重组人乳头瘤病毒hpv 11 e7蛋白的表达及其多克隆抗体的制备和鉴定

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1、重组人乳头瘤病毒HPV11E7蛋白的表达及其多克隆抗体的制备和鉴定⑧论文作者签名：毖指导教师签名：鞋论文评阅人1：吴黎明主任医师杭州市第一人民医院评阅人2：叶俊副主任医师浙江大学附属邵逸夫医院评阅人3：周强副主任医师浙江大学附属邵逸夫医院答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：答辩日期：2014年2月』IJlllIIlllllIIIIJlIIIIIJJlIIfY2559191浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他入已经发表或撰写过的研究成

2、果，也不包含为获得堑塑2坚堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：习膨签字日期：妒q年。L月卢矛日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙塑盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者张缈翩张斜签字日期：≯lq年文月义日签字日期：倒I妒年≯月访日浙江大学

3、硕士学位论文致谢首先，我要感谢我的导师程浩教授在学习和科研中给予我的悉心指导和谆谆教诲!导师给了我大师级的思想启迪，让我受益匪浅!在整个课题完成过程中，导师对我耐心指导，严格要求，并给我提供了优越的科研条件，使我的硕士课题得以顺利完成。不仅在学习和工作上，在生活上导师亦给了我长者般无微不至的关怀，感恩之情无以言表!导师精湛的医学技术、严谨的治学作风、诚信的处世风范以及严于律己的精神，是我一生的榜样，将永远激励我向前!我还要特别感谢浙江大学医学院附属邵逸夫医院皮肤科的各位老师，他们是朱可建老师、叶俊老师、岑建萍老师、周强老师、虞海燕老师、张新华老师、金纳老师等以及浙江大学医

4、学院附属邵逸夫医院中心实验室的姜少杰师兄等，感谢他们在学习、工作和生活上给予我的帮助。感谢陈贤祯、吴霞、何剑萍师姐及王永东师兄在临床技能和实验技能方面的指导，以及和我一起充实而愉快地度过研究生生活的同学们，正是由于他们的帮助和支持，我才能克服种种困难，直至学业顺利完成。特别感谢我的父母和一直默默支持我的朋友，是他们的关心和支持让我不断取得进步。在未来的日子里，我将更加努力地学习和工作，感谢曾经关心和帮助过我的领导、老师和朋友!对你们的无私帮助表示衷心的感谢12014年2月18日丁杨于邵逸夫医院浙江大学硕士学位论文中文摘要重组人乳头瘤病毒HPV11E7蛋白的表达及其多克隆抗

5、体的制备和鉴定浙江大学医学院2011级硕士研究生导师中文摘要皮肤病与性病学丁杨程浩目的尖锐湿疣(condyiomataacuminme，CA)是最常见的性传播疾病之一，有报道称性活跃人群一生中感染CA的风险率高达80％⋯。该病常以亚临床感染形式存在，它具有传染性强、难治、复发率高等的特点【21，给患者造成了巨大的健康和经济负担。人乳头瘤病毒(humanpapiliomavirus，HPV)11型是引起CA最常见的HPV亚型之一。HPV早期基因E7及其表达产物在病毒持续感染以及致癌机制中发挥重要作用，是目前研究治疗性疫苗主要的靶位点之一。但是目前尚无商业化HPVllE7蛋白

6、或抗体，且HPV感染的高度嗜上皮性和严格的种属特异性使得HPV体外培养和感染模型很难建立，在很大程度上限制了对其致病机制的研究。因此通过分子生物学方法获得大量HPVllE7蛋白及其多克隆抗体能为进一步研究HPVllE7蛋白的生物学功能和以HPVllE7蛋白为基础的治疗性疫苗奠定良好基础。本研究通过构建原核表达载体pGEX一4T2一HPVllE7，转化入大肠杆菌JMl09感受态细胞诱导产生大量可溶性蛋白GST．HPVllE7，纯化蛋白后进一步免疫新西兰兔获得抗HPVllE7多价兔抗血清。经纯化获得抗HPVllE7多克隆抗体IgG，进一步鉴定其效价及特异性，为临床及科研提供了

7、崭新的检测手段。方法U浙江大学硕士学位论文中文摘要一、重组HPVllE7原核及真核表达载体的构建与鉴定设计引物用于构建pGEX．4T2．HPVlIE原核表达载体，以HPv全病毒基因组质粒(HPVllpurifiedplasmidDNA)为模板，通过PCR扩增产物连接至pMD@18-TVector，经EcoRI和NotI酶切回收的DNA连接至pGEX．4T2Vector，经EcoRI和NotI双酶切鉴定，测序正确后将原核重组载体pGEX．4T2．HPVllE7转化至E．coliJMl09感受态细胞。设计引物用于构建pEGFP—C