大肠杆菌耐药性筛选及艾叶、升麻对环丙沙星耐药性消除的研究

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1、擊分类号：单位代码：１０４４１密级：学号：２０１２０２０５７〇气＇ｍｍ＿＂－．Ｍ，３聲、資中（Ｉ爲文ｆ＾＾＇＾？ｔ＊．ｉＴｉｊ，＾ｒ％Ｗ．Ｔ｜｜ｊ…｜贺招硕±？文。麵。版：气。＾麟中文题目大肠杆菌耐药性筛选及艾叶、升麻对＾‘环丙沙星耐药性消除的硏究央文题目？：ＳｃｒｅｅｎｉｎｇＥｃｏ山ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈ！：〇ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｅｆｆｅｃ化ｏｆＡｒｔｅｎｗｓｉａｅ沈ｒｉ之ｇｇｙ，聲＂＂？扣與戀Ａ气打ｉｉｉｉａｅＡｅｒａ舶访化ａｏｎｒｅｓｉｓ

2、ｔａｎｃｅｏｆ：Ｅ．ｃｏＷｔｏｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ私戸聲＼邱申请人姓名李晓柳入学年月２０１２年９月学科专业生药学指导教师徐慶川教授学位类型医学科学学位？２０巧年５月４日＊一／原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立完成的，。文中除注明引用的内容外，不包含任何其他已经发表的科研成果对本文研究做出重要贡献者，均已在文中Ｗ明确方式表明。本声明的法律责任完全由自己承担。－’＞＇ｉ、论文作者答名导师絶名＾？＾》；爲碑１日期／！关于学位论文使用授权的声明学校保

3、本人完全了解山东中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意留或向国家有关部口机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权山东中医药大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容和汇编入编本有学关位数论据文库进行检索，可＾文采用影印、缩印或其他复印手段保存。（保密论文在解密后应遵守此规定）＂如化．论义作者游名；｜碱／哪导师篇名务著Ｉ日期提要目的：调查山东省部分地区鸡源大肠杆菌（Escherichiacoli，E.coli）耐药表型及血清型分布状况，并研究艾叶、升麻提取物对耐环丙沙星大肠杆菌耐药性的消除作用，减少耐药性的传播，进一步加

4、大对中药的综合开发利用。方法：采用鉴别培养基，革兰氏染色，生化鉴别等方法，分离鉴定2008-2012年来自山东济南、潍坊、烟台、德州、济宁地区大肠杆菌96株，并采用K-B法检测菌株对23种常用抗生素的耐药性，确定菌株的耐药表型，通过玻片凝集反应，确定菌株血清型。采用试管稀释法检测环丙沙星对30株耐环丙沙星大肠杆菌的最小抑菌浓度（Minimalinhibitoryconcentration，MIC），挑选对环丙沙星耐药性强的菌株及人工诱导耐药菌株作为本次试验的受试菌株。选择体内外抑菌效果好的艾叶、升麻作为耐药消除剂。观察中药消除剂以1/2MIC，1/4MIC，1

5、/8MIC，作用时间为24h，48h对受试菌株的耐药消除作用，采用影印培养法观察耐药消除率，耐药表型变化，并提取受试菌质粒，进行琼脂糖凝胶电泳，观察艾叶、升麻提取物对耐环丙沙星大肠杆菌质粒的消除情况。并通过受试菌株质粒转化抗性筛选，初步探讨菌株耐药消除机制。本次试验以SDS为阳性对照，以菌株自然传代10代为阴性对照，与中药不同提取物消除效果做对比。结果：山东省部分地区鸡源大肠杆菌耐药表型调查结果显示，大肠杆菌对23种抗生素均体现出不同程度的耐药性，且出现多重耐药性，其中对喹诺酮类耐药性已相当严重，对环丙沙星耐药率甚至已达到了77.08%，而且在不同地区，不同年

6、份菌株的耐药率还在不断升高。96株大肠杆菌血清型多集中在024，015，018，这三种血清型为山东省部分地区的流行血清型。根据体内外抑菌单味中药筛选结果表明，艾叶，升麻水煎液能产生有效的抑菌效果，为本次试验中药消除剂。人工诱导标准菌株耐药的结果是环丙沙星对标准菌株的MIC上升到10µg/ml。艾叶、升麻提取物以1/2MIC，1/4MIC，1/8MIC对受试菌分别作用24h，48h。中药消除剂对受试菌株均有一定耐药消除作用，但是对耐药表型影响不明显均处于耐药范围内，未恢复菌株的敏感性。艾叶和升麻提取物对不同菌株有一定的消除质粒作用，但是根据质粒转化试验结果判定受

7、试菌株的耐药性产生不一定是由质粒介导的，提示我们主导耐药性消除的途径可能与质粒无直接相关性，可能是由其他多种消除机制调控产生的。结论：本试验结果显示山东省部分地区大肠杆菌已出现严重耐药性，并提示艾叶和升麻对耐环丙沙星菌株有一定的耐药消除作用，具有作为临床大肠杆菌耐药性消除剂的潜力。关键词耐药性；大肠杆菌；环丙沙星；耐药消除；艾叶；升麻ScreeningE.coliresistanceandresearchtoeliminatingeffectsofFoliumArtemisiaeArgyi,RhizomaCimicifugaeonresistanceofE.c

8、olitoCiprofloxacinS