恩度对顺铂耐药卵巢癌肿瘤血管生成及正常化的实验研究

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1、＊Ｓ＂■￣——Ｌ＾＿ｉ——分类号：密级：硕±研究生学位论文恩度对顺猶耐药卵巢癌肺瘤血管生成及正常化的实輪研究＊．：二—专业：担产科学研究方向：妇科肿瘤硏究生；邱歸琪指导教师；易村健教授论文起止日期：２０１４年６月至２０１５年３月＊分类号：密级：ｎ：）：１硕±研究生学位论文恩度对顺锦耐药卵巢癌肿瘤血管生成及正常化的实验研究专业：妇产科学研究方向：妇科肿瘤研究生：邱統琪指导教师：易村健教授论文起止日期：２０１４年６月至２０１５年３月Ｅ’ｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳ

2、ｔｕｄｙｏｆＥｎｄｏｓｔａｒｓＥｆｆｅｄ；ｏｎＴｕｍｏｒＶｅｓｓｅｌｓＡｎｇｉｏｅｎｅｓｉｓａｎｄＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎｇＭａｏｒ：ＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｎｅｃｏｌｏｊｙｇｙＤｉｒｅｃｔｉｏｎｏｆＳｔｕｄｙ：ＧｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙＧｒａｄｕａｔｅＳｔｕｄｅｎｔ：ＹｕｑｉＱｉｕＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ；Ｐｒｏｆ．ＣｕｎｉａｎＹｉｊＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＹａｎｇｔｚｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＪｕｎｅ２０１４ｔ；ｏＭａｒｃｌｉ２０１５，，摘要目的卵巢癌因其早

3、期即可发生盆腔、腹腔内种植转移及淋己结转移，临床症状不明显一，发病机制复杂，恶性趕度高等原因，死亡率直居于妇科肿瘤之首，严重威胁妇女的生命健康。尽管治疗上经历了手术及放化疗，但复发率却高达６０％，一。且复发后大部分患者对作为线化疗药物的顺钻产生耐药，致使预后极差因此有必要寻找一种新的有效的治疗方法，全面提高卵巢癌患者的总体生存率，改善患者的生活质量。卵巢上皮性癌同其他各种实体瘤一样，其生长为血管依赖性的。肿瘤的发展依靠新生血管为其供应养料和氧气，同时又通过新生血管不断向四周及远处运送肿瘤细胞，致使肿瘤转移。于是，如果能有效的抑制新生血管的生

4、成，就可Ｗ运到抑制肿瘤发展及转移的目的。肿瘤血管结构的异常也会导致血管功能的异常。肿瘤血管由于具有不完整性，可导致血流寨乱，无效循环增加，肿瘤血流在时间及空间上形成异质性，最终引起的肿瘤血流的动态变化可直接影响肿瘤微环境的代谢，主要表现为缺氧和酸中毒。而低神及酸中毒互为因果，不断加剧，最终导致化巧药物输送的减少Ｗ及放疗抵抗。所Ｗ，能否使异常的肿瘤血管趋近正常，继而可更有效的将氧气及药物输送到肿瘤细胞，进而提高治巧效果？恩度是一种可溶性的抗血管生成的新式抑制剂，能选择性的抑制血管内皮细１＂、胞的增殖迁移及血管构成。已有研究阐明，抗血管生成药物可使

5、肿瘤血管呈现？一暂时的正常化。本研究实验分为两部分：、通过观察恩度对沈０Ｖ３／孤Ｐ肿瘤细胞上清液诱导的ＨＵＶＥＣｓ增殖、迂移及成营的作用，探讨恩度对巧巢癌肿瘤新生血管的影响；二、在成功建立的卵巢癌裸小鼠原位移植模型上观察恩度使肿瘤血管＂＂正常化的时间窗。一孤方法第部分；ＳＫ０Ｖ３／孤Ｐ肿瘤细胞上清液的制备；培养徘０Ｖ３／Ｐ细胞，当其酷汇度至７０－４０？ｒ８０％时血清ＲＰＭＩ１６２４ｈ，换Ｗ无培养基，继续培养，离必收－，０％ＦＢＳ的ＲＰＭＩ１６４０＞集上清将其与含１培养基１＾１１：４混合备用。ＭＴＴ法观察恩度—－７６—５－４－３２ｉ０〇浓度为１

6、，１，１０，１〇，１〇ｎｒｍｇ／ｍｌ时涨０Ｖ３／抓Ｐ肿瘤细，及１矿，药物对胞上清液诱导的抓ＶＥＣｓ增殖作用的影响。时间设定为２她，４８ｈ，７化兰个点。细Ｉ胞划痕实验观察恩度对沈０Ｖ３／抓Ｐ肿瘤细胞上清液诱导过的册ＶＥＣｓ迂移的影响。细胞在６孔板中融合度达到９０％后１Ｘ地，用２０１１的枪头垂直划痕Ｓ，用Ｉ冲洗漂－６－４－２浮细胞。设定恩度浓度为１〇，１〇，ｌ〇ｍｇ／ｍｌ，继续于无血清ＲＭＰ＾１６４０培养基中解育６小时后，直接在倒置相差显微镜下拍照。使用Ｉｍａｇｅ！软件巧幢两端细胞的间距，计算迁移率，绘制图表，用ＳＰＳＳ１８．０进行统计学

7、分析，比较各组迁移情况。成管实验观察恩度对沈０Ｖ３／ＤＤＰ肿瘤细胞上清液诱导过的抓ＶＥＣｓ在血管形成’中的影响ｔｒｉｇｅｌ９６，５０ｉｉ１３７Ｃ培。待化完全呈流动液态后铺孔板毎孔，置于５养箱放置３０ｍｉｎ使之凝固。计数调节ＨＵＶＥＣｓ细胞至ｌＸｌ〇个／ｍｌ，设立对照孔，４－－２’４地后于倒置显使恩度终浓度分别为１〇，１〇，ｌ〇ｍｇ／ｍｌ，巧Ｃ恒温箱中继续解育Ｉ。ｍａｅＪ微镜下察看血管形成情况并拍照使用ｇ软件测量细胞成管的长度，计算在不同浓度恩度作用下抓ＶＥＣｓ的成管率，绘制