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《低剂量顺铂节律化疗抗血管生成作用的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、低剂量顺铂节律化疗抗血管生成作用的实验研究：牟坤沈方臻肖文静李明君【摘要】目的探讨低剂量顺铂节律化疗对体内外血管生成的抑制作用。方法采用MTT法检测低剂量顺铂节律化疗对人脐静脉内皮细胞HUVECs、人肝癌细胞株HepG2增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞周期观察其对HUVECs、HepG2生长的影响；采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察其对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制作用。结果低剂量顺铂（7.5～750.0μg/L）持续作用24、48、72h,对HUVECs具有抑制增殖作用，且在7.5～750.0μg/L范围内呈现剂量和时间依赖性，
2、低剂量顺铂组的吸光度值明显低于对照组,差异有显著意义(F=14.57～285.44，q=3.50～7.63，P<0.05),且当顺铂浓度达到750.0μg/L时对内皮细胞HUVECs增殖抑制作用达到饱和。相同条件下,低剂量顺铂对人肝癌细胞株HepG2则未显示出抑制作用,实验组的吸光度值与对照组比较差异无显著意义(F=0.71～1.18，P>0.05)。流式细胞仪检测显示低剂量顺铂组处理HUVECs细胞48h后与对照组比较,随顺铂浓度增大，G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增多,其差异有显著性（F=6.44～12
3、.30,q=3.26～8.47,P<0.05）；低剂量顺铂组处理HepG2细胞48h后与对照组比较,各期细胞比例无明显改变，差异无显著意义(F=0.03～0.10，P>0.05)。低剂量顺铂持续作用对鸡胚尿囊膜的血管发生具有显著影响,低剂量顺铂组抑制百分率为（30.0±5.0）%～（50.0±5.0）%，与生理盐水对照组比较差异有显著性(F=259.04,q=7.76～38.80,P<0.05)。结论低剂量顺铂节律化疗体外有抑制血管内皮细胞生长、体内有抑制血管生成作用。【关键词】顺铂；药物疗法；新生血管化,病理性；绒
4、毛尿囊膜20世纪70年代初,FOLKMAN[1]提出通过抑制肿瘤新生血管的生成来抑制肿瘤的生长,为肿瘤的治疗开辟了新的思路。近几年研究显示，持续或高频率给予比最大耐受剂量(MTD)小得多的单次剂量更有效,不仅能降低毒性反应,而且能提高抗肿瘤效果[2]。此外,这种方案适合与靶向药物及毒性相对低的抗癌药物合用。最新的定义将此称为“节律化疗”,即高频率甚至每天1次给予比MTD低得多的化疗药物,且不伴较长的间歇期。顺铂为一含铂无机络合物，抗瘤谱广、疗效高，具有与多种抗癌药协同作用的优点，是常用的化疗药物，但其毒副作用较大，大剂量、多疗程应用可
5、引起体质量下降及肝脏、肾脏毒性等，并可成为不可逆损伤，其是否有抗血管形成作用目前国内外少见报道。本研究探讨低剂量顺铂节律化疗对体内外血管生成的抑制作用,为临床上应用低剂量顺铂抗肿瘤血管生成治疗提供实验依据。现将结果报告如下。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1细胞株及细胞培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)由美国Sciencecell公司生产，使用含体积分数0.10FBS、100kU/L青霉素、100mg/L链霉素的ECM条件培养基常规培养,第4～6代细胞用于实验。HepG2细胞系本实验室常规培养，使用含体积分数0.10FBS
6、、100kU/L青霉素、100mg/L链霉素的DMEM培养基常规培养。受精培养基由美国Sciencecell公司生产；DMEM培养基和胎牛血清(FBS)由兰州民海生物工程公司生产;注射用冻干型顺铂，购自齐鲁制药有限公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)、甲基纤维素系Sigma公司产品；二甲基亚砜(DMSO)由武汉博士德生物工程有限公司提供。 1.2实验方法 1.2.1细胞增殖抑制试验(MTT法)[3]收集对数生长期的HUVECs及HepG2细胞，以0.5×104/mL分别接种于96孔培养板,于37℃、含体积分数0.05的CO2饱和湿度培养
7、箱中培养,24h后换入顺铂浓度分别为7.5、75.0、750.0、7500.0μg/L含药培养液,对照组用不含药物的培养液换液,然后移至37℃恒温、含体积分数0.05的CO2饱和湿度培养箱中继续培养，24、48、72h后各取出一块培养板,每孔加入5g/LMTT20μL,继续培养4h后,取出96孔培养板，1000r/min离心5min后,弃孔内培养液。每孔加入150μL的DMSO,振荡10min,酶标仪测定570nm波长处的吸光度值(A值),细胞存活率=药物实验组A值/细胞对照组A值×100%。 1.2.2细胞周期分析收集对数生长期H
8、epG2细胞及HUVECs,以1×109/L细胞浓度10mL接种于100mL培养瓶中,孵育24h。按实验分组分别加入相应药物,继续培养48h后取出各组细胞一瓶,离心,预冷PBS(pH7.40)洗2次。将经PBS洗后的细胞
