褐牙鲆（paralichthys olivaceus）trx1，trp14 和prx1基因的克隆、表达和转录水平的免疫刺激反应

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1、义々儀）呼ＯＣＥＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＨＩＮＡ硕±学位论文ＭＡＳＴＥ民ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ巧牙鲜Ｔｒｘｌ，ＴＲＰ１４和Ｐｒｘｌ论文题目：基因的克强、表达和转录水平的免巧刺激反应ＩｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏＴｒｘｌＴＲＰ１４ａｎｄＰｒｘｌｈｏｍｏｌｏｓｏｆ，ｇ戶．。ｒａ／／ｃ片／旬＂ｏ／／ｖ幻ｃｅｗｊ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｒｏｆｉｌｅｓａｎｄ：ｒａｎｓｃｒｉｎａｌｓｅｓｍｕ英文题目ｔｐｔｉｏｒｅｓｐｏｎ化ｉｍｍｕｎｅｓｔｉｌａｔｉｏｎ作妻：袁俊育指导教师：张全启

2、教授学位类别：学术硕±学位专业名称：海洋生物学硏究方向：海洋生物遗传学？解苗口谨心乂此论文献给我攀爱的家人和我敬爱的导师袁俊青猜ｉ牙妈（Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓｏｌｉｖｃｉｃｅｕｓ）Ｔｎｃｌ，ＴＲＰ１４賊Ｐｒｘｌ基因的克隆、表达和转录水平的免疫刺激反应学位论文完成Ｕ朋：指导教师签字：答辩委员会成员签字：处义广独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或

3、撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其化教育机构的学仿或证书伸用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名■：例签字日期：Ｊ句ｙ年月曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意下事项：１．学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。２．学校可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，采用影印＂、缩印或扫描等复制手段保存、汇

4、编学位论文。同时授权清华大学中国学术期刊＂（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：側导师签字；签字日期：１〇１＞年ｙ月立日签字円期：年月日＾褐牙鱼平片认於６＞／／ｖａｃｅｗ５）７＞；ｃＡ７７Ｗ／斗和尸基因的克隆、表达和转录水平的免疫刺激反应摘要ｃｅｗ一褐牙鲜（ｆａｒａ化嚇岭Ｓｏ／ｚＶａ）是种非常珍贵的经济鱼类，随着养殖规模的扩大化，养殖中面临的鱼类疾病感

5、染问题愈发严峻。为了更好地找到解决问。题的办法，了解鱼类的免疫机制是很必要的本文主要是研究了Ｈ个褐牙鲜抗氧化相关基因硫氧还蛋白１基因（俯ｏｒｅ沈／，尸、硫氧还蛋白相关蛋白－１（成《／１４化７７？尸八）和过氧化物酶基因化厂〇；？６，尸ｏ／Ｖｊｃ／）基因的基因序列信息和各组织、不同发育时期的表达差异，及在接受免疫刺激的条件下，表达模式会有何变化。本研巧采用ＲＡＣＥ（ＲａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎｄｓＲＡＣＥ）化７ｈｘ７、尸０７７？／Ｖ斗基因的ｃＤＮＡ全长，，技术克隆得到并运用各种生物信息学软件对序

6、列信息进行分析和预测，预测了所编码相关蛋白的基本信息－ＰＣＲ、进行了物种间同源性的分析，并构建了各物种间的进化树。ＲＴ法分析了尸ｏｒｒｘＡ基因在成体鱼八个不同组织和十四个不同胚胎发育时期的表达差异。同时建立了褐牙解肝脏细胞原代埼养系统，分别用ＬＰＳ、ＣｕＳ０４＊和ＨＯＴ－ＰＣＲ刺激肝脏细胞，然后用Ｒ法分析免疫刺激前后Ａ）７＞；ｃ／、尸〇７７？尸２２和尸〇尸ｒｊｄ基因的表达模式有何变化。研巧成果作如Ｋ分述：、ｒｘ；ｃ１ｆｏｒ基因全长ＤＮＡ的克隆和表达分析运用ＲＡＣＥ技术克隆得到价７＊＞ｊｃｙ基因ｃＤＮＡ全长为７２３ｂｐ，其中包括

7、３６６ｂｐ’’的开放阅读框－ＵＴＲ５－（ＯＲＦ）、３２４ｂｐ的３和３３ｂｐ的ＵＴ民。预测该基因可编，理论分子量为Ｉ５，理论等电点为５．。码１２１个氨基酸．ＷｋＤａ３９ＯＲＦ中具有７＞；ｃ；基因典型的保守区ＣＧＰＣ。同时分析了Ｔｒｘｌ在不岡物种之间的相似性，其中ＰｏＴｒｘｌ（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓｓｅｍｉｌａｅｖｉｓ）＾（Ｏｐｌｅｇｎａｔｈｕｓｆａｓｃｉａｔｕｓ）一７ｈ３ｃ－和松江妒（／？／冰ｎｗｗ知沁讯ｗ）的致度分别为：６０％、６７％和６１％。ＲＴＰＣＲ法检测显示ｆｏＴＶｘ／在成体鱼八个姐织中都有表达，尤其在小肠中的表达

8、量最高，其次为肾脏、、屯脏、肝脏、脑和觸，在肌肉姐织中的表达量