人类乳头瘤病毒(hpv)的检测方法

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1、人类乳头瘤病毒（HPV）的检测方法　　　全网发布：2011-06-2321:23发表者：陈继明(访问人次：10778)　　摘要：人类乳头瘤病毒（HPV）与宫颈癌的发生和发展关系密切，HPV的检测已是宫颈癌早期筛查的一个重要方面。HPV的检测和分型对于了解宫颈癌病情变化、指导治疗、判断预后以及疫苗改进均具有十分重要的价值。本文将就HPV的检测方法的进展作一小结。　关键词：人乳头瘤病毒（HPV），宫颈癌，检测，疫苗常州市第一人民医院妇科陈继明　　　Abstract:Humanpapillomavir

2、us(HPV)isstronglycorrelatedwiththepathogenesisanddevelopmentofcervicalcancer,thetestingofHPVhasbeenanimportantaspectofearlyscreeningofcervicalcancer.ThetestingandclassificationofHPVisinvaluableforacknowledgingtheadvanceofthedisease,treatment,prognosi

3、sandtheimprovementofHPVvaccine.AsummarizationwillbemadeinthisarticleconcerningwiththeadvanceofthetestingmethodsofHPV.　　　Keywords:humanpapillomavirus(HPV),cervicalcancer,testingmethods,vaccine　　 　　　宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，占女性生殖器官恶性肿瘤的半数以上，严重威胁着妇女的健康。全世界每年大约有

4、4万人患病，中国新发病例约计13万，占目前已发现的所有女性肿瘤的6%，是仅次于乳腺癌而引起妇女癌症相关死亡的重要原因。宫颈癌的发病机理目前尚不清楚，但已有很多研究证明，99%的宫颈癌组织中可检出人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)[1-2]。目前，已经明确HPV感染为宫颈癌前病变和浸润性宫颈癌发生的必要条件[3-4]。大量研究资料表明，HPV与宫颈癌及癌前病变密切相关，高危型HPV(HRHPV)感染与宫颈癌关系最为密切[5]。随着病变程度的加重，HPV的检出率也逐渐增高

5、[6]。所以，许多专家提出将HPV的检测作为宫颈癌的一种筛查手段。目前，针对HPVDNA检测作为宫颈癌原始筛查方法以及与细胞学联合在筛查中的意义的研究报道较多[7-10]。本文将就HPV检测方法的相关内容进行小结，重点介绍目前应用最为广泛的PCR法和杂交捕获试验。　　由于HPV至今尚不能在体外培养，又无合适的实验动物，因而对其检测主要依赖于形态学方法和分子生物学技术。目前HPV检测方法主要有细胞学法，斑点印迹法，荧光原位杂交法，Southern杂交法，多聚合酶链反应(PCR)法和杂交捕获法等。细

6、胞学法敏感度和特异度较低；斑点印迹法具有放射性。目前较为公认的敏感度和特异度高的方法是捕获二代法；其它敏感度较高的方法有原位杂交，PCR法。但PCR法特异度很低，假阳性率较高；而核酶印迹原位杂交法复杂，不宜大规模临床使用。　　　1. 细胞形态学检测　宫颈HPV阳性细胞的特征性改变是出现了特异性挖空细胞。初期在表层出现，当不典型增生达2/3以上时，挖空细胞减少，此时表现为低分化鳞癌的形态特点。感染HPV16，18的宫颈上皮阳性为中层挖空细胞核出现了密集浓染的蓝紫色颗粒产物，从慢性宫颈炎→　　　CI

7、N→CaCｘ，HPV杂交信号渐强，由上皮表层到棘层，分布呈散在→簇状→弥漫状。　2. 免疫组织化学法　   用SP法染色测HPV16，18早期蛋E6单抗能有效证明感染组织中存在的E6蛋白，阳性标志为核内出现棕黄色颗粒。研究表明抗HPV16E6单抗可直接定位于宫颈癌组织，对宫颈癌有较好定向选择性，有可能作为人宫颈癌放射免疫显影诊断的载体。　　3. 基因扩增技术　3.1HPVDNA的PCR扩增评价HPV检测方法最关键的因素是检测灵敏度，以基因扩增为基础检测HPVDNA，是目前最灵敏的检测方法，可检测

8、出低水平的病毒感染，并且能够比较准确地对HPV感染状态进行分类，因此成为实验室和流行病学研究的理想工具。但是，由于基因扩增过程中污染造成的假阳性及技术成本高，目前不宜作为临床实验室HPV感染的常规检测。　　　3.2荧光定量PCR(FQ-PCR)技术 FQ-PCR是1995年由美国PerkinFlmer公司研制成功的一种新型核酸定量检测方法，该法将普通PCR的高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性有机结合，克服了传统PCR在许多方面的缺点和局限性。由于荧光探针的引入，而且被释放的荧光基