绿色荧光蛋白标记的乙肝病毒全基因组真核表达载体的构建与表达分析

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1、第二军医大学位论文Y897370崤绿色荧光蛋白标记的乙肝病毒全基因组真核表达载体的构建与表达分析C蚰st邝c“Onand既pressioⅡofhepatitisBvi邝sgenomeeul【aryOtjcexpressionVectorcarI了ingenhancedgreennuorescenceprote．IL研究生姓名：．黄洁指导教师姓名：杨勇骥教授胡以平教授导师组成员：訾晓渊博士第二军医大学数理教研室206年5月中文摘要乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBv)为一种嗜肝DNA病毒，因为其

2、感染的种属特异性组织特异性，对HBv研究多利用细胞模型和小动物模型。全基因组转基因小鼠血清和组织(尤其是肝组织)中有HBv病毒蛋白的表达和病毒的复制，在普通实验室进行全基因组转基因小鼠的培育和相关研究具有一定的危险性，且常规方法检测有代价较高、费时费力的限制。因此，建立一种全身组织可表达绿色荧光蛋白(GFP)的全基因组转基因小鼠，可以简化转基因小鼠的检测和培育，具有一定的实际应用价值。本研究采用基因重组技术，成功构建了含有双拷贝HBV全基因组DNA和￡GFP基因的真核表达载体pcxEGFP．HBV4打2．0，

3、载体DNA细胞转染和尾静脉液压注射的体外和体内研究证实GFP和HBV基因均能表达，表明pCxEGFP．HBv蒯r2．0可用于转基因小鼠的制备，且甜P可以作为HBv存在与否的报告基因。进一步用限制性内切酶将该载体线性化，采用经典显微注射法进行转基因小鼠的制备。[关键词]：乙型肝炎病毒，增强型绿色荧光蛋白，真核表达载体，动物模型，转基因小鼠AbstI麓ctH印atitisBvirIls(HBV)isamemberoftheHepadnav埘daefamily．OnecharaderisticpropenyofHB

4、Visthcjrh勘speciesaIldtissuespecjfjcjty。HBVresea玎chesjsalwaysbasedonccllcllltureandsmallanimalmodels．ThetraIlsgenicmiceharboring衄VcompletegenomicDNAconsistentlysupportsVirusgeneexpressionandreplication，speciaIlyinsenlmandliVer，ItisunsafetobreedaIlduseHBVtran

5、sgenicmiceinno姗allaboratory．ItalwaystakestimetoestimateHBVtransgenicmicebyconventionaltechnologyarduously．HBVtransgcnicmjcewiththeenhaIlced掣eenfluorescenceproteinexpressioninalltissuesshouldbepracticableandeff色ctiveinbreedingandestimation．IIlthisstudy，wehaV

6、econstrIIctedpCXEGFP-HBV口c加2．OeukaryoticexpressiOnvectorharboring2copiesofHBVgenomicDNAandEGFPgenebyreco珥bjnationDNAtechnique．TheresultsofL02transfectionandhydmdynamicinjectionsuggestedthatpCxEGFP-HBV口d}2．0couldexpressinVitroandinvivo．10kbDNAfra毋Ⅱents0fpCXE

7、GFP-HBVd西‘2．0wereusdedtogenerateHBVtmnsgenicmicewithEGFPreportergene．【Keywords】：HepatitisBvifus，EGFP，eukaryoticexpressjonvector’animalmodle，transgenicmice．中文摘要乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBv)为一种嗜肝DNA病毒，因为其感染的种属特异性组织特异性，对HBv研究多利用细胞模型和小动物模型。全基因组转基因小鼠血清和组织(尤其是肝组织)中

8、有HBv病毒蛋白的表达和病毒的复制，在普通实验室进行全基因组转基因小鼠的培育和相关研究具有一定的危险性，且常规方法检测有代价较高、费时费力的限制。因此，建立一种全身组织可表达绿色荧光蛋白(GFP)的全基因组转基因小鼠，可以简化转基因小鼠的检测和培育，具有一定的实际应用价值。本研究采用基因重组技术，成功构建了含有双拷贝HBV全基因组DNA和￡GFP基因的真核表达载体pcxEGFP．HBV4打2．0，载