沙门菌的分离鉴定及其氟苯尼考耐药机制的研究

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2、—、－巧．－．黄凯．，一，＾一？、＾二＇－－．？、－、＜户？＇指导教师姓名：彭大新教授，扬州大学，江苏扬州，２２５００９：；？－＼Ｎ：泣苏扬州、！陆素娟副救＾爱，扬州大学，，２２５００９；＇刘秀悲教授，扬州大学，江苏扬州，２２５００９申请学位级别＞；硕壬学科专业名称：预防兽医学；４＾？曰论文提交日期；２０１５年５月论文答辩日期；２０１５年６月２，＾６月３０日学位授予单位；扬州大学学位授予日期：２０１５年：＾，：ｒ答辩委员会主席；叛亚斌研究買Ｊ：：—－心一‘，

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4、学上具有重要意义的人畜共患病原菌。在世界各地的食物中毒病例中，沙口菌引起的中毒病例占首位或第二位，严重威胁着人类的身体健康和畜牧业的健康发展。目前许多发达国家诸如美国都己建立了相对完善的沙口菌流行病学监测和耐药监控体系，流行病学数据较为丰富，同时也开展了较深入的耐药机制研究，而我国在这方面的研究还比较滞后。为了了解动物沙口菌的流行情况和药物敏感性，Ｗ及对氣苯尼考的耐药机制。本研究对临床上疑似沙口菌病的病料进行病ＰＣ艮－１、原分离和细菌的多重鉴定，选取临床分离株Ｓ０１０２２０６０５Ｅ２Ｈ，并针对方０乂、公两个耐药基因，采用＾Ｒｅｄ

5、同源重组法构建相应的基因缺失株，初步探讨了送两一个耐药基因与氣苯尼考耐药的关系，为进步深入研究沙口菌氣苯尼考耐药的分子机制奠定了基础。１．沙口菌的分离鉴定及耐药性分析对临床上疑似沙口菌病的病料进行病原分离和细菌的多重ＰＣ民鉴定，共分离到沙口菌６１株，其中肠炎沙口菌１０株，鸡白额沙口菌１２株，鼠伤寒沙口菌３９株，月份？－分布显示，７８月分离率最高Ｂ法测定分离株对２３种抗菌药物的敏感性Ｗ及部分。Ｋ药物的ＭＩＣ结果显示，，所有菌株对青霉素动物源沙口菌耐药性总体呈现上升趋势、红霉素、万古霉素耐药，９化１６％对６种及其Ｗ上抗菌药耐药。

6、选择氣苯尼考耐药菌株扩増ｆｌｏＲ、ｆｅｘＡ、ｆｅｘＢ等基因，结果显示，８株携带ｆｌｏＲ，其他基因未检测到，对克隆的ｆｌｏＲ基因的核昔酸序列进行分析，与Ｇｅｎｂａｎｋ中已报道动物源性沙口菌／７〇欠基因．？？１０％核昔酸序列比较，发现同源性在９９．３％０９９．２％１００％，，氨基酸序列的同源性在分别在１４７、１６０、２２８、２９３位发生了氨基酸的替代。ｎ扬州大学硕±学位论文２．氣苯尼考相关耐药基因缺失株的构建及其耐药表达研究选取都柏林沙口菌Ｓ－７〇１０１０２２、鼠伤寒沙口菌０６０５Ｅ２Ｈ，针对不同耐药基因灰、＿／度，使用ＷＲ

7、ｅｄ同源重组法，构建６个耐药基因缺失株，ＰＣ民扩増Ｗ及突变株序列测序结果显示一６个基因突变株构建成功。采用第章中的方法测定相应缺失株的药物敏感性，其结果显示缺失株对氣苯盾考的耐药性成功丢失。细菌的生长曲线测定结果显示，双基因缺失株的生长速度略慢于致生株，其余菌株的生长速度并无明思差异。采用－ＰＣ民方〇瓜度Ｑ法对刀耐药基因的表达进行了测量，结果显示，缺失株无论是？公的表达量会呈现不同，，＾Ｃ否氣苯尼考的选择压力下，程度的増加添加ＣＣＣＰ后Ｔ公的表达量并没有显著差异；而Ａｔ公缺失株在ＣＣＣＰ的选择性压力下，典诚的表达量却一？及的表达

8、对外界环有了定程度的升高，证明境改变（尤其是抗生素）有着相关程