牙鲆（paralichthys olivaceus）traf6基因和tak1基因的克隆及免疫应答研究

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1、ｍＯＣｈＡＮＩＭ＼（ＲＳＩＴＹＯｈＣＨＩＮＡ硕±学位论文ＭＡＳＴＥ民ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ牙妈（尸ａｒａ／／ｃ／；从於ｏ／ＺｖａｃｅｗＴＲＡＦ６基因和）论文题目；ＴＡＫ１基因的克隆及免疫应答研究ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｈａｒａｃ化ｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄＥｘｒｅｓｓｉｏｎｐＲｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆＴＲＡＦ６ａｎｄＴＡＫｌ化ＩｍｍｕｎｅＳｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｓｉｎＪａｐａｎｅｓｅＦｌｏｕｎｄｅｒ片／片於英文涵目：ｏＵｖａｃｅｕ

2、ｓ）作者：避莖指导巧师：张全启教授学位类别：全日制学术学位专业名称：海洋生物学Ｉ研究方向：讀洋逢接适传学Ｉ谨从此论文献给我敬爱的导师和擎爱的父母陈燕牙鲜（戶ａｒａ／／ｃ／７ｆ／？ｙｓｏＺ／Ｖｓｃｅ心ｓ）ＴＲＡＦ６基因和ＴＡＫ１基因的克隆及免疫应答研究学位论文答辩日期：２。化日指导教师签字；：答辩委员会成员签字藝心Ｕ义心户独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及

3、取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得或其他教育机构的学位或证书使用过的材料一同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作。与我了明确的说明并表示谢意。＊３学位论文作者签名：签字日期：年月日１学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意下事项；１、学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查巧和借阅。２

4、、学内容编入有关数据库进行检索校可将学位论文的全部或部分，可Ｗ＂采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学中＂国学术期刊（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研巧所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期０皮５月２：必１＆年ｒ月叫日签字曰期：２年？日牙Ｉｆ（尸加ＴＲＡＦ６基因和ＴＡＫｌ基因的克隆及免疫应答研究摘

5、要牙卽（尸ｗａ化加炒ｓｏ／ｆｖｆｌｃｅＭＪ）为冷温性底栖鱼类，是我国重要的经济鱼类。近年来，随着高密度集约化养殖规模的扩大，鱼类疾病的传染也日益严重，养殖场中鱼类大规模的死亡及其造成的重大经济损失给人工养殖提出了严峻挑战。因此，深入研巧牙鲜的抗病免疫机制，探寻増强养殖品种免疫力的途径和方法，培育牙巧抗病新品系，对于牙鲜养殖规模的扩大十分重要。Ｔｏｎ样受体（ＴＬＲｓ）可识别病原相关分子模式（ＰＡＭＰｓ），是模式识别受体（ＰＲＲｓ）家族中的成员，在先天性免疫反应中发挥着重要

6、的作用。ＴＬＲｓ识别，并结合相应的配体后，可激活细胞内的信号转导途径诱导促炎细胞因子的分泌和共刺激分子的表达，启动特异性免疫应答反应。ＴＲＡＦ６和ＴＡＫ１是Ｔｏｌｌ样受体信号通路中两个重要的接头蛋白，，可激活下游信号通路肩动固有免疫应答反应和特异性免疫应答反应。本研巧：克隆到了ＴＲＡＦ６基因和ＴＡＫ１基因的ｃＤＮＡ一全长，并对其蛋白序列、调控区域及表达模式进行了初步分析，为进步硏巧这两个基因在免疫反应中的作用机理提供了理论依据。牙鲜ＴＲＡＦ６基因ｃＤＮＡ全长１９５３

7、ｂｐ，包括１７１３ｂｐ的开放阅读框（ＯＲＦ），９ｂ’ＵＴＲ和’８１ｂ３ＵＴＲ，预测该基因编码５７０个。１５ｐ的５ｐ的気基酸利用在线软件分析了牙鲜ＴＲＡＦ６基因的蛋白结构域，包括Ｎ端的ＲＩＮＧ结构域，两个巧一－ｅｄ－ｃｏｍａｔｈ结指结构域，个环环（ｃｏｉｌｉｌ）ａ螺旋结构域Ｗ及离度保守的构域。一牙巧ＴＲＡＦ６与巨石斑鱼ＴＲＡＦ６的。系统进化树分析表明致性离达９１％，牙一近鲜ＴＲＡＦ６和半滑舌領ＴＲＡＦ６聚为支，亲缘关系最。对其调控区进行巧步的生物信息学分析，，预测存在丰

8、富的转录因子结合位点多为参与调控炎症反应的转录因子，预示了他们在免疫应答反应中的洽在功能。巧光定里ＰＣＲ结果湿，在肠示牙巧ＴＲＡＦ６基因广泛的表达于各组织中，但其表达皇存在显著的差异和也脏中有较裔的表达。ＴＲＡＦ６在肠等免疫器官中的高表达，与其在Ｔｏｌｌ样受体信号通路中的重要作用是一致的。对牙巧早期胚胎发育不同时期ＴＲＡＦ６基因的表达情况进行检测。结果站示，Ｔ民ＡＦ６基因在所有时期都有表化，包括未受精卵，提示了ＴＲＡＦ６基因的母源性表达。免疫分子母源性ｍＲ