变态期牙鲆(paralichthys olivaceus)基因及微小rna的转录谱分析

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1、■●学校代码：l0264研究生学号：M070102102上海海洋大学硕士学位论文题变态期牙鲆(ParaIichthysoIivaceus)基因及微小RNA的转录谱分析MRNA／MicroRNAgeneexpression英文题目：profileinmetamorphosingOliverFlounder,ParalichthysoHvaceus专业：水生生物学研究方向：鱼类发育生物学姓名：指导教师：谢彩霞鲍宝龙二0—0年五月十二日●㈣

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3、1llIIl㈣m舢1111l㈣lY1821748上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈

4、交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：彩时彩霞同期：矽／o‘年歹月I厶日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学

5、位论文。保密口，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密一学位论文作者签名：伽彩客指导教师签名：缸玄声日期：弘p年歹月f≯日日期：砂／口年歹月IiR●上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注苏锦祥上海海洋大学教授主席唐文乔上海海洋大学教授委员中科院上海生科院李胜植物生理生态研究研究员委员所委员龚小玲上海海洋大学副教授秘书水产与生命学院答辩地点答辩日期2010-6-12B105●■．1：海海洋人学硕I：学位论文变态期牙鲆(ParaIichthysoIivaceus)基因及微小RNA的转录谱分析摘要比目鱼类(鲽形目)的变态发育导致身体左右不对称的产生，是自然界中十

6、分奇特的现象。虽然甲状腺激素已公认是调控比目鱼类的变态发育，但甲状腺激素如何调控比目鱼变态导致的左右不对称产生，目前还不清楚。为了从基因组学的角度，筛选与左右不对称发育相关的基因，本研究论文调查了变态期牙鲆基因和microRNA转录谱，为下一步筛选相关基因奠定物质基础。目前还没有牙鲆变态期基因转录谱研究的报道，本研究构建了牙鲆变态发育期间的EST(表达序列标签)文库，并对文库进行了随机测序和序列分析。结果表明：一共进行了2193个成功反应，其中2149条ESTs为有效序列，初步拼接得到1049个单基因簇(Unigene)，其中包括264个重叠群(Contigs)，785个单拷贝EST(

7、Singletons)。使用BLAST软件将这些序列同GenBank等数据库进行比对、查询和注释，结果显示656条序列有相关同源性，其他的393(37．50A)条序列没有明显的同源性(E．values弋<1E．5)，是新发现的基因。鉴于许多miRNAs对生物疾病、生长、发育等各方面的调控作用，为了了解微小RNA(microRNAs；简称miRNAs)在比目鱼左右不对称发育中的可能作用，本研究克隆了牙鲆变态发育时期的miRNAs，分析测得的序列，获得23种miRNA，属于17种miRNA家族。其中19种序列与已知miRNAs相同，4种序列不与已知的任意一种miRNA完全相同，是牙鲆特有的

8、miRNA序列。此外，利用荧光实时定量RT-PCR，调查了这23种miRNAs在牙鲆变态发育过程中的变化。发现这些miRNAs在牙鲆变态发育前后都有表达，相比变态发育初期和高峰期(17、19、23DAH)，变态发育完成后(27DAH)‘大部分miRNAs的表达量都急剧下降。除了pol-miR一221，pol·miR-724外，pol-miR—l，pol—miR-7a，pol-miR-7j，pol—miR-7e／7f,pol-miR-9●，pol-miR-20c，pol-miR-21a，pol-miR-23c，pol-miR-125b，pol-miR-128，p01．miR．181a，p

9、01．miR．181e，p01．miR．181f的表达量呈现为逐渐降低趋势，暗示这些miRNAs可能与牙鲆变态发育过程的一系列变态事件有关；p01．miR．10b，po!一miR一23a，po!-miR-26a，pol·miR·130c，pol-miR-145，pol—miR一200a，po!一miR-429在17DAH与19DAH时表达量变化不明显，但在23DAH时显著升高，27DAH时I●j：海海洋人学顾．J：学位论文又明显下降。表明这些m