测方法，调查我院社区获得性呼吸道感染病人中Mp感染的情况，并且寻求更加适合临床检测要求的诊断方法，为肺炎支原体感染的临床诊断提供依据。通过分离培养临床的Mp菌株，了解我院Mp对抗生素耐药情况，并结合体外诱导耐药的研究，检测阿奇霉素对Mp作用靶位的基因突变情况，从而初步阐明Mp对阿奇霉素的耐药机制，为临床抗生素合理选择和应用提供理论指导，并对抗生素的改造和使用提供一定的理论依据。对象和方法：1、收集2007年8月至2008年3月我院呼吸科和儿科的住院、门诊社区获得性呼吸道感染病

6、人(住院病人入院天数在2天以内)的咽拭子、痰标本，床边接种到肺炎支原体液体培养基中，置于37"C、5％CO：环境培养5天，由红变为黄并且澄清判定为阳性，再转入固体培养基培养进行鉴定。采用CCU法测定菌株浓度，微量肉汤稀释法进行体外药物敏感性测定，选用药物为红霉素、阿奇霉素、环丙沙星、洛美沙星、氯霉素。2、2007年3月至2008年2月一年中，从呼吸科、传染科、外科、儿科的住院II中山大学硕士学位论文肺炎支原体的感染、耐药情况及其对阿奇霉素耐药机制的研究和门诊的社区呼吸道感染病人(住院病人入院天数在2天以内)抽取的血清作为临床检测标本，应用Serodia-MycoII试

7、剂盒检测Mp-IgM抗体，以单份血清抗体滴度≥1：320或者恢复期血清抗体升高4倍判定为肺炎支原体感染。对年龄和不同季节进行分组，采用卡方检验的方法，对各年龄段和不同季节阳性率进行统计学分析。3、收集2007年8月至2008年3月我院呼吸科和儿科的住院、门诊社区获得性呼吸道感染病人(住院病人入院天数在2天以内)的咽拭子、痰标本，床边接种到肺炎支原体液体培养基中，置于37℃、5％C0：环境培养24h，进行PCR检测，临床标本继续培养4天，观察培养结果。对病人年龄进行分组，采用卡方检验的方法，对各年龄段阳性率进行统计学分析。4、收集2007年8月至200