牛乳头瘤病毒13型海南株的全基因组克隆及e5蛋白的真核表达

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1、涤畚大營硕士学位论文题目：牛乳头瘤病毒型海南株的全基因组克隆及蛋白的真核表达作者；指导教师：王凤阳教授专业：动物遗传育种与繁殖时间：二〇一五年五月CloningoftheWholeGenomeofBovinePapillomavirus13HainanStrainandEukaryoticExpressionofE5ProteinAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAgronomy.ByShiQiaoyunSupervisor:

2、WangFeng-yangMajor:AnimalGenetics,BreedingandReproductionScienceSubmittedtime:May,2015'海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容并，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。曰期：月曰论文作者签名：彡学位论文纖使用授权说明本人完

3、全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子钣允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟髙校用户提供文献传递服务和交换服务本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：袭曰期年月曰本人已经认真阅读高校学位论文全文数据库发布章程”同意将本人的学位论文提交高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：

4、半年：二年发布。摘要牛乳头状瘤是由牛乳头瘤病毒引起肿瘤发生的慢性增生性疾病。本病无明显的季节性和地区性，为奶牛最常见的肿瘤疾病，多发于体表、粘膜及某些器官。牛乳头状瘤易复发，进而发展为癌症，导致动物死亡，最终造成肉类、奶业和皮革类行业严重的经济损失，而目前尚无有效疫苗来预防牛乳头瘤病的发生。蛋白是的主要肿瘤蛋白，通过干扰细胞生长抑制和细胞周期调控来发挥作用，与生长因子受体相互作用，激活细胞增殖。蛋白参与细胞转化，且在病毒感染初始以及整个过程中都有表达，改变正常细胞对生长因子的应答，阻碍细胞表面主要组织相容性复合物的表达。鉴于这种种作用

5、，具有被用来研发疫苗的重大意义。因此，对于相关功能蛋白的研究可为今后疫苗的开发奠定基础。另外，随着人类性病中尖锐湿统发病率的急速上升和宫颈癌、肛门癌等疾病的增多，感染越来越引起人们的关注。可以作为研究感染，与宿主以及与环境因素之间的相互作用关系的体内模型，能够为人乳头瘤病的检测与治疗提供理论依据。本实验克隆了牛乳头瘤病毒型海南株的全基因组，并构建重组真核表达载体，在细胞中表达。利用荧光观察、检测和鉴定来验证重组蛋白的表达，为牛乳头瘤病的预防性和治疗性疫苗的研发奠定了前期基础。以下为本实验的研究方法和主要结果：牛乳头瘤病毒基因分型与全基

6、因组的克隆本研究以来自海口某农场黄牛的牛乳头瘤病料组织为材料，提取病毒。根据乳头瘤病毒衣壳蛋白基因的保守序列设计的简并引物进行检测，经过测序和序列比对对该进行了基因分型。结果显示，患病黄牛所感染的类型为命名为。设计基因型特异性引物，通过扩增、测序、拼接、对比后获得全基因组序列。实验病毒株基因组全长，包括个开放阅读框分别为早期基因区、、、、、和晚期基因区、蛋白在细胞中的表达用扩增基因，以为真核表达载体构建重组表达质粒，转染进入细胞。进行荧雕麵察，赋细胞仪检测和鉴定。结果表明：本实验成功构建了重纟且真核表达质粒，可成功表达蛋白，为下一步稳

7、定表达的细胞系的构建做好初步准备，为蛋白的研究及相关疫苗的开发奠定基础。关键词：牛乳头瘤病毒；全基因组克隆；蛋白；真核表达AbstractBovinepapillomatosis(BP)isaninfectiousdiseasecausedbytheinfectionofbovinepapillomavirus(BPV),whichischaracterizedbychronicproliferativetumorsinthemucosaandsurface.Thisdiseaseisthecommonesttumoraldiseas

8、eincatle，，，，，，，，，、、、、、、、andE5proteinwasexpressed,whichlaythefoundationforthefunctionalinvestigationofE5.Keywor