文蛤4个生长相关基因克隆、时空表达及与生长的相关性分析

《文蛤4个生长相关基因克隆、时空表达及与生长的相关性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、浙江万里学院硕士专业学位论文题目：文蛤4个生长相关基因克隆、时空表达及与生长的相关性分析Title:Cloning,SpatiotemporalExpressionandAssociationAnalysisof4GeneswithGrowthTraitsinHardClamMeretrixmeretrix研究生姓名：高晓艳校内导师：林志华研究员校外导师：尤仲杰研究员专业学位类别：工程硕士专业学位领域：生物工程所在学院：生物与环境学院论文提交日期2015年12月31日中图分类号：Q785；S968.3

2、单位代码：10876学号：2013881012密级：公开浙江万里学院硕士专业学位论文题目：文蛤4个生长相关基因克隆、时空表达及与生长的相关性分析Title：Cloning,SpatiotemporalExpressionandAssociationAnalysisof4GeneswithGrowthTraitsinHardClamMeretrixmeretrix研究生姓名：高晓艳校内导师：林志华研究员校外导师：尤仲杰研究员专业学位类别：工程硕士专业学位领域：生物工程所在学院：生物与环境学院论文提交日期

3、2015年12月31日文蛤4个生长相关基因克隆、时空表达及与生长的相关性分析论文作者签名:指导教师签名:答辩委员会主席：上海交通大学张雪洪委员1：宁波市海洋与渔业研究院吴雄飞委员2：浙江万里学院杨季芳委员3：浙江万里学院王忠华委员4：浙江万里学院杨震峰答辩日期：2015年12月24日浙江万里学院硕士专业学位研究生学位论文摘要摘要文蛤（MeretrixmeretrixLinnaeus）是我国沿海水产养殖的重要经济贝类，具有较高的营养价值和药用价值，深受沿海地区居民的喜爱。随着文蛤人工育苗技术日益成熟，文

4、蛤养殖业呈快速发展趋势，与此同时产业发展对良种的需求愈加迫切。由于文蛤遗传育种研究工作起步不久，需要加强文蛤分子遗传基础研究加快功能基因开发的进程和分子育种实践。本研究根据文蛤转录组文库的注释信息，检索到了4个与生长相关基因的EST片段，包括GRB2、HDAC1、MSTN和α-淀粉酶基因。利用RACE和qRT-PCR技术对该4个基因进行克隆和表达分析，在GRB2和HDAC1基因的外显子区域筛选与生长相关的SNP位点，并比较分析了α-淀粉酶在四种壳色（暗纹、细纹、白壳和红壳）文蛤中的mRNA表达差异和酶

5、活活力差异，研究它们与生长的密切关系，筛选可作文蛤良种选育的候选基因，为文蛤分子遗传育种研究提供基础资料。主要研究结果如下：1.利用SMARTRACE技术扩增得到了文蛤GRB2（Mm-GRB2）基因的cDNA全长序列，对其生物信息学、组织及发育阶段表达特征进行了分析，并利用直接测序方法在外显子中筛选SNP位点。结果显示，Mm-GRB2基因cDNA全长1791bp，开放阅读框669bp，编码223个氨基酸，蛋白由SH-SH2-SH33个结构域组成；氨基酸序列比对发现，Mm-GRB2与泥蚶的同源性最高，达

6、到65.6%，与脊椎动物的同源性都在60%以上，说明Mm-GRB2基因在进化过程中比较保守。qRT-PCR结果表明，Mm-GRB2在文蛤6个组织和10个发育时期中均有表达，但不同组织间的表达量并没有显著差异；发育时期中的表达量呈现逐渐升高的趋势，在壳顶幼虫时期达到最高，之后表达量又有所降低。SNP位点的筛选结果表明，在Mm-GRB2基因的外显子区域共发现16个SNP位点。2.获得了文蛤HDAC1（Mm-HDAC1）基因的cDNA全长序列，该序列长3065bp，开放阅读框1599bp，编码532个氨基酸

7、；氨基酸序列比对发现，文蛤与其他物种同源性为74.3%-78.7%。荧光定量PCR(qRT-PCR)结果表明，Mm-HDAC1基因在文蛤6个组织中均有表达，其中外套膜中的表达量相对最高，并与其他组织间有极显著差异（p<0.01）；不同发育时期的表达差异结果表明，Mm-HDAC1基因在壳顶幼虫期表达量最高，显著高于其他发育时期（P＜0.05）。SNPI浙江万里学院硕士专业学位研究生学位论文摘要位点筛查结果表明，在Mm-HDAC1基因的外显子区域发现了19个SNP位点，其中有3个SNP位点（627A>T、

8、924T>C和1266T>C）与文蛤生长相关。3.获得了文蛤MSTN（Mm-MSTN）基因的cDNA全长序列，序列全长2265bp，开放阅读框1671bp，编码557个氨基酸，具有19个氨基酸组成的信号肽。氨基酸序列比对结果显示，文蛤与栉孔扇贝的同源性最高为72%。qRT-PCR结果表明，MSTN基因在文蛤6个组织中均有表达，其中闭壳肌中表达量最高，并与其他组织之间存在显著差异；不同发育时期结果表明，MSTN在担轮幼虫中表达量最高，并与其他时期之间有显著